脱细胞异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损促进神经肌结构重建和功能恢复的实验研究

目的 探讨脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损对神经 肌结构重建和功能恢复的作用。 方法 用脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经 10mm缺损 ;称量术后 12周、2 4周实验组手术侧胫骨前肌湿重 ,并与对照组术侧该肌湿重进行比较 ;用电生理学方法检测再生神经传导速度及其对胫骨前肌的再支配作用 ;用AChE和AChE结合镀银染色观察胫骨前肌内神经和运动终板的再生。 结果 术后 12周、2 4周实验组胫骨前肌湿重与对照组相比无显著差异 ;再生神经传导速度与对照组相比 ,也无显著差异 ;术后 12周肌内见有AChE阳性反应的运动终板 ;2 4周运动终板AChE阳性反应加深 ,并整齐地排列于胫骨前肌的中上部形成终板带 ,经结合镀银染色后可见再生的神经束及其发出的分支与运动终板相连 ;肌电显示再生神经已支配胫骨前肌的运动。结论 脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损具有促进神经 肌结构重建和运动功能恢复的作用。

脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用。 方法 用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损 ,并对再生神经进行电生理学功能测试 ,光镜、电镜观察移植物内的再生神经 ,并进行统计分析。 结果 术后 13周内 ,动物未见炎症及排斥反应。用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损 ,再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异。 结论 脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性 ,它对缺损的坐骨神经再生有促进作用。

猫肠系膜下神经节神经元与肠壁内传入神经元的突触联系

采用神经纤维和突触溃变的光镜和电镜结合方法,探讨肠系膜下神经节与来自肠神经丛内的传入神经元间的突触联系.切断肠系膜下神经节发出的分支,光镜下见节内存在溃变神经纤维;电镜下见有突触溃变,溃变轴突终末的大小多为lμm左右,主要含有球形透明囊泡,线粒体多少不等,与肠系膜下神经节神经元的树突或胞体形成轴-树型或轴-体型突触;溃变突触见有三种类型:电于致密型,电子透明型和神经丝型.确切证明了来自肠壁内的传入神经元的轴突终末与肠系膜下神经节神经元构成突触联系,为“内脏-神经节-内脏反射”提供了形态学依据.

猫十二指肠的植物神经支配

用HRP逆行标记法研究猫十二指肠的植物神经支配。十二指肠的交感节后神经元位于腹腔神经节、肠系膜前神经节和双侧T_6-L_2交感干神经节。前二者和后者数量之比是18:1.腹腔神经节和肠系膜前神经节内的标记细胞有局部定位分布的特点,即多集中在节的右后半部。交感干神经节的标记细胞较集中分布于 T_8-T_(13),并以右侧占优势(占59.45％)。十二指肠的副交感节前神经元位于双侧的迷走神经背核,平闩上下各1mm范围内较为集中。

腹腔-肠系膜上神经节内腹部内脏器官的代表区

目的 探讨支配腹部内脏器官的交感节后神经元在腹腔 -肠系膜上神经节内的代表区。 方法 用HRP逆行标记法 ,显微镜描图仪做连续切片描图记录 ,计数标记细胞的面数密度 ,并经统计学处理。 结果 猫脾、胰、肾、十二指肠和空回肠交感节后神经元在腹腔 -肠系膜上神经节内具有各自的集中分布区和分散分布区 ,亦即各自的局部定位区。支配脾的交感节后神经元集中区位于该节的左侧上部 ;支配胰的交感节后神经元集中区位于该节两侧的上中后部 ;支配左、右肾的交感节后神经元集中区位于该节的中下部的两侧 ;支配十二指肠的交感节后神经元集中区位于该节的右侧后上部 ;支配空回肠的交感节后神经元集中区位于该节的两侧中下部。支配上述各器官的交感节后神经元的分散区则分别位于其各自集中区的周围。 结论 腹腔 -肠系膜上神经节内存在上述器官各自的功能代表区。

周围神经损伤和再生

本文综述了不同类型周围神经损伤的病理生理过程以及损伤局部微环境中的物质对神经再生的影响和调节

周围神经再生及其影响因素

周围神经损伤的形态结构重建和功能恢复，是相当复杂的生物学问题之一，其影响因素众多。此文概述了周围神经损伤后的再生过程；着重综述了雪旺细胞、神经营养因子以及神经基质各种成分对周围神经再生和功能恢复的影响。

猫十二指肠感觉神经的来源

本文用辣根过氧化物酶(HRP)逆行标记法研究猫十二指肠感觉神经的来源。标记细胞以椭圆形和中型为多,分布在双侧T_3～L_4脊神经节和迷走神经下节,右侧多于左侧。脊神经节内标记细胞集中分布在T_6～T_(13)节段。标记细胞的分布显示了既分散又集中的特点。

