利用环介导等温扩增技术检测茶叶中掺杂的大豆成分

采用环介导等温扩增技术,建立了一种快速简便的检测茶叶中掺杂的大豆成分的方法。根据大豆内源基因序列,共设计了6条引物,通过环介导等温扩增技术(LAMP)扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性检测表明,所设计的引物对大豆成分的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示,LAMP方法比荧光PCR方法灵敏度高10倍。通过对反应温度、甜菜碱浓度、Mg2+浓度和d NTP浓度的优化,本研究建立起优化的反应条件,整个检测周期约1 h,检测结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定,可应用于大批量茶叶样本中掺杂大豆成分的检测。

百合无症病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立

百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)是侵染百合科植物的主要病毒之一。根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与荧光探针,建立了LSV的实时荧光RTPCR检测方法。利用该方法检测LSV的2个阳性样品,均能够得到典型扩增曲线,而在百合斑驳病毒、烟草环斑病毒、番茄环斑病毒等其他病毒阳性样品中没有典型的扩增曲线,表明了该方法的特异性。与普通RTPCR法相比,此方法灵敏度提高10倍。应用该方法,2012年6月至今,宁波出入境检验检疫局从荷兰进境的67批百合种球样品中检出53批百合无症病毒阳性,检出率为93%。

掺杂玉米茶叶的基因组DNA提取与PCR检测方法建立

根据玉米内源ZEIN基因建立了茶叶中掺杂玉米的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。结果表明,标准CTAB法适合提取茶叶样品基因组DNA,实时荧光PCR的灵敏度能达到0.1%,普通PCR能达到1%,实时荧光PCR是普通PCR的10倍。两种方法都能达到检测要求。

逆转录环介导等温扩增技术检测草莓潜隐环斑病毒的研究

采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了草莓潜隐环斑病毒(Strawberry latent ringspot virus,SLRSV)检测方法。根据SLRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过逆转录环介导等温扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明,引物对SLRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP的灵敏度比普通RT-PCR高出100倍。该方法无需特殊的试剂和设备,只需在水浴锅中65℃等温扩增,整个检测周期约1.5h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。

茶叶中掺杂小麦DNA的提取及检测方法的比较

为探索茶叶中掺杂小麦的快速检测方法,对3种不同的核酸提取方法(标准CTAB提取法、改良CTAB提取法和试剂盒提取法)进行分析比较,根据小麦内源GAG56D基因比较了茶叶中掺杂小麦成分的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。结果表明:最适合掺杂小麦DNA的方法为标准的CTAB提取法。扩增结果显示,针对理论DNA浓度的检测灵敏度,实时荧光PCR的灵敏度能达到0.1%,普通PCR能达到1%,实时荧光PCR是普通PCR的10倍。

番茄环斑病毒RT-LAMP检测方法的建立

本研究采用逆转录环介导等温扩增技术(Reverse transcription-loop-mediated isothermalamplification,RT-LAMP),建立了番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)检测方法。研究得到LAMP反应最佳条件,孵育温度和反应时间分别为65℃,30 min。分析RT-LAMP灵敏度试验结果表明,该方法灵敏度比普通RT-PCR高100倍。

南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒的研制

南芥菜花叶病毒（Arabis mosaic virus,ArMV）是我国对外公布的检疫性有害生物,其寄主广泛,极易传播、蔓延[1],因此,加强对该病毒的检测具有重要的意义。目前,针对ArMV的检测方法主要有DAS-ELISA和RT-PCR技术[2]。这两种方法在检测周期方面具有明显的优势,且操作简单,但对仪器的依赖性较强。