幽门螺杆菌对GES-1细胞自噬及凋亡的影响

目的研究幽门螺杆菌(Hp)对胃上皮细胞GES-1自噬与凋亡的影响。方法Hp与自噬抑制剂3-MA、广谱凋亡抑制剂Z-VAD-FMK处理后的GES-1细胞共培养,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B-Ⅱ、Caspase-3及PARP蛋白的表达。结果3-MA处理后,与空白对照组相比,Hp组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著增高(t=7.54,P<0.01);3-MA+Hp组与Hp组相比,LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著降低(t=-3.24,P<0.05);与空白对照组相比,Hp组、3-MA组GES-1细胞凋亡率均显著增加(t值分别为-9.71和-3.25,P<0.01或P<0.05)。Z-VAD-FMK处理后,与空白对照组相比,Hp组GES-1细胞凋亡率显著增加,(t=-9.29,P<0.01);Hp+Z-VAD-FMK组较Hp组GES-1细胞凋亡率显著下降(t=-8.47,P<0.01);与空白对照组相比,Hp组、Z-VAD-FMK组的LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量均显著增加(t值分别为-12.98和-11.28,均P<0.01)。3-MA与Z-VAD-FMK共处理后,3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组较3-MA+Z-VAD-FMK组和Hp+Z-VAD-FMK组的GES-1细胞凋亡率显著增加(t值分别为-4.91和-9.64,P<0.05或P<0.01);3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组与3-MA+Z-VAD-FMK组相比,Caspase-3蛋白相对表达量显著增加,PARP蛋白相对表达量显著下降(t值分别为-5.16和3.02,均P<0.05);3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组较Hp+Z-VAD-FMK组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著下降(t=4.63,P<0.05)。结论幽门螺杆菌既能上调GES-1细胞自噬也能诱导其凋亡,并通过增加Caspase-3表达的同时降低PARP的表达以增强自噬抑制引起的细胞凋亡。而在抑制凋亡后,幽门螺杆菌可能诱导GES-1细胞发生自噬性死亡。

小鼠胃类器官培养中真菌污染的鉴定与控制

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可抑制污染物的药物及最适浓度。结果小鼠胃类器官培养过程中的污染物为出芽短梗霉菌;500μg/L的两性霉素B可有效抑制污染的出芽短梗霉菌;控制真菌污染后成功构建小鼠胃类器官,第9 d时检测类器官仍具有活性。结论出芽短梗霉菌可引起小鼠胃类器官培养过程中的真菌污染,通过添加两性霉素B控制真菌污染可成功构建小鼠胃类器官。