不同品牌ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中IL-8对比研究

目的 对比研究2种不同品牌ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中人白细胞介素-8(IL-8)水平情况。方法 不同浓度聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激A549细胞10、24 h,收集细胞上清液,共获得40份样本,分为1~10组,每组4份。采用2种ELISA试剂盒(试剂盒A、试剂盒B)检测细胞培养上清液中IL-8水平,对比2个试剂盒检测得到的组间数据或同组数据的一致性或差异性。结果 2种试剂盒拟合曲线中相关系数值分别为:0.999 600、0.999 602,检测标准品结果相关性良好。试剂盒B检测样品1、2组中IL-8水平比较,差异有统计学意义(P<0.01),但试剂盒A检测样品1、2组中IL-8水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);2种试剂盒检测样品8、9组及样品9、10组中IL-8水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。仅试剂盒B检测样品1、5组中IL-8水平明显低于试剂盒A,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 不同品牌ELISA试剂盒均可用于检测IL-8水平,但检测结果仍在一定程度上存在差异。为避免实验误差,研究中应尽量选择同一个厂家生产的同品牌试剂盒。

HMGN1激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导小鼠BV2小胶质细胞活化上调其促炎介质表达

目的 探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平。随后把小胶质细胞随机分成对照组、模型组、抑制剂组和拮抗剂组。模型组用500 ng/mL的HMGN1处理BV2细胞,拮抗剂组在模型组的基础上加入瑞沙托维(resatorvid)/TAK-242进行干预,使用实时定量PCR和免疫荧光细胞化学染色检测细胞中的M1/M2型标志物的表达情况,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制物激酶β(IKK-β)的蛋白表达。结果 HMGN1处理后,BV2细胞形态发生明显变化,呈阿米巴样;与0 ng/mL HMGN1组相比,TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 MCP-1的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高;M1型标志物iNOS的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高,M2型标志物CD206的水平随HMGN1剂量的升高而降低。与模型组相比,拮抗剂组M1型标志物iNOS的mRNA水平显著降低,M2型标志物CD206的水平显著升高。免疫荧光细胞化学染色结果也显示MI型标志物iNOS在拮抗剂组中的表达降低。Western blot的结果提示,拮抗剂组iNOS、 TLR4、 MyD88、 NF-κB p65和IKK-β的蛋白表达显著降低。结论 HMGN1可能通过激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导BV2小胶质细胞活化来上调其促炎介质的水平。

流行性乙型脑炎患者血清IgG抗体对乙脑病毒蛋白的识别

目的：了解流行性乙型脑炎病毒各蛋白成分在刺激机体免疫应答方面所起的作用，给亚单位疫苗研制提供理论依据，进行该项研究。方法：建立乙脑病毒免疫转印方法，应用该法检查乙脑病人血清IgG抗体对乙脑病毒蛋白的反应情况，分析正常人群中筛选出的乙脑病毒隐性感染者血清IgG对乙脑病毒蛋白的反应性，并比较二者的差异。结果：经检测，绝大部分病人血清IgG可识别E蛋白，部分病人尚可识别NS5，NS3，NS1蛋白，而隐性感染者血清IgG对98kd（NS5）乙脑病毒蛋白的反应性显著低于乙脑患者。结论：研究结果显示，E蛋白是乙脑病人血清IgG识别的主要蛋白，在免疫保护方面起着主要作用。隐性感染者对NS5蛋白的反应机率明显低于显性感染者，提示NS5蛋白在乙脑病毒的致病过程中起重要作用。

流行性乙型脑炎患者血清抗体对乙脑病毒蛋白的反应性及其应用

目的：了解流行性乙型脑炎病毒各蛋白成分在刺激机体免疫应答方面所起的作用，并在此基础上建立一种新的而且可供基层医疗卫生单位使用的乙脑快速诊断方法。方法：建立乙脑病毒免疫转印方法，应用免疫转印方法分析乙脑患者血清ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体对乙脑病毒蛋白的反应性，并比较免疫转印法与间接免疫荧光法检测乙脑ＩｇＭ抗体差异。结果：应用免疫转印方法检查８９例乙脑病人血清ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体对乙脑病毒蛋白的反应情况，发现绝大部分病人血清ＩｇＧ抗体可识别Ｅ蛋白，部分病人尚可识别ＮＳ５，ＮＳ３，ＮＳ１蛋白。说明Ｅ蛋白是乙脑病人血清识别的主要蛋白，在免疫保护方面起着主要作用。从正常人群中筛选出了４５例乙脑隐性感染者，分析隐性感染者血清ＩｇＧ抗体对乙脑病毒蛋白的反应性发现隐性感染者对ＮＳ５蛋白的反应机率明显低于显性感染者。而病人血清ＩｇＭ抗体主要识别Ｅ，ＮＳ５蛋白。免疫转印法检测乙脑ＩｇＭ抗体与间接免疫荧光法比较差异无显著性（χ２＝０５，Ｐ＞０．５），二者的阳性符合率为９５％，阴性符合率为７８．７８％，总符合率为９３．２５％。结论：乙脑病毒Ｅ蛋白是乙脑病人血清识别的主要蛋白，在免疫保护方面起着主要作用。运用免疫转印法检测乙脑ＩｇＭ抗体可早?

