黑曲霉木聚糖酶XynB耐热性的定向改造及表达、纯化

酶活性高的木聚糖酶在工业中具有巨大应用潜力,但大部分野生木聚糖酶不能耐受工业生产过程中的极端环境比如高温,因此很有必要通过分子生物学的方法改造木聚糖酶.本文通过分子动力学模拟和定点突变的方法以提高黑曲霉(SCTCC400264)来源的木聚糖酶Xyn B的耐热性.利用定点突变技术获得突变载体p ET32a-Xyn B-T79V并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导成功表达木聚糖酶Xyn B-T79V.在镍亲和层析纯化蛋白后测定了突变酶的耐热性.突变体Xyn B-T79V在30、40、50℃处理120 min后酶活几乎没有损失,当处理温度升高到60-80℃时,酶活开始下降.温度升到80℃时,残余酶活仍有37%,而此时野生型Xyn B的活性几乎完全丧失.突变体Xyn B-T79V半衰期t1/2提高了8.7 min.本研究获得的突变酶Xyn B-T79V耐热性显著提高,为工业应用提供了新的酶资源.

不同生境产脂肪酶菌株的筛选及多样性

为发掘不同特性脂肪酶微生物资源,采用纯培养方法从青海高寒草地、雅安山区、成都平原分离得到产脂肪酶菌株54株.通过对菌株的DNA进行ERIC-PCR指纹图谱分析,按聚类树划分为5个操作分类单元.16S rDNA序列测定和聚类分析显示,分离菌株分布于芽孢杆菌属(Bacillus)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、假单胞菌属(Pseudomonas)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠杆菌属(Enterobacter).多样性分析表明,与青海高寒草地、雅安山区相比,成都平原产脂肪酶菌株遗传多样性更为丰富.在54株菌中都出现了300 bp和1 300 bp两个特异且稳定出现的条带,这两个特异条带可能是产脂肪酶菌株的SCAR标记条带.