皖南尖吻蝮蛇中11个C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA克隆和序列分析

通过放射性标记DNA探针筛选和PCR克隆筛选 ,从皖南尖吻蝮蛇毒腺的λgt11cDNA文库中 ,克隆得到了 11个编码C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA .其中 2个克隆分别含有编码an tithrombinA的A链和B链的序列 .另外 6个则含有编码如下肽链的序列 :antithrombinC的A链和B链、agkisacutacin的A链和B链、抗凝血因素的A链和B链 ,其它 3个克隆含有编码未知蛋白质的序列 .有趣的是 ,在编码AntithrombinC的序列中 ,每条链中除了含有 7个与所有C型凝集素类似蛋白位置一致的Cys外 ,在B链上还含有一个额外的Cys3;2条B链上的Cys3可能形成一对新的链间二硫键 .氨基酸序列的比较及进化分析显示 ,C型凝集素类似蛋白B链起源于一个单系类群 ,A链至少有

中国3个主栽烟草品种的差异蛋白质组学研究

【目的】从全蛋白质组学水平研究烟草,筛选具有重要特性的蛋白质,阐明其相关代谢通路,使得烟草的基础科学研究和品种培育工作有所突破。【方法】利用苯酚法提取中国3个主栽烟草品种红花大金元、K326和云烟87叶片的蛋白质,酶解后采用串联质量标签技术(tandem mass tag,TMT)标记,结合二维液相色谱串联质谱技术(2D LC-MS/MS)对3个烟草品种叶片的蛋白质组成进行分析,运用Proteome Discoverer软件提取谱图后在MASCOT搜索引擎上鉴定蛋白质和肽段,并对鉴定的蛋白质进行系统的生物信息学分析,包括数据相关性分析、分层聚类分析和主成分分析,同时按照2倍上下调的原则采用火山图筛选不同品种烟草中表达差异显著的蛋白质,最后利用KEGG通路分析烟草中重要蛋白质的分布及功能。【结果】鉴定红花大金元、K326和云烟87烟草样品的蛋白质Group总数为3 079,蛋白质ID数为10 343。从分层聚类分析和主成分分析中蛋白质的整体表达情况可见,K326和云烟87蛋白质表达情况较相似,而红花大金元与前两者相差较大。后续的差异蛋白质筛选也验证了该结果,表现为云烟87和K326之间仅存在29个差异表达的蛋白质,其中13个蛋白质覆盖8条代谢通路,包括类黄酮生物合成,参与类黄酮合成路径的查尔酮合成酶在K326中的相对含量显著高于云烟87。红花大金元和云烟87之间有160个蛋白质差异表达,其中103个蛋白质覆盖42条代谢通路,包括谷胱甘肽代谢,相对定量结果显示谷胱甘肽代谢途径相关的3种酶,谷胱甘肽过氧化物酶、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽S-转移酶在红花大金元中的含量均显著低于云烟87。红花大金元和K326之间存在119个差异蛋白质,其中89个蛋白质覆盖41条代谢通路,包括外源物质细胞色素P450代谢。筛选获得的重要差异蛋白质的相对定量结果显示一些与抗性相关的蛋白质,如蛋白酶抑制剂,在云烟87中的表达量远低于K326和红花大金元,同时结果表明红花大金元中的超氧化物歧化酶含量处于较低水平。【结论】TMT技术结合2D LC-MS/MS可对不同品种烟草的叶片蛋白质进行有效地分离和鉴定,鉴定出的蛋白质大部分是参与光合作用、物质代谢或者与抗逆性相关。

靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT-PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7shRNA-566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论 CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。

功能核酸用于致病菌检测的研究进展

由食源性致病菌引发的疾病对人类健康构成巨大威胁。虽然一些致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌等在诊断和预防方面已经取得了重大进展,但开发快速、高效、低成本的检测方法仍然是一项挑战。功能核酸(functional nucleic acids,FNAs)是一类功能超出核酸常规遗传作用的核酸,主要包括天然的核酶(RNAzymes)、核糖开关(riboswitches)以及体外通过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选的适配体(aptamers)、核酶(RNAzymes)和脱氧核酶(DNAzymes)。适配体和脱氧核酶因具有较高的稳定性、特异性和可设计性,使其成为病原微生物识别的理想工具,近年来在生物传感和医学诊断领域备受关注。综述了功能核酸的筛选原理和流程、适配体及具有RNA裂解活性的脱氧核酶(RNA cleavage deoxyribozymes,RCDs)在致病菌检测中的应用进展和面临的挑战,并对其未来的发展前景进行了展望。

