乳腺癌内分泌治疗耐药相关机制的研究进展

内分泌治疗作为雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性乳腺癌的主要治疗方案被广泛应用。他莫西芬(tamoxifen,Tam)是乳腺癌内分泌治疗最常用的药物,它通过与雌激素竞争性结合ERα来降低雌激素的生物学活性,抑制细胞的增殖,从而治疗乳腺癌。然而,肿瘤细胞所表现出的原发性或获得性的他莫西芬耐药使得其临床应用受到了限制,寻找克服他莫西芬耐药的治疗策略已经刻不容缓。目前为止,他莫西芬耐药的相关机制已部分明确,但仍需进一步研究。有证据表明ERα、生长因子受体信号通路及microRNA的表达异常等多种机制均与他莫西芬耐药有关。本文对他莫西芬耐药的相关机制进行了具体分析,以期为ER阳性乳腺癌的治疗提供新思路。

细胞外囊泡与肿瘤相关性的研究

细胞外囊泡是细胞间信号传递的新方式,在生理或病理条件下皆发挥重要的调节作用。细胞外囊泡根据直径、形态学的不同,可分为外泌体和微囊泡。细胞外囊泡中具有多种内容物,并具有将其内容物传递给受体细胞、调节受体细胞生物学行为的能力,因而受到广泛关注。大量研究表明,细胞外囊泡可促进肿瘤细胞的生长、介导上皮间质转化、增强肿瘤远处转移能力及诱导耐药的作用。此外,细胞外囊泡具有广泛的临床应用前景,在肿瘤的早期诊断、作为核酸药物载体及预测肿瘤治疗预后等方面皆崭露头角,具有独特的临床应用价值。

利用FILM膜进行透射电镜染色的方法介绍

目前透射电镜的染色通常是利用硅胶板对切片进行枸橼酸铅和醋酸双氧铀的双重重金属染色。为避免污染,提高染色质量,染色后须对染色时使用的硅胶板等器材进行彻底清洗,以尽可能的减少铀、铅染液的残留,为下次染色做好准备,以保证观片效果。而实际工作中尽管尽力浸泡、冲刷,但由于硅胶条的缝隙细密,常常难以冲洗清洁彻底,因此或多或少都会伴有染液并清洁液残留,从而导致染色时产生铀。

透射电镜制样中铅盐染色效果的对比

随着电镜技术的日趋成熟,其应用于临床诊断和科研的范围更加广泛。而对超薄切片的理想染色是获得满意的电镜图像的前提条件。透射电镜染色通常采用铀盐和铅盐染色,而铅盐染色中常见的碳酸铅沉淀是造成切片污染,导致图像观察不理想的常见原因,并影响诊断结果。对此,笔者采用人工配制枸橼酸铅和成品柠檬酸铅分别进行铅染色,并对比其效果,经过两年多的实际应用,发现使用成品柠檬酸铅染色效果较为简单易行,且观察效果理想,现将方法介绍如下。

肿瘤相关巨噬细胞与卵巢癌相关性的研究进展

肿瘤微环境影响着肿瘤的生物学行为。近年来,肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在微环境中的作用越来越受到重视。根据表型和生物学功能,TAM可分为M1型和M2型,分别发挥杀伤肿瘤细胞的抑肿瘤作用和抑制免疫反应的促肿瘤作用。卵巢癌组织中以M2型TAM浸润为主,调控卵巢癌细胞侵袭、转移、血管生成和耐药等生物学行为。进一步研究发现这类巨噬细胞可作为肿瘤治疗的重要靶点,且与患者的预后密切相关。

