腰椎后路手术血液回收过程中中性粒细胞胞外诱捕网的产生与洗涤效果评价

目的探讨腰椎后路手术术中血液回收(IBS)过程中是否存在中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)及NETs相关成分DNA、组蛋白和核小体的生成,以及自体血清洗程序是否可以清除NETs成分。方法回顾性选取2017年1~6月于首都医科大学附属北京友谊医院行腰椎后路手术患者20例,术中使用自体血液回收。抽取术前外周静脉血(0期)、自体血回收罐中血(1期)和洗涤后回输前的自体血(2期)的血液样本。检测样本中NETs相关成分DNA、核小体、髓过氧化物酶(MPO)含量。结果与术前外周静脉血(DNA:21.92±24.87 ng/ml,核小体0.03±0.02,MPO 5.41±2.48 ng/ml)相比,自体血回收罐中血液NETs及其相关成分含量明显增高(DNA:3 256.56±1 952.04 ng/ml,核小体:3.06±0.34,MPO 493.23±232.33 ng/ml),经过洗涤后,回收血液的上述成分明显降低(DNA:146.62±123.82,核小体:1.59±0.48,MPO:64.73±38.49 ng/ml),但仍高于术前水平,差异均有显著性(P <0.05)。结论腰椎后路手术血液回收过程中存在中性粒细胞激活产生NETs,血液洗涤可以使NETs水平降低,但仍高于术前水平。

异丙酚对脓毒症小鼠中性粒细胞胞外诱捕网生成和炎症因子表达的影响

目的明确异丙酚对脓毒症小鼠模型中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)生成和炎症因子表达的影响。方法雄性8~10周龄C57BL/6小鼠40只,按照随机数字表法分为对照组、脂多糖(LPS)组、异丙酚组和脱氧核糖核酸酶(DNase)组,每组各10只。腹腔注射LPS建立脓毒症模型;异丙酚组小鼠腹腔注射异丙酚全身麻醉1 h;DNase组腹腔注射DNase维持1 h;对照组腹腔注射等量的0.9%氯化钠溶液,观察相同时间。PicoGreen荧光染料法检测4组小鼠血浆游离DNA(cf-DNA/NETs)水平;酶联免疫吸附试验测定Toll样受体-4(TLR-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和髓过氧化物酶(MPO)水平。结果LPS组小鼠的cf-DNA/NETs、TLR-4、TNF-α和MPO水平分别为(921.23±27.14)ng/mL、(13.88±1.12)ng/mL、(10253.14±199.25)pg/mL、(135.67±9.87)milliunits/mL,均明显高于对照组[(166.54±11.83)、(2.21±0.29)ng/mL、(2924.68±25.53)pg/mL、(32.83±1.47)milliunits/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);异丙酚组小鼠的cf-DNA/NETs、TLR-4、TNF-α和MPO水平[(611.55±35.17)ng/mL、(9.97±0.51)ng/mL、(6505.03±79.76)pg/mL、(87.77±6.06)milliunits/mL]较LPS组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);DNase组小鼠的TLR-4、TNF-α水平[(5.39±0.28)ng/mL、(4702.74±114.21)pg/mL]高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);DNase组小鼠的cf-DNA/NETs、MPO水平[(203.52±7.01)ng/mL,(41.89±3.84)milliunits/mL]与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论异丙酚对脓毒症小鼠模型NETs的生成和炎症因子表达具有一定的抑制作用,可适用于脓毒症患者的临床麻醉。

氙气后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤起保护作用:基于下调mTOR通路和抑制内质网应激介导的神经元凋亡

目的基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)通路和内质网应激(ERS)-凋亡通路探讨氙气后处理治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)的作用机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组),脊髓缺血再灌注组(I/R组),氙气后处理组(Xe组),脊髓缺血再灌注+雷帕霉素组(I/R+Rapa组),氙气后处理+雷帕霉素组(Xe+Rapa组)(10只/组)。通过夹闭腹主动脉85 min,再灌注4 h建立大鼠SCIRI模型。手术前3 d,I/R+Rapa组和Xe+Rapa组的大鼠每天予以腹腔注射雷帕霉素(Rapa,4 mg/kg),其余3组大鼠注射等体积的溶剂。缺血再灌注后1 h时,Xe组和Xe+Rapa组的大鼠经呼吸机吸入50%氙气+50%氧气混合气1 h。其余3组的大鼠予以50%氮气+50%氧气混合气1 h。于再灌注4 h观察记录大鼠后肢运动功能后收集标本,进行HE染色、尼氏染色计数正常神经元数量,Western blot和RT-PCR方法分别检测脊髓组织中内质网应激通路[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、肌醇需要酶1α(IRE1α)、RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶(PERK)]、mTOR通路(mTOR和磷酸化mTOR(p-mTOR))以及凋亡信号(Bax、Bcl-2和Caspase-3)蛋白和mRNA表达。结果与Sham组相比,其余各组大鼠后肢运动功能评分显著降低(P<0.01),正常神经元数量减少;I/R组的GRP78、ATF6、IRE1α、PERK mRNA含量和蛋白水平明显升高(P<0.05或0.01),p-mTOR/mTOR比值、Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3 mRNA含量和蛋白水平显著升高(P<0.01)。与I/R组相比,Xe组的GRP78、ATF6、IRE1α、PERK m RNA含量和蛋白水平明显降低(P<0.01),p-mTOR/mTOR比值、Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3 mRNA含量和蛋白水平显著下降(P<0.05或0.01);I/R+Rapa组的GRP78、ATF6 mRNA含量和蛋白水平明显降低(P<0.01),p-mTOR/mTOR蛋白的比值、Bax/Bcl-2 m RNA的比值及Caspase-3含量和蛋白水平显著下降(P<0.01)。与Xe组相比,I/R+Rapa组和Xe+Rapa组的BBB评分和Tarlov评分明显降低(P<0.01);Xe+Rapa组Caspase-3蛋白表达和Bax/Bcl-2 mRNA的比值显著见下降(P<0.05或0.01)。结论氙气后处理通过抑制内质网应激和神经元凋亡对大鼠脊髓缺血再灌注损伤起保护作用,而mTOR通路部分介导了氙气后处理的脊髓保护作用。