RNA干扰CXCR7基因对人肝癌MHCC97H细胞生物学特性的影响

通过构建针对CXCR7的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰表达质粒,转染人肝癌细胞系MHCC97H,嘌呤霉素筛选建立低表达CXCR7基因的稳转株,分别采用qRT-PCR和Western Blot检测shRNA靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与流式细胞术研究CXCR7抑制对细胞增殖及凋亡的影响;通过划痕愈合实验研究CXCR7抑制对MHCC97H细胞迁移能力的影响。结果表明:成功构建了慢病毒表达载体pLKO.1-CXCR7shRNA,显著下调MHCC97H细胞中CXCR7mRNA及蛋白的表达。增殖实验显示,与阴性对照组相比,干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(p<0.001);干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡,尤以早期凋亡率上调为著;划痕实验显示抑制CXCR7表达延长细胞的伤痕愈合时间。

中药热敷配合中频脉冲治疗仪治疗膝骨关节炎41例

膝骨关节炎(KOA)是以膝关节软骨退变和骨质增生为特点的骨关节疾病,常见于老年群体。该病以膝关节疼痛、肿胀、僵硬、活动功能受限为主要表现,具有病程长、病情进展缓慢、易反复、难治愈等特点[1]。流行病学调查显示,随着我国老龄化趋势的逐渐严重,膝骨关节炎的发病率也随之升高,60岁以上人群发病率高达49%,是严重影响中老年人生活质量的常见病[2]。目前,尚无特效药物和疗法,临床多首选保守治疗和非药物疗法,以缓解疼痛、改善膝关节功能和稳定性、延缓病情进展为主要原则[3]。西药治疗效果尚可,止痛起效较快,但不良反应大且容易复发,长期服用镇痛药易产生药物依赖性,具有局限性;而中医药治疗具有经济安全的优势,中西医结合疗法逐渐得到临床认可,并广泛应用[4]。本文应用中药热敷配合中频脉冲治疗仪治疗膝骨关节炎,观察对关节疼痛、关节功能的改善效果,现总结如下。

阴道镜检查与宫颈电环锥切术在宫颈病变诊治中的应用

目的：探讨阴道镜检查与宫颈电环锥切术（LEEP）在宫颈鳞状上皮内病变（SIL）诊治中的应用价值。方法：回顾分析342例在我院经薄层液基细胞学技术（TCT）、高危型人乳头瘤病毒（HPV）检测和阴道镜检查综合初步诊断为宫颈SIL而行LEEP术患者的资料,采用自身对照法,以LEEP术组织病理学诊断为金标准,比较充分、不充分阴道镜检查组宫颈活检诊断宫颈病变与金标准诊断的符合率;比较充分阴道镜检查组镜下图像拟诊宫颈高级别鳞状上皮内病变（HSIL）、低级别鳞状上皮内病变（LSIL）与金标准诊断的符合率;并于术后定期随访,评价LEEP术诊治宫颈SIL的疗效。结果：充分阴道镜检查组宫颈活检诊断的宫颈病变与金标准诊断的符合率高于不充分阴道镜检查组活检诊断的符合率,差异有统计学意义（χ^2=87.27,P〈0.01）;不充分阴道镜检查组宫颈活检诊断不足36例（50%）,宫颈浸润癌漏诊4例（5.56%）。充分阴道镜检查组镜下图像拟诊HSIL与金标准诊断符合率高于拟诊LSIL的符合率,差异有统计学意义（χ^2=60.17,P〈0.01）;另图像宫颈浸润癌漏诊2例。342例患者中除6例诊断为宫颈浸润癌者住院治疗外,另336例均于门诊随访,其中术后出血需处理者32例（9.36%）,术后3个月复查TCT提示为意义不明的非典型鳞状上皮细胞（ASCUS）者3例（0.89%）,术后6个月复查为高危型HPV阳性者2例（0.59%）,LEEP术治愈331例,治愈率为98.51%。结论：充分阴道镜检查患者宫颈活检诊断宫颈病变准确率高,仍提倡对其采用传统＂三阶梯＂法诊治;不充分阴道镜检查患者宫颈活检诊断准确率低,充分阴道镜检查图像拟诊HSIL符合率高且易漏诊宫颈浸润癌,建议综合患者年龄、生育要求等因素考虑是否直接行LEEP术。两者联合应用,提高宫颈病变诊断准确率,防止过度诊治,减少患者就诊次数,减轻患者思想负担。

