冠突曲霉flbD基因功能研究

冠突曲霉是茯砖茶上的优势菌,可通过渗透压调控获得纯的无性和有性阶段,是研究真菌产孢的好材料。flbD基因广泛存在于丝状真菌中,是调控丝状真菌无性孢子形成的关键基因。为了探究flbD基因在冠突曲霉(Aspergillus cristatus)发育阶段的功能,以冠突曲霉为试验材料,构建flbD基因敲除载体,利用根癌农杆菌介导转化,筛选得到flbD基因敲除菌株。通过对ΔflbD敲除株和野生型菌株的比较观察发现:野生型的分生孢子数量是敲除株的4.7倍,而子囊孢子数量相差不大;在不同渗透压培养基上,ΔflbD突变株的菌丝生长速率与野生型的没有明显差异,但是突变株会产生大量“棉花”状的气生菌丝;在高渗条件下,ΔflbD突变株分生孢子的产生有延迟现象。运用基因敲除技术检验了flbD基因在冠突曲霉的功能,结果显示flbD对冠突曲霉的无性产孢起正调控作用,敲除flbD基因将减少无性孢子的形成。此研究对开展冠突曲霉无性产孢的研究具有重要借鉴价值。

抗茶轮斑病病原菌(Pestalotiopsis trachicarpicola)生物农药复配组合筛选

【目的】探明对茶轮斑病病原菌(Pestalotiopsis trachicarpicola)联合毒力表现为增效作用的复配生物农药组合,为茶树茶轮斑病生物防控和茶产业的健康绿色发展提供技术支持。【方法】采用菌丝生长速率法,测试5种生物农药在不同浓度下对茶轮斑病的抑制率及EC_(50),筛选活性较高的中生菌素和四霉素按不同比例进行复配,并测定其对茶轮斑病的抑制率、EC_(50)、共毒系数及联合毒力。【结果】5种生物农药在100~6.75μg/mL浓度下对茶轮斑病的抑制率均随药剂浓度的减小而降低,且各浓度间均达极显著差异;5种生物农药对茶轮斑病病原EC_(50)以枯草芽孢杆菌最优,为4.07μg/mL。中生菌素和四霉素按不同比例复配的9组药剂中,以中生菌素∶四霉素=9∶1复配药剂对该病原的抑制率最高,为90.97%;EC_(50)最低,为12.03μg/mL;共毒系数最高,为310.51;联合毒力表现为增效。【结论】中生菌素∶四霉素为9∶1复配药剂的EC_(50)(12.03μg/mL)优于单一中生菌素(15.19μg/mL)和四霉素单剂(44.24μg/mL),活性增效明显,可参考用于茶园茶轮斑病生物防控。

生姜天然产物的提取及其对茶轮斑病的室内毒力强度

为筛选出对茶轮斑病病原菌(Pestalotiopsis trachicarpicola)抑制活性较好的天然产物,以凯里生姜为原料,二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和乙醇为溶剂,采用有机溶剂浸提和超声波辅助方法提取生姜中的天然产物,并利用菌丝生长速率法测定4种溶剂提取生姜天然产物对茶轮斑病的室内毒力强度。结果表明:4种有机溶剂提取生姜天然产物的产率为乙醇>甲醇>二氯甲烷>乙酸乙酯,产率分别为4.13%、2.62%、0.71%和0.45%。在200μg/mL浓度下4种溶剂提取生姜天然产物对茶轮斑病病原菌的抑制率以乙酸乙酯溶剂和二氯甲烷溶剂较好,分别为56.67%和43.33%,较对照药剂春雷霉素高26.67百分点和13.33百分点,且差异均达极显著。在不同浓度下,4种溶剂提取生姜天然产物对茶轮斑病病原菌的抑制率均随浓度下降而降低,且各浓度间差异均达极显著;二氯甲烷和乙酸乙酯溶剂提取生姜天然产物的EC 50分别为179.89μg/mL和150.46μg/mL,比对照药剂春雷霉素(370.47μg/mL)减少用药量190.58μg/mL和220.01μg/mL,即乙酸乙酯溶剂提取生姜天然产物的毒力强度最大。

5种生物农药对茶轮斑病病原的室内毒力强度

筛选对茶轮斑病病原(Pestalotiopsistrachicarpicola)抑制活性较好的生物农药,为茶园精准合理施药及替代化学农药防治茶轮斑病提供参考,采用菌丝生长速率法,在100μg/mL浓度下测试寡糖-乙蒜素、嘧啶核苷类抗菌素、丁子香酚、香菇多糖和申嗪霉素5种生物农药对茶轮斑病的抑制活性。结果表明:除丁子香酚外,其余4种生物农药的抑制率均优于对照药剂春雷霉素(18.70%),其中,以寡糖-乙蒜素最高,为78.74%;香菇多糖其次,为67.48%。寡糖-乙蒜素和香菇多糖的EC_(50)分别为25.32μg/mL和43.31μg/mL,分别比对照药剂春雷霉素(396.17μg/mL)减少用药量370.85μg/mL和352.86μg/mL。生产上防治茶轮斑病建议推广使用寡糖-乙蒜素。

大蒜天然产物的提取及其抗茶轮斑病活性

为茶树茶轮斑病(Pestalotiopsis trachicarpicola)的绿色高效防控提供参考,以威宁紫皮大蒜为材料,二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和乙醇为溶剂,采用溶剂浸提法提取威宁紫皮大蒜的天然产物;用菌丝生长速率法测定提取大蒜天然产物对茶轮斑病的抑制效果及毒力强度。结果表明:甲醇、乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷4种溶剂提取大蒜天然产物的产率分别为3.19%、1.61%、0.15%和0.22%。在200μg/mL浓度下4种溶剂提取大蒜天然产物对茶轮斑病病原菌的抑制率以二氯甲烷溶剂最高,为95.10%;乙酸乙酯溶剂其次,为91.64%。二氯甲烷、乙酸乙酯溶剂提取大蒜天然产物抗茶轮斑病的EC_(50)分别为31.58μg/mL和47.59μg/mL,比对照农药春雷霉素(382.08μg/mL)分别减少用药量350.50μg/mL和334.49μg/mL,即二氯甲烷、乙酸乙酯溶剂提取大蒜天然产物抗茶轮斑病的效果均优于春雷霉素,二氯甲烷溶剂提取大蒜天然产物的毒力强度最大。