河南省首次从蚊体中分离出乙型脑炎病毒

河南省首次从蚊体中分离出乙型脑炎病毒余福勋，吴振溢，张彦平，李林村，曾贵金，夏占国流行性乙型脑炎是由蚊媒传播的自然疫源性疾病，严重危害人民健康，病死率高。约１／３患者治愈后存在不同程度后遗症。河南省１９８９、１９９０、１９９１连续三年乙脑发病率在全国...

流行性乙型脑炎病毒NS5蛋白的表达

目的 在大肠杆菌中表达并纯化流行性乙型脑炎病毒NS5蛋白 ,为进一步研究乙脑病毒NS5蛋白的结构与功能奠定基础。方法 根据乙脑病毒NS5蛋白的基因序列 ,设计两对PCR引物 ,采用RT -PCR法分别扩增乙脑病毒JaOH0 5 66株部分及全长NS5基因。将扩增产物分别克隆到表达载体 pQE3 0。筛选重组质粒 ,转化大肠杆菌表达重组蛋白。重组蛋白经金属柱亲和层析纯化。结果与结论 获得了含部分及全长乙脑病毒NS5基因的重组质粒 ,重组质粒经限制性酶双酶切、DNA序列分析及PCR扩增筛选证实。在大肠杆菌中表达出了带 6个组氨酸头的部分及全长的重组乙脑病毒NS5蛋白。经SDS -PAGE及Western

河南省献血员巨细胞病毒IgM抗体检查

巨细胞病毒(CMV)是人类先天性畸形的重要原因之一。人类后天感染多呈非显性感染和潜伏感染,但在免疫抑制时如恶性肿瘤、器官移植、接受免疫抑制剂治疗、艾滋病等常引起致死性感染。孕妇感染CMV状况及其垂直传播的危险性已有多篇报道,但关于CMV水平传播的来源却少有报道,为探讨献血员近期感染CMV状况。

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其病毒蛋白特异性的识别

应用呼吸道合胞病毒(RSV)武汉地方株滴鼻加用病毒感染的Hela细胞免疫Balb/C鼠,取脾细胞与来自实体瘤的SP2/0细胞融合,培育出分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株8株其中3株有中和病毒作用。应用RSV感染Hela细胞作为RSV抗原建立了RSV的免疫转印方法,并应用免疫转印对各单抗的病毒蛋白特异性进行了初步识别:发现1株单抗识别RSV M蛋白,1株识别22 K蛋白,2株识别G蛋白,另外4株单抗的蛋白特异性尚待进一步研究确定。

用呼吸道合胞病毒单克隆抗体快速诊断合胞病毒感染

用呼吸道合胞病毒单克隆抗体快速诊断合胞病毒感染余福勋，孙俊秀，郭万申，吕新华，曾贵金，李林村，吴振溢河南省卫生防疫站（４５０００３河南郑州）呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）是婴幼儿急性下呼吸道感染的主要病原体。据报道，婴幼儿急性下呼吸道感染中有４０％是由ＲＳ...