宫腹腔镜诊治输卵管性不孕患者结局及影响因素分析

目的 通过分析输卵管性不孕患者宫腹腔镜术后的自然妊娠率及其相关影响因素,为医生准确评估输卵管性不孕患者术后自然妊娠机会,选择合适的受孕方案提供依据。方法 选择93例因输卵管性不孕实施宫腹腔镜联合手术,且有2年完整随访记录的患者作为研究对象,分析患者的术后自然妊娠率。根据术后是否自然妊娠分为妊娠组和未妊娠组,对比找出影响患者术后妊娠率的主要因素。结果 93例患者宫腹腔镜术后2年内总自然妊娠36例,总计自然妊娠率为38.71%（36/93）。术后6个月内妊娠率30.11%（28/93）,术后7~12个月之间妊娠6例,术后1年内累计自然妊娠率为36.56%（34/93）,接近总妊娠率。术后13~24个月之间妊娠2例,1年后妊娠率显著下降（P〈0.05）。在相关影响因素中,不孕年限、流产引产史、盆腔手术史和盆腔炎病史、合并盆腔子宫内膜异位症、盆腔中重度粘连、输卵管积水等7项因素对患者的术后妊娠率均有显著性影响（P〈0.05）。结论 不孕症诊断一旦成立应尽早治疗。对有流产引产史、盆腔炎病史、盆腔手术史、痛经等病史的输卵管性不孕患者,尽早行宫腹腔镜联合探查术。术后医生应综合患者的不孕年限、相关病史、术中情况,为患者提供最优化、个体化的随诊受孕方案。对术中证实为输卵管完全不通或术后1年内未自然妊娠的患者,建议尽早接受辅助生育技术,以免错过最佳妊娠年龄。

1 096例复发性自然流产夫妇外周血染色体异常率及异常核型分布特征分析

目的:了解深圳市龙华区复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)夫妇外周血染色体异常率及异常核型分布特征,并探讨其与RSA之间的相关性。方法:选择2019年3月-2021年2月在深圳市龙华区妇幼保健院妇科就诊的RSA夫妇1 096例(548对),分别取其外周血进行淋巴细胞培养,同时运用G显带法(必要时增加C和N显带法)对其染色体核型进行分析,并对检测结果进行统计分析。结果:1 096例RSA夫妇检出染色体异常者121例,异常率为11.04%,男性染色体异常发生率为7.12%(39/548),明显低于女性的14.96%(82/548),差异有统计学意义(P<0.05);121例染色体异常患者中以多态性变异检出率最高,占62.81%,明显高于结构和数目异常率的31.40%和5.79%,差异有统计学意义(P<0.01)。其中多态性异常中以1、9、16号染色体次缢痕增长最为常见,占64.47%,明显高于其他多态性变异类型,差异有统计学意义(P<0.01);结构异常中以平衡易位最为常见,占65.79%,明显高于其他结构异常,差异有统计学意义(P<0.001);数目异常中以47,XXY检出率最高,占57.14%,高于其他数目异常(P<0.001);女性结构和多态性异常率分别为4.20%(23/548)和10.22%(56/548),高于男性的2.74%(15/548)和3.65%(20/548),而数目异常率为0.55%(3/548),低于男性的0.73%(4/548),但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:深圳龙华区RSA夫妇染色体异常率处于国内较高水平,可能是RSA发生的一个重要因素之一,其中多态性异常是RSA发生的主要因素。因此,加强RSA夫妇染色体分析,有利于RSA的预防和针对性治疗,对提高我国优生优育具有重要意义。

免疫细胞的代谢重编程及其对免疫功能的影响

免疫细胞代谢机制研究是免疫代谢研究的一个重要方向。免疫细胞在增殖、分化以及效应功能的执行等过程中会发生代谢重编程现象。本文综述了不同类型的免疫细胞静息或激活状态下的代谢通路。

肿瘤微环境的代谢重编程

肿瘤细胞独特的有氧糖酵解代谢为其增殖生长提供能量,消耗了肿瘤微环境中的大量营养。肿瘤微环境中也存在大量的免疫细胞,免疫细胞活化、执行效应功能会发生与肿瘤细胞类似的代谢重编程现象,亦需要大量能量。因此免疫细胞与肿瘤细胞之间会存在激烈的代谢竞争,同时也存在密切的代谢调控。通过调整肿瘤代谢和免疫代谢的平衡,人为地抑制肿瘤代谢、增强免疫代谢,提高肿瘤内的免疫功能可能为肿瘤免疫治疗开辟一个新的方向。

中国口腔研究机构的SCI论文产出及研究热点分析

目的通过对中国口腔医学研究机构在2011—2020年间的SCI论文产出及研究的热点进行统计分析。方法通过文献计量法, 从论文的发表时间、机构及期刊分布、国际(地区)合作情况及研究热点等多维度, 对Web of Science数据库中, 中国口腔医学研究机构的论文进行检索分析。结果近十年间我国口腔研究机构的发文数量及质量均有显著增长, 发文量前四的机构分别为四川大学、北京大学、上海交通大学和空军军医大学。研究热点主要集中在鳞癌、牙周炎、骨再生与材料学。结论我国口腔医学研究机构在2011—2020年间的SCI论文产出及高质量论文数逐年增加, 科研实力不断增强。

质谱流式技术扩宽临床研究广度

质谱流式技术是近来年发明的一门新兴技术,它利用金属同位素标签替代荧光标签,并利用质谱对标签进行定量,通过结合质谱和流式细胞技术,可以同时对单细胞进行超多参数、无需补偿的测量,大大增强了评估复杂细胞系统和过程的能力,弥补了荧光流式的不足。其高通量、高灵敏度和高稳定性的特点尤其适合于免疫、肿瘤、血液、药物和遗传学等学科的研究中。