原发中耳DEK::AFF2融合阳性非角化型鳞状细胞癌1例

本文报道1例原发中耳DEK::AFF2融合阳性非角化型鳞状细胞癌(nonkeratinizing squamous cell carcinoma,NKSCC)。患者女,66岁,右耳疼痛、听力渐进性下降1年余。分别取中耳和鼻咽部两处标本送检,肿瘤细胞均呈乳头状瘤样生长,部分合并内翻性生长,细胞呈非角化型鳞状上皮形态,轻-中度异型,上皮及间质内富于炎性细胞,仅局灶呈浸润性生长。免疫组织化学肿瘤细胞表达细胞角蛋白(CK)5/6、p40、AFF2。荧光原位杂交检测DEK基因断裂重排,逆转录-聚合酶链反应及Sanger测序结果示DEK::AFF2基因融合。分子病理的检测有助于正确诊断。

缺氧通过SIRT1调控结直肠癌细胞自噬

目的:探究缺氧调控结直肠癌细胞自噬的分子机制。方法:分别在常氧及缺氧(1%氧气浓度)条件下处理细胞,western blot检测细胞内沉默信息调节因子1(Silencing Information Regulator 1,SIRT1)及自噬相关标志分子的表达情况;慢病毒转染构建SIRT1稳定过表达或敲减细胞株,利用透射电镜观察细胞内自噬体形成的情况;使用m RFP-GFP-LC3双标腺病毒感染细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞自噬流的进展。结果:Western blot结果显示,缺氧条件下,HCT116及SW480细胞内SIRT1的表达水平随着缺氧时间的延长而降低,自噬特异性底物p62蛋白水平降低且LC3-I/II转换增加;与对照组相比,SIRT1过表达细胞内自噬特异性底物p62的表达水平升高而LC3-I/II转换受到抑制;相反在SIRT1敲减细胞内,p62的表达水平降低而LC3-I/II转换进一步促进。透射电镜结果发现SIRT1过表达后,细胞内自噬溶酶体形成减少、自噬体数量增多;激光共聚焦结果显示,SIRT1过表达细胞内绿色荧光淬灭减少、自噬体与自噬溶酶体的融合收到明显抑制,说明SIRT1通过抑制自噬溶酶体的形成,阻断自噬流的进展。结论:缺氧通过抑制SIRT1的表达促进结直肠癌的细胞自噬。

巨噬细胞对卵巢癌细胞血管细胞黏附分子1表达的影响及其机制研究

目的 探讨巨噬细胞对卵巢癌细胞血管细胞黏附分子1（VCAM1）表达的影响及其机制.方法 利用佛波酯、脂多糖将单核细胞THP-1激活成为巨噬细胞.酶联免疫吸附试验（ELISA）检测巨噬细胞上清中细胞因子水平,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测巨噬细胞上清对人类卵巢癌细胞HEY、IGROV1的VCAM1 mRNA水平的影响,蛋白质印迹法检测巨噬细胞上清对稳定表达VCAM1的细胞株HEY-VCAM1、IGROV1-VCAM1中VCAM1蛋白表达的影响;利用双荧光素酶报告基因检测巨噬细胞上清及细胞因子对人类胚肾细胞HEK293T VCAM1基因不同截短体的启动子转录活性的影响.结果 ELISA检测结果发现,与THP-1细胞上清相比,巨噬细胞释放的肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）及IL-12均升高（均P〈0.05）,IL-10下降（t=3.841,P=0.019）.巨噬细胞上清及1 ng/ml TNF-α能够上调HEY和IGROV1细胞VCAM1 mRNA水平,巨噬细胞上清能够促进HEY-VCAM1、IGROV1-VCAM1细胞VCAM1蛋白表达.与空载体（pGV354）对照组[（8.6±0.2）×10-3相对荧光单位（RLU）]相比,巨噬细胞上清上调HEK293T细胞VCAM1基因含有AP1的转录结合位点的-1641 bp至＋12 bp启动子报告基因荧光素酶活性[（109.4±3.4）×10-3 RLU;t=29.42,P〈0.001];与未经细胞因子处理的阴性对照组[（21.0±0.5）×10-3 RLU]相比,100 ng/ml TNF-α促进HEK293T细胞VCAM1的-1641 bp至＋12 bp启动子转录活性[（23.4±0.4）×10-3 RLU;t=4.134,P=0.001],150 ng/ml IL-6未影响此启动子转录活性[（21.4±1.0）×10-3 RLU;t=0.328,P=0.708],5 ng/ml IL-12抑制此启动子转录活性[（14.3±1.0）×10-3 RLU;t=6.390,P〈0.001].结论巨噬细胞促进卵巢癌细胞VCAM1的表达.其机制可能是巨噬细胞分泌的TNF-α等炎症因子影响含有AP1转录结合位点的VCAM1启动子区域,促进卵巢癌细胞VCAM1 mRNA表达.