河南省肾综合征出血热不同类型疫区监测比较研究

目的 :研究河南省不同类型肾综合征出血热 (HFRS)疫区的人间疫情、宿主动物监测及影响因素 ,为控制该病提供依据。方法 :应用描述流行病学、血清流行病学、分子生物学及统计学方法进行研究。结果 :( 1) 1990至 2 0 0 0年 ,河南省HFRS呈稳定下降趋势 ,其中姬鼠型疫区一直呈下降趋势 ,家鼠型有一定的周期波动 ,混合型走势较为平稳。( 2 )我省姬鼠型及家鼠型疫区分别在冬季和春季各有一发病高峰 ,而混合型疫区一年有春、冬两个季节高峰。 ( 3)家鼠型疫区居民区以褐家鼠为优势鼠种 ( 5 8.0 7% ) ,黄胸鼠、小家鼠次之。野外以黑线姬鼠 ( 33.6 7% )和大仓鼠 ( 4 2 .5 % )为优势种。姬鼠型疫区居民区以褐家鼠 ( 4 6 .12 % )、小家鼠 ( 4 2 .92 % )为优势种 ;野外以黑线姬鼠占绝对优势 ( 83.0 4% ) ,大仓鼠为次要鼠种 ( 11.49% )。混合型疫区居民区褐家鼠为优势鼠种 ( 73.8% ) ,黄胸鼠为次要鼠种 ( 17.83% ) ;野外以黑线姬鼠为优势种 ( 4 9.6 6 % ) ,大仓鼠次之 ( 36 .43% )。 ( 4 )家鼠型疫区居民区褐家鼠带病毒率较高 ,其次为黄胸鼠、小家鼠 ,野外为褐家鼠、黑线姬鼠。姬鼠型疫区居民区以黑线姬鼠带病毒率最高 ,褐家鼠及小家鼠次之 ,野外仅有黑线姬鼠带病毒。混合型疫区居民区带病毒鼠包括褐家鼠、黄胸鼠及小?

1990年河南省流行性乙型脑炎流行特点分析

１９９０年河南省流行性乙型脑炎流行特点分析河南省卫生防疫站（郑州４５０００３）吴振溢，张彦平，郭万申，胡卫峡，余福勋，李瑞兰，何家龙（指导）１９９０年，河南省流行性乙型脑炎（以下简称乙脑）出现了较大的流行，全省共报告病例９５１１例，发病率为１１．１２...

抗呼吸道合胞病毒(RSV)单克隆抗体的制备及其对RSV病毒株抗原性的分析

用呼吸道合胞病毒R6(武汉地方株)活毒滴鼻加用戍二醛固定的病毒感染的Hela细胞免疫BALB/C鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤SP_2/0细胞融合,培育出分泌抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞13株,这些细胞的染色体数为94至104条,其分泌的抗体分别属于鼠IgC_1、IgG_(2a)、IgG_(2b)亚类。腹水荧光抗体滴度为1:10000～1:100000。其中五株单抗有中和病毒作用,尤其是两株中和放价达1:128。应用免疫转印法证实了这些单抗分别能识别RSV6种主要结构蛋白,用7株识别不同病毒结构蛋白的单抗对12株合胞病毒进行抗原性分析,可将这些病毒区分为二个血清型,即A亚型和B亚型。

河南省流行性乙型脑炎影响因素分析

本文对流行性乙型脑炎（简称乙脑）发病的影响因素进行了监测分析。结果表明我省各地的主要蚊种构成不尽一致，但淡色库蚊和三带喙库蚊普遍存在，且为主要蚊种之一。淡色库蚊的密度高峰与乙脑发病高峰相一致，比乙脑发病高峰早约一个月左右。从新安县淡色库蚊中分离到一株乙脑病毒，其最低现场感染率为１：３００，白然带毒率为３．４８‰±０．００３４７。初步认为淡色蚊可能为我省乙脑流行的主要传播媒介之一。三带喙库蚊与乙脑的流行关系密切，不排除其作为我省乙脑流行主要传播媒介的可能性。各地仔猪的乙脑抗体５０％阳转日的早晚有所差别，反映了各地乙脑发病强度的高低。

呼吸道合胞病毒感染Hep-2及Vero细胞的病变特点及易感性分析

目的比较Hep-2细胞与Vero细胞感染呼吸道合胞病毒(RSV)的病变特点、易感性,及RSV在两种细胞上产生的子代病毒的感染性。方法实验分为Hep-2空白对照组、Hep-2实验组、Vero空白对照组及Vero实验组。空白对照组未感染病毒,实验组为RSV以MOI=1感染细胞。RSV感染两组细胞后,显微镜观察细胞病变效应(CPE),免疫荧光检测RSV N蛋白表达及空斑实验测定病毒滴度,并进一步予Hep-2实验组及Vero实验组产生的子代病毒感染A549细胞,空斑实验比较子代病毒的感染性。结果Hep-2实验组感染后48 h,Vero实验组感染后84 h时均可形成明显的合胞病变,两个实验组的细胞病变特点存在明显差异,免疫荧光检测RSV N蛋白表达特点与细胞病变特点一致,两个实验组均能产生的较高的病毒滴度。但当Hep-2实验组及Vero实验组产生的子代病毒感染A549细胞,发现感染后36、48 h,两组细胞的子代病毒滴度比较,差异无统计学意义(P>0.05),感染后60 h,Hep-2实验组细胞的子代病毒滴度高于Vero实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RSV感染Hep-2及Vero细胞后均可形成明显的合胞病变,均能达到较高病毒滴度,但RSV在Hep-2细胞上产生的子代病毒感染性明显强于Vero细胞产生的子代病毒。

