转基因水稻克螟稻标准物质的初制备

建立了转基因水稻克螟稻基体标准物质的初制备体系。按照0．5％、1％、2％、5％的质量比分别加入阳性粉末和阴性粉末，配制成4个水平的基体标准物质。实验结果表明，所选的阳性粉末和阴性粉末的水分分别为3．288％和4．039％，粒径均小于200斗m。从标识“金粉”的检测结果也可以看出，4个水平的基体标准物质均具有较好的均匀性。克螟稻基体标准物质的前期制备符合转基因基体标准物质的要求，可为后期进一步考察其稳定性和定值等参数提供基础。

转基因水稻基体标准物质候选物真实性的鉴定技术研究

以PCR技术及琼脂糖凝胶电泳技术为基础，对转基因水稻克螟稻2号和阴性受体秀水11进行真实性鉴定。利用典型性检测、指纹图谱技术对候选物的转基因事件的真实性、转入事件正确性（是否为特异性目标外源基因）、品系遗传背景进行鉴定，结果表明，克螟稻2号只含特异性序列Cry1Ab，秀水11不含所选的外源基因，它们具有相同的遗传背景。随机各抽取克螟稻2号和秀水11水稻100株，通过特异性PCR、免疫印迹实验来检测原材料的纯度，结果表明，克螟稻2号为100％的转基因水稻，秀水11为100％的阴性受体水稻。

转基因油菜Ms8质粒分子的制备

随着转基因产品的大规模商业化和我国大规模进口油菜籽,有效管控存在的风险显得非常必要和有意义,试验研究了质粒标准分子pMs8的研制过程,包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、均匀性检验、稳定性考察、定值。结果表明,该质粒分子标准物质的内源基因和外源基因的均匀性良好,没有扩增出所选的其他特异性基因,短期稳定性在14 d(处理温度大于25℃)发生显著变化,长期稳定性大于6个月,两种方法对外源基因拷贝数的定值结果相近,因此,p Ms8是有准确量值的质粒标准分子。可替代性研究结果表明,其可替代基因组作为转基因油菜Ms8定量的阳性标准。

转基因油菜Ms8质粒分子外/内源基因比值的不确定度评定

数字PCR是一项不依赖校准物的DNA绝对定量技术,通过统计(泊松分布)反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数。该文对转基因油菜Ms8质粒分子进行构建和纯度分析后,采用荧光定量PCR对质粒分子的可替代性、均匀性和稳定性进行考察,采用数字PCR对质粒分子进行定值,并对测量结果进行不确定度评定。结果表明,数字PCR测得pMs8的外源基因和内源基因的比值及其不确定度为1.12±0.13,k=2。

基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展

数字PCR是一项针对单分子目标DNA的绝对定量技术.该技术是将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中并且发生扩增反应,通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数.DNA样品在反应室中随机和独立分布是单分子成功扩增和准确定量DNA拷贝数的关键因素.本文综述了数字PCR的发展历史、数字PCR与实时荧光定量PCR的区别,以及数字PCR在临床诊断、转基因成分定量、单细胞基因表达、环境微生物检测和下一代测序等方面的最新进展,并展望了该技术的应用前景.

转基因定量检测用质粒分子标准物质研究进展

近10年来,应用于转基因植物产品定量检测的质粒分子标准物质凭借其易于富集,快捷高效等优点,成为各国检测机构的研究热点。对国内外转基因植物核酸定量检测用的质粒分子标准物质研究进展进行总结和评述,并且对该类标准物质在研制过程中的问题进行分析,同时展望了该类标准物质的发展与应用。

转基因水稻TT51—1标准物质的研制

将筛选后的转基因水稻qT51—1和非转基因水稻明恢63种子分别冷冻研磨成粉末，采用重量法配置了5个不同水平的标准物质。经检验该标准物质的均匀性良好，可在4℃保存条件下存储1年。标准物质采用重量法的质量分数作为标准值，数字PCR测定拷贝数分数作为参考值，通过转基因水稻与非转基因水稻种子粉末提取效率比值校准的数字PCR定值结果与重量法质量分数定值结果之间具有等效一致性，该标准物质可用于转基因水稻TT51—1的定量PCR检测及其特异性检测方法的评价。