血管细胞黏附分子-1对卵巢癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨过表达血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)对卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:构建过表达VCAM-1的慢病毒载体GV358-VCAM1+,转染人类卵巢癌IGROV1细胞株,利用嘌呤霉素筛选稳定表达VCAM-1的IGROV1细胞,通过倒置荧光显微镜下观察绿色荧光,确定细胞转染效率,Western blot及RT-PCR法确定卵巢癌细胞VCAM-1蛋白和m RNA水平;采用流式细胞仪检测过表达VCAM-1的IGROV1的细胞凋亡变化,western blot法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Casepase-3、Cleaved Casepase-3)以及STAT3、p-STAT3蛋白表达水平的变化。结果:成功构建的慢病毒载体GV358-VCAM1+在IGROV1细胞中的转染效率达到85%以上,转染细胞的VCAM-1蛋白及m RNA水平均呈稳定表达;VCAM-1过表达卵巢癌细胞的细胞凋亡显著高于空载体对照组(P=0.0149);Bax、Casepase-3、Cleaved Casepase-3表达水平均较对照组显著升高(P<0.01),Bcl-2、p-STAT3表达水平明显低于对照组(P<0.01),但STAT3表达水平无显著改变。结论:VCAM-1可能通过下调STAT3的磷酸化水平诱导卵巢癌细胞凋亡。

缺氧微环境SIRT1亚细胞定位对结直肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探究缺氧微环境SIRT1亚细胞定位对结直肠癌细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:将编码过表达野生型SIRT1以及核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)突变型SIRT1(SIRT1NLSmt)的慢病毒载体转染人类结肠癌HCT116细胞株,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达野生型SIRT1细胞株(LV-SIRT1细胞)和细胞质定位的NLS突变型SIRT1细胞株(LV-SIRT1NLSmt细胞),通过观察慢病毒载体编码的SIRT1-GFP融合蛋白的荧光定位,明确稳定转染细胞中外源性SIRT1的亚细胞定位。利用real-time PCR、Western blot法对分离提取的核-质蛋白进行检测,证实外源性SIRT1的表达和亚细胞定位情况。利用CCK-8细胞毒性实验、流式细胞术检测和TUNEL染色比较缺氧(1%O2)处理前后LV-SIRT1和LV-SIRT1NLSmt细胞存活或凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白p53、ac-p53(K382)、Bcl-2、Bax、caspase-3和cleaved caspase-3表达水平。结果:Western blot、real-time PCR和免疫荧光染色结果显示稳定转染细胞均存在外源性SIRT1的过表达,NLS突变可导致SIRT1NLSmt富集于细胞质中;与亲本细胞HCT116和LV-SIRT1NLSmt细胞相比,LV-SIRT1细胞对缺氧的耐受能力最差、细胞凋亡水平最高,凋亡相关蛋白p53、Bax、caspase-3、cleaved caspase-3表达水平显著升高,ac-p53(K382)和Bcl-2表达水平显著下降,且LV-SIRT1细胞的胞核ac-p53下降最为显著。结论:在缺氧微环境中,细胞核定位的SIRT1通过影响p53的去乙酰化水平促进结直肠癌细胞凋亡。