miR-155下调心肌细胞ATR1α表达改善心肌细胞肥大

目的研究微小RNA(miR)-155对心肌细胞肥大的影响,以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体1α亚型(angiotensinⅡreceptor subtype 1α,ATR1α)在其中的作用。方法AngⅡ诱导体外培养大鼠心肌细胞H9C2(2-1)肥大,将miR-155模拟物(mimics)和miR-155抑制物(inhibitors)转染入心肌细胞。测量心肌细胞表面积。实验分为对照组、AngⅡ组、模拟物组、miR-155抑制物组、AngⅡ加模拟物组、AngⅡ加抑制物组。实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达。逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、ATR1αmRNA表达水平。Western blot法检测ATR1α蛋白表达水平。结果与AngⅡ组比较,AngⅡ加模拟物组处理可降低心肌细胞ANP、β-MHC mRNA及ATR1αmRNA和蛋白表达水平(P<0.05),心肌细胞表面积降低(P<0.05);AngⅡ加抑制物组处理ATR1αmRNA和蛋白表达水平增加(P<0.05),但ANP、β-MHC mRNA表达水平及心肌细胞表面积改变差异无统计学意义(P>0.05),仅miR-155mimics或miR-155inhibitors处理各项指标均改变差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-155过表达抑制心肌细胞肥大;ATR1α可能为其负性调控作用靶点。

ACE-siRNA对人脐静脉内皮细胞MMP-9/TIMP-1及ET-1/NO表达的影响

目的观察血管紧张素转化酶-小分子干扰RNA(ACE-siRNA)对原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、一氧化氮(NO)、血管收缩因子内皮素-1(ET-1)表达的影响。方法培养原代HUVECs,脂质体转染ACE-siRNA入细胞,观察其对ACE mRNA和蛋白表达的影响。内皮细胞分为正常对照组,血管紧张素2刺激组(AngⅡ组)及AngⅡ刺激联合ACE-siRNA转染组(AngⅡ+siRNA组),采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组MMP-9及TIMP-1 mRNA表达变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组MMP-9及TIMP蛋白表达;硝酸还原酶法检测NO浓度,酶联免疫吸附试验检测ET-1浓度。结果ACE-siRNA转染后48 h有效抑制ACE mRNA和蛋白表达(P<0.05)。与正常对照组比较,AngⅡ组MMP-9 mRNA、蛋白表达、MMP-9/TIMP-1比例和ET-1浓度增加,NO浓度降低(P<0.05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+siRNA组MMP-9mRNA、蛋白表达、MMP-9/TIMP-1比例和ET-1浓度下降,NO表达增加(P<0.05)。结论特异性ACE-siRNA可有效沉默ACE表达,增加NO释放,减少ET-1表达,下调MMP-9/TIMP-1比例。

流体切应力对衰老内皮祖细胞血管内皮修复能力的影响及机制研究

目的探讨体外流体切应力对老年志愿者内皮祖细胞(EPC)功能活性的影响及可能的分子机制。方法抽取老年志愿者外周血20ml,采用密度梯度离心法分离提取EPC。在体外采用生理范围(0.15mN/cm2)流体切应力处理培养后的老年志愿者EPC 24h,观察EPC体外的迁移、黏附能力的变化。通过建立裸鼠颈动脉拉脱损伤模型,观察流体切应力对老年志愿者EPC裸鼠颈动脉内皮损伤修复能力的影响。实时RT-PCR和Western blot检测EPC表面相关基因和蛋白的表达情况。结果体外切应力干预明显提高老年志愿者EPC体外的迁移、黏附能力,0.15mN/cm2体外切应力干预24h能提高EPC修复损伤血管内皮的能力[干预前:(33.1±5.9)%;干预后:(49.1±7.1)%,P<0.01]。基因和蛋白水平检测显示,EPC表面的趋化生长因子受体4(CXCR4)信号通路明显上调(P<0.01)。结论流体切应力干预显著改善老年志愿者EPC血管内皮损伤修复能力,其机制可能与EPC表面的CXCR4信号通路密切相关。

微小RNA-155调节钙调磷酸酶和活化T细胞核因子4表达对心肌细胞肥大的影响

目的研究微小(microRNA,miR)-155对心肌细胞肥大的影响及对钙调磷酸酶(CaN-β)和活化T细胞核因子4(NFAT-4)表达的调控作用。方法培养大鼠心肌细胞H9C2(2-1),血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大,脂质体转染法将miR-155模拟物和miR-155抑制物转染入心肌细胞。分为对照组、AngⅡ组、mimics组、inhibitors组、AngⅡ+mimics组和AngⅡ+inhibitors组。实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达。逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和CaN-βmRNA表达水平。Western blot法检测CaN-β和NFAT-4蛋白表达水平。结果与AngⅡ组比较,AngⅡ+mimics组ANP、β-MHC、心肌细胞表面积、CaN-βmRNA和蛋白表达及NFAT-4蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CaN-β可能为miR-155的作用靶点,miR-155可通过负性调控CaN-β和NFAT-4的表达,减少心肌细胞ANP和β-MHC表达,抑制心肌细胞肥大。