超高效液相色谱-二极管阵列检测-串联质谱法测定茶叶中15种黄酮醇糖苷类化合物

采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱,以含0.1%(v/v)甲酸的乙腈-水为流动相,梯度洗脱,建立了超高效液相色谱-二极管阵列检测-串联质谱(UPLC-PDA-MS/MS)联用技术测定茶叶中黄酮醇糖苷类化合物的方法。结合色谱保留时间、紫外光谱、一级和二级质谱参数等信息,在绿茶和红茶中共识别了15种黄酮醇糖苷类化合物,包括3种杨梅素糖苷、6种槲皮素糖苷和6种山柰素糖苷类化合物。定量分析中采用串联四极杆质谱检测,以槲皮素-3-葡萄糖-鼠李糖二糖糖苷(Q-GRh)为标准品,其他黄酮醇糖苷进行相对定量。结果表明,绿茶和红茶中黄酮醇糖苷类化合物的含量和分布差异显著,绿茶中的黄酮醇糖苷总量是红茶的1.7倍,绿茶中的黄酮醇糖苷主要以杨梅素-3-半乳糖糖苷(M-Ga)、杨梅素-3-葡萄糖糖苷(M-G)、槲皮素-3-葡萄糖-鼠李糖-葡萄糖三糖糖苷(Q-GaRhG)、槲皮素-3-半乳糖-鼠李糖-葡萄糖三糖糖苷(Q-GRhG)、山柰素-3-半乳糖-鼠李糖-葡萄糖三糖糖苷(K-GaRhG)和山柰素-3-葡萄糖-鼠李糖-葡萄糖三糖糖苷(K-GRhG)为主,而红茶中主要以Q-GRh、槲皮素-3-葡萄糖糖苷(Q-G)、山柰素-3-葡萄糖-鼠李糖二糖糖苷(K-GRh)和山柰素-3-半乳糖糖苷(K-Ga)为主。本方法简单快速,准确性好,可用于茶叶中黄酮醇糖苷类化合物的分析。

奶粉中亚硝酸盐和硝酸盐成分分析基体标准物质的应用

建立了奶粉中亚硝酸盐和硝酸盐含量准确测定的方法,以奶粉中亚硝酸盐和硝酸盐成分分析基体标准物质作为质控品进行方法学的考察与评价。奶粉样品经低温-酸沉淀/固相萃取净化,采用离子色谱-电导检测分析。结果表明,亚硝酸盐(以NO_2-计)和硝酸盐(以NO_3^-计)分别在0.010μg/m L^0.500μg/m L和0.100μg/m L^5.00μg/m L的范围内线性良好,相关系数(r)均大于0.99,在奶粉中的最低定量限分别为0.400/4.00 mg/kg(NO_2^-/NO_3^-);亚硝酸盐和硝酸盐测定方法中的基质效应分别为95.6%/99.6%(NO_2^-/NO_3^-);基于基质效应的加标回收率分别为90.3%/87.1%(NO_2^-/NO_3^-);以奶粉基体标准物质进行方法学考察,方法的准确性分别为90.5%/89.9%(NO_2^-/NO3-),精密度(RSD)分别为2.1%/0.7%(NO_2^-/NO_3^-)。奶粉中亚硝酸盐和硝酸盐成分分析基体标准物质作为质控品,可以用于分析测试方法的评价、实验室结果的比对,以及相关行业奶粉中亚硝酸盐和硝酸盐含量监测量值传递体系的建立,为奶粉的质量控制和安全评价提供保障。

转基因玉米NK603基体标准物质协同定值实验

对转基因玉米NK603基体标准物质荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，结果表明该方法适合于标准物质量值协同实验。选择7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米NK603基体标准物质量值进行了协同实验，通过分析比较各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数，进一步证明该方法室间重复性较好。经统计学分析各参与实验室的数据等精度，3个水平基体标准物质的量值和扩展不确定度分别为0．57％±0．11％、1．21％±0．30％和4．92％±1．80％（k=2）。

转基因玉米MON810基体标准物质Q—PCR量值协同实验研究

针对3种不同转基因含量水平的转基因玉米MON810基体标准物质，组织7家实验室对其量值采用实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法进行了协同实验研究，并对Q-PCR得到的参考值进行了不确定度分析。经过加权平均，转基因玉米MONS10A、B、C3个水平的基体标准物质转基因含量的Q—PCR方法参考值分别为0．51％±0．10％、1．1％±0．2％、4．7％±0．7％（k=2）。

转基因油菜T45质粒分子标准物质协同实验研究

对转基因油菜T45荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，结果表明该方法适合于标准物质协同实验。选择6家实验室采用经过验证的方法对转基因油菜T45质粒分子标准物质进行了协同实验研究。通过比较分析转基因油菜T45基因DNA与质粒分子DNA两者产生的标准曲线的斜率（扩增效率）、线性拟合度和截距，发现转基因油菜T45基因组DNA与质粒分子DNA具有相似的扩增效率和线性相关系数。经统计学分析各参与实验室的数据等精度，转基因油菜T45质粒分子标准物质的标准值和扩展不确定度为0．98±0．02（％=2）。

转基因玉米TC1507基体标准物质协同实验及不确定度评定

7家实验室共同采用实时荧光定量PCR方法，对转基因玉米TC1507基体标准物质A、B、c3种含量水平的量值，进行了协同实验研究，并对得到的参考值进行了不确定度分析。实时荧光定量PCR方法协同实验结果表明，转基因玉米TC1507基体标准物质转基因含量的参考值分别为0．41％±0．22％、1．1％±0．4％、4．5％±1．2％（k=2）。

