鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的迁移与侵袭能力。结果显示,与相应阴性对照相比,转染TGFβ1过表达质粒可显著上调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著抑制MDCC-MSB1细胞的增殖,且使G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时增加细胞凋亡率,降低细胞的迁移与侵袭能力;转染TGFβ1干扰表达质粒可显著下调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著促进MDCC-MSB1细胞的增殖,G1期细胞减少、S和G2期细胞增加,同时降低细胞凋亡率,增加细胞的迁移与侵袭能力。结果表明,鸡TGFβ1可抑制MDCC-MSB1细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡。

降解纤维素凝结芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为筛选降解纤维素性能优良的芽孢杆菌,探究其生物学特性,采集不同地方的土壤作为样品,将其接种到羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基进行分离。观察菌株是否产生水解圈进行初筛,再通过检测滤纸酶活和纤维素酶活进行复筛。通过形态学观察、生理生化及16S rDNA测序对菌株进行鉴定,并对分离菌株进行胆盐、酸、人工胃液、高温的耐受能力测试及药敏试验。筛选获得了1株降解纤维素功能较强的菌株MRS-913,经鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。生物学性能试验表明:该菌株在100℃水浴中15 min存活率达54.0%;在质量分数为4%的胆盐中4 h存活率为32.8%;在pH1.0的酸液中4 h存活率为55.9%;在pH1.5和pH2.5的模拟胃液中3 h存活率分别为62.7%和74.8%。药敏试验结果表明:该菌株对青霉素、氟苯尼考和头孢曲松高度敏感,对杆菌肽、奥普托欣和林可霉素不敏感。因此,凝结芽孢杆菌MRS-913有望成为微生态制剂的候选菌株。

胆盐水解酶基因的克隆及其在干酪乳杆菌CECT5276中的分泌表达

本试验旨在克隆植物乳杆菌(L.plantarum)DPP8的胆盐水解酶(BSH)基因,并在干酪乳杆菌(L.casei)CECT5276中对其进行表达。通过PCR技术克隆L.plantarum DPP8的BSH基因,然后将该基因重组到L.casei表达载体pMJ67-sp中,获得了重组表达质粒pMJ67-sp-BSH,再将其电转化至L.casei CECT5276中,通过乳糖诱导BSH分泌表达。采用牛磺酸标准曲线法对表达产物的BSH活力进行测定,并采用邻苯二甲醛(OPA)法对其降胆固醇能力进行测定。结果显示:本试验获得了BSH基因的全长序列,为975 bp;同源性比较显示该基因与L.plantarum MBUL69的BSH基因的同源性为99.6%;进化树分析显示该基因与L.plantarum MBUL69的BSH基因处于同一分支。表达产物的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示获得了1条分子质量约为37 ku的蛋白条带,与推测的BSH蛋白分子质量大小相符。酶活力测定结果表明重组菌株在37℃、0.5%乳糖诱导36 h时,表达产物中BSH活力最高,可达42.57 U/mL。重组菌株在含2%胆固醇的MRS培养基中培养48 h后,胆固醇降解率为94.43%。综上可知,本试验成功克隆了L.plantarum DPP8 BSH基因,并实现了其在L.casei CECT5276中的高效分泌表达。