测定急性冠脉综合征患者小动脉弹性指数的临床意义

目的探讨急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome,ACS)患者监测小动脉弹性指数(C2)水平的临床价值。方法前瞻性、连续性纳入我院心血管内科于2011年1月至2013年7月期间所收治新发病的ACS患者,并以同样方式纳入同期入院的稳定型心绞痛(Stable angina,SA)患者作为对照组。收集两组患者的临床资料,比较各项危险因素之间的差异性,采用多因素Logistic模型建立回归分析,进一步筛查其中独立、敏感的影响指标。经由一元线性回归分析测定各项敏感指标与C2水平之间的关联性。结果两组患者基线资料比较显示,共有C2等11项危险因素存在显著差异。经多因素Logistic回归分析验证,低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血清脂联素(APN)、血浆纤维蛋白原(FIB)、超敏肌钙蛋白I(c-TNI)及C2是ACS患者的独立敏感因素。单因素方差分析显示不同C2水平时FIB及HDL-C的组间资料比较差异均无统计学意义(P>0.05),而c-TNI、LDL-C、APN的组间资料比较则差异均有统计学意义(P<0.05)。对上述三项指标进行一元线性回归分析,LDL-C与C2呈显著负相关(回归系数=-1.566,Pearson相关系数=0.591,P=0.018),APN与C2呈显著正相关(回归系数=0.075,Pearson相关系数=0.507,P=0.043),c-TNI与C2呈非线性相关(P>0.05)。结论 C2水平可作为ACS患者的高危风险因子用于指导临床诊疗,亦可动态评估ACS的病情进展,建议临床推广。

拉西地平对原发性高血压患者内皮祖细胞内皮修复能力的影响

目的探讨拉西地平对高血压患者外周血内皮祖细胞(EPCs)体外功能活性及在体再内皮化能力的影响。方法选择初发的原发性高血压患者和性别、年龄匹配的健康志愿者各10例,分离其外周血单个核细胞诱导分化成EPCs。培养7天后用不同浓度的拉西地平10、100以及1000nmol/L预处理,体外观察EPCs的迁移、黏附功能;建立裸小鼠颈动脉损伤模型,分别移植未处理与100nmol/L的拉西地平预处理的高血压病人外周血EPCs,在体观察EPCs的修复效能。用Realtime RT-PCR及Western-blot检测EPCs表面基因和蛋白的表达情况,探讨拉西地平影响内皮化的分子机制。结果不同浓度的拉西地平预处理高血压病人外周血EPCs,体外迁移和黏附功能较未处理组明显增强,100nmol/L最为显著(p<0.05);100nmol/L的拉西地平预处理的EPCs在体再内皮能力较对照组显著增加(p<0.01)。基因及蛋白水平检测显示,不同浓度的拉西地平处理后,EPCs表面的CXCR4表达增加,100nmol/L最为显著(p<0.001)。结论拉西地平明显改善高血压病人EPCs血管损伤修复能力,可能与CXCR4有关。

法舒地尔改善内皮祖细胞功能活性的机制研究

目的:研究法舒地尔对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能活性及一氧化氮(NO)合成的影响。方法:利用密度梯度离心法分离、培养人外周血单个核细胞,由FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色鉴定正在分化的EPCs。将分离、培养的EPCs分为对照组、法舒地尔组(10μmol/L)和内皮型一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME,100μmol/L)干预组。分别采用免疫荧光染色计数法、Transwell小室法、粘附实验以及体外小管形成实验观察法舒地尔干预后EPCs增殖、迁移、粘附以及血管形成能力的变化情况,同时采用Greiss法检测法舒地尔处理后EPCs合成NO的变化情况,应用Western blot计数检测法舒地尔处理EPCs后一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化eNOS(Ser1179)蛋白的表达变化情况。结果:与对照组相比,法舒地尔组EPCs增殖、迁移、粘附以及血管形成等功能活性显著提高,而在L-NAME组,法舒地尔改善EPCs功能活性的作用受到明显的抑制。另外,EPCs经法舒地尔处理后,NO的合成分泌水平以及磷酸化eNOS(Ser1179)表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。结论:法舒地尔具有促进EPCs增殖、迁移、粘附等功能的作用,其主要机制可能与法舒地尔促进eNOS的活性,进而增加NO的合成分泌有关。

RNA干扰沉默血管紧张素转化酶调节血管紧张素2-血管紧张素1-7肽-胞外信号调节激酶轴改善人脐静脉内皮细胞功能

目的观察RNA干扰沉默原代培养人脐静脉内皮细胞的血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)对ACE2-血管紧张素1-7肽(angiotensin 1-7,Ang1-7)-胞外信号调节激酶(extracellular regulated kinase,ERK)轴表达和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)/一氧化氮(nitric oxide,NO)表达的影响,探讨RNA干扰改善内皮细胞功能的机制。方法培养原代人脐静脉内皮细胞,脂质体转染化学合成的ACE-siRNA入内皮细胞,观察其对ACE mRNA和蛋白表达的影响。内皮细胞分为对照组,AngⅡ刺激组(AngⅡ组)及AngⅡ刺激联合ACE-siRNA转染组(AngⅡ+siRNA组),半定量逆转录RCR法检测各组ACE mRNA表达变化,Western blot法检测各组ACE、ACE2、ERK蛋白表达的变化;酶联免疫法检测各组ET-1、Ang1-7表达水平;酶反应法检测各组NO表达水平。结果作用于ACE mRNA序列3261-3279位点的ACE-siRNA能在转染后48 h有效抑制ACE mRNA和蛋白表达。和AngⅡ组对比,AngⅡ+siRNA组ACE2、Ang1-7、ERK蛋白和ET-1表达明显增加(P<0.05),NO表达下调(P<0.05);ACE siRNA转染入内皮细胞后,ACE2、Ang1-7、ERK蛋白表达进一步增加(P<0.05),由AngⅡ诱导的ET-1释放减少(P<0.05),内皮细胞NO水平升高(P<0.05)。结论特异性ACE-siRNA对ACE表达有沉默效应,它能进一步调整ACE2表达,并通过激活Ang1-7-ERK轴改善内皮细胞功能。