转基因水稻种子核酸提取方法的比较研究

以转基因水稻克螟稻2号及其受体水稻秀水11的种子为试验材料,将水稻种子脱壳磨成粉末后,称取100mg粉末分别用传统CTAB法和5种核酸提取试剂盒进行水稻基因组DNA的提取,其中试剂盒A和试剂盒B为磁珠法,其余为硅胶过柱法,将提取的基因组DNA通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、荧光定量PCR等3种检测方法比较其提取效果,并结合提取时间和提取成本的比较,以期找到性价比最佳的提取方法。结果表明,试剂盒A和试剂盒B提取的基因组DNA完整性最好、纯度和提取效率最高,综合提取效果、耗时及成本等因素考虑,试剂盒B的性价比最佳。本研究为转基因水稻种子的检测和研究奠定了基础。

热分析数据处理系统的研究开发

介绍一套用于老式热分析仪器升级改造的数据处理系统。该系统适用于各种不同类型的热分析仪器(如DSC ,TG ,DTA等 ) ,可在Windows 9x/ 2 0 0 0下运行 ,使老式仪器的工作效率得到明显提高 ,采集的数据和分析结果可转化为文本文件或图形文件 。

高效液相色谱法测定西柚不同组织中的10种柑橘黄酮类化合物

该文建立了圣草次苷、柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香风草苷、枸橘苷、甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮等10种柑橘黄酮类化合物同时测定的高效液相色谱方法。色谱柱为Welch Ultimate XB-C18(5μm,4.6×150mm),采用甲醇-水(含0.1%甲酸)流动相体系,梯度洗脱,检测波长为280nm。方法学考察结果表明,对10种柑橘黄酮类化合物,提取效率均大于95%;在给定的范围内线性关系良好,相关系数r2均大于0.99;方法的精密度和重现性良好,相对标准偏差(RSD)分别小于5.4%和7.1%。该方法用于西柚不同组织中柑橘黄酮类化合物含量的测定,结果显示,柑橘黄酮类化合物在西柚果皮、囊衣和果瓣中的含量和分布差异显著。

离子色谱-电导检测法测定豆奶粉中的亚硝酸盐和硝酸盐含量

该文建立了豆奶粉中亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定方法。豆奶粉样品经乙酸低温沉淀和固相萃取净化,采用离子色谱-电导检测分析,并考察了线性、检出限、准确性、精密度和加标回收率等。结果表明,亚硝酸盐（以NO2-计）和硝酸盐（以NO3-计）分别在0.01~0.20μg/m L和0.10~2.00μg/m L的范围内线性良好,相关系数（r）均大于0.99,在豆奶粉中的检出限分别为0.04/0.016mg/kg（NO2-/NO3-）;加标回收率分别为94.3%/97.1%（NO2-/NO3-）;方法的准确性分别为91.0%/96.5%（NO2-/NO3-）,精密度分别为2.7%/1.4%（NO2-/NO3-）。对市售4种豆奶粉样品进行筛查,亚硝酸盐和硝酸盐的含量均小于国家限量标准。本方法简便快速、灵敏度高、准确性、重复性好,可用于豆奶粉质量控制中亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定。

火焰光度计检测限测量值的不确定度评定

根据JJG 630-2007《火焰光度计检定规程》和JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》的要求,分析了影响火焰光度计测定K、Na元素检测限的各个分量,从而计算出火焰光度计检测限测量值的不确定度。

TaqmanMGB探针冻融稳定性研究

TaqmanMGB探针的稳定性是实时荧光定量PCR准确定量的关键因素之一。然而在实验过程中，常常因为运输、实验室保存或使用条件的变化，造成探针的反复冻融，影响实验结果。采用高效液相色谱技术定量研究了反复冻融的MGB探针的稳定性；并比较分析了冻融探针对qPCR的影响程度。结果表明：MGB探针可以耐受30次以内的反复冻融，随着探针浓度的降低，探针反复冻融后qPCR量值波动区间增大，因此，为保证结果稳定性，qPCR实验使用的MGB探针应尽量减少反复冻融次数。

高效液相色谱法测定竹叶提取物中的14种酚酸类化合物

该研究建立了原儿茶酸、龙胆酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸、荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷等14种酚酸类化合物同时测定的高效液相色谱方法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18（5μm,4.6×250mm）,采用甲醇-水（含0.1%甲酸）流动相体系,梯度洗脱,检测波长为274nm和324nm。结果显示,14种酚酸类化合物在0.250-50.0μg/m L的范围内线性关系良好,相关系数r2均大于0.99;方法精密度良好,相对标准偏差（RSD）小于7.7%。表明该方法可用于竹叶提取物中酚酸类化合物含量的测定。