新安县乙型脑炎流行病学分析

对新安县流行性乙型脑炎（简称乙脑）发病情况的监测结果表明：新安县的主要蚊种为骚扰阿蚊、淡色库蚊和三带喙库蚊。淡色库蚊的密度高峰与乙脑发病高峰相一致，约比乙脑发病高峰早３～４周，并从淡色库蚊中分离到１株乙脑病毒，其最低现场感染率为１：３００，自然带毒率为３．４８‰±０．００３４７。初步证实了淡色库蚊为当地乙脑流行的主要传播媒介之一。骚扰阿蚊不具备成为当地乙脑主要传播媒介的可能性。在乙脑流行年，大多数的猪受到乙脑病毒的感染，猪的５０％阳转日约比人间发病高峰早３周。各年龄组人群普遍受到感染，人群乙脑抗体阳性率较流行前有明显增高。人群的隐性感染率为２８．８５％，同时有４．８％的人体内抗体下降或转阴。显隐感染之比为１：１９４５。大年龄组人群发病数有所增加，但从年龄别发病率来看，仍以１０岁以下年龄组儿童的发病率较高。提示乙脑的预防重点仍应以此年龄段儿童为主。

河南省黄河流域出现稻田型钩端螺旋体病流行

通过流行病学调查分析证实，１９９３年以来，河南省钩端螺旋体病（钩体病）的流行与９０年代以前明显不同：①疫区主要集中于黄河流域；②流行形式以稻田型为主，主要流行菌群为黄疸出血群，而９０年代以前河南从无稻田型钧体病的流行，菌群以波摩那群和犬群为主；③首次确认鼠为河南钩体病的传染源，并进而表明河南省可能有自然疫源地的存在。

1990年河南省流行性乙型脑炎流行特点与流行原因分析

1990年,河南省流行性乙型脑炎(以下简称乙脑)出现了较大幅度的流行,全省共发生病例9511例,发病率为11.12/10万,死亡565例,病死率为5.86％,是继1970年后的又一个小高峰年。全省129个市、县,除淇县无病例报告外,其它市、县均有病例发生。本文收集了1990年河南各市、县乙脑流行病学资料,根据建国以来历年乙脑疫情数据及有关调查研究资料,结合1990年的气温、降雨情况,对1990年河南乙脑的流行情况分析如下:

羊流行性出血热调查研究

应用间接和直接免疫荧光染色法检测我省混合型疫区羊肺681份、羊血清563份的EHF病毒抗原、抗体结果全部阴性。用EHF标准毒株感染仔羊后,检查羊组织未发现其特异性荧光颗粒。选择羊可疑组织行小白鼠脑内EHFV分离,结果未分离到EHFV抗原。实验结果证明羊做为EFHV的传染源和宿主动物是没有意义的。

贵州微小扇头蜱的鉴定、产卵和孵化观察

【目的】了解贵州微小扇头蜱的产卵和孵化情况,为微小扇头蜱及蜱媒病的研究提供基础资料。【方法】从贵州省部分地区采集的黄牛体表寄生蜱样本中随机抽取微小扇头蜱饱血母(雌)蜱共104只,置于15 mL的无菌离心管中,在室温条件下观察母蜱产卵和卵孵化的时间及其形态学变化,对产卵后母蜱和蜱卵进行分子生物学鉴定。【结果】经鉴定所采集的样本均为微小扇头蜱,母蜱的产卵率为74.04%(77/104)。母蜱产卵后,身体逐渐皱缩干瘪,体积变小,蜱色由黑色变为褐黄色。所产的卵呈现黄褐色,有光泽,粘连成团。蜱所产的77组卵中,有11组幼蜱已孵出。幼蜱体似卵样大小,体色淡黄,3对足。【结论】脱离野外环境,微小扇头蜱仍然能够产卵、孵化,说明微小扇头蜱繁殖生存能力顽强。提示人们进入野外要做好自身防护,饲养家畜的农户做好灭蜱工作。