大鼠肾上腺髓质交感节前神经纤维的分布——PHA-L顺行追踪法研究

用PHA-L顺行追踪法观察大鼠肾上腺髓质内交感节前神经纤维的来源、走行和分布特征.结果表明,来自胸8～10节段脊髓侧柱分布到肾上腺髓质的交感节前神经纤维,随内脏大神经走行,而后又成为内脏大神经的分支进入并通过肾上腺神经节,向内下方走行,在肾上腺内侧缘分成2～3支后,分别在肾上腺被膜内走行一段距离或立即进入肾上腺.在皮质内无分支,以若干小神经束穿经皮质到达髓质;在髓质内以粗细不等的纤维分散走行在髓质细胞索之间,在走行中逐渐分为多种形态的终末支,有的为带为许多膨体的树枝状分支,有的为带有许多膨体的终末支形成丛状或网状,并且再分支分布于髓质细胞之间.

胃肠道的神经支配

胃肠道是保证机体摄取营养物质、维持正常新陈代谢的重要功能系统，它的功能活动是在神经体液的调节下进行的。因此，有关胃肠道神经支配的研究，一直是国内外学者所重视的研究课题，１９２１年Ｌａｎｇｌｅｙ根据肠道神经系在结构和功能上区别与其它内脏器官的神经支配的特点，而将其命名为肠道神经系。近年来，随着研究技术的发展对胃肠道神经支配的研究８益深入，取得许多新的结果。本文根据以前的、特别是最近十几年来的文献，就胃肠遁神经的外部来源，胃肠道壁内（固有）神经丛的分布，胃肠道神经系感觉神经元的研究等几个问题，进行分析讨论，并提出某些有待深入研究的问题。

猫盲肠、横结肠、乙状结肠的交感节后神经元在肠系膜后神经节的局部定位

应用HRP逆行标记法研究猫盲肠、横结肠、乙状结肠的交感节后神经元在肠系膜后神经节的局部定位。结果表明:盲肠交感节后神经元集中分布在肠系膜后神经节的中下部;横结肠交感节后神经元集中分布在右侧中间部;乙状结肠交感节后神经元集中分布在左侧上半部。

降钙素基因相关肽在哮喘豚鼠内脏传入系统的定量分析

本文应用放射免疫分析方法研究了实验性哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统内降钙素基因相关肽含量的变化 ,藉以探讨降钙素基因相关肽在哮喘发病时的作用机制。结果表明 ,哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统 (结状神经节、C7～T5 节段脊神经节和脊髓后角、孤束核等处 )中的降钙素基因相关肽含量明显高于各对照组 ( P<0 .0 5)。本研究提示 ,下呼吸道和肺的内脏传入成分中的降钙素基因相关肽可能参与哮喘发病的病理生理过程。

碱性成纤维生长因子和神经生长因子联合应用培养成年大鼠海马神经干细胞向神经元样细胞的分化

背景:影响神经干细胞向神经元分化的因素很多,各种营养因子可以不同程度地刺激神经干细胞向神经元分化,如何使神经干细胞大量分化为神经元是研究的热点问题。目的:观察联合应用碱性成纤维生长因子和神经生长因子对成年大鼠海马神经干细胞为神经元的影响。方法:无菌条件下分离大鼠脑海马组织,传至第4代克隆球直径约为200μm时,滴加DMEM/F12+2%B27+20μg/L表皮生长因子+20μg/L碱性成纤维细胞生长因子,进行单细胞克隆培养,传代的神经干细胞分成空白对照组、碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子+神经生长因子组。观察传代后的克隆球进行神经干细胞免疫细胞化学染色鉴定,计数神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率,检测神经干细胞向神经元的分化情况。结果与结论:①单细胞克隆培养后,克隆球细胞表达巢蛋白,诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达。②与空白对照组神经干细胞分化为神经元的比例比较,碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组+神经生长因子组均明显提高(P<0.05),且碱性成纤维细胞生长因子组+神经生长因子组神经元的比例最高(P<0.05)。提示,碱性成纤维细胞生长因子可以提高神经生长因子诱和神经生长因子均可促进神经干细胞向神经元分化,且二者联合应用效果更佳。

黄芪皂苷Ⅳ对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨黄芪皂苷Ⅳ对大鼠缺血/再灌注损伤后海马神经元Bc l-2、Bax及神经元细胞凋亡表达的影响。方法实验动物随机分为假手术组、模型组、黄芪皂苷Ⅳ组、尼莫地平对照组。线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,免疫组织化学方法检测大鼠海马Bc l-2、Bax蛋白表达,TUNEL方法检测神经元细胞凋亡。结果与模型组和尼莫地平对照组比较,黄芪皂苷Ⅳ组Bax蛋白表达和细胞凋亡指数明显降低(P<0.05),Bc l-2蛋白表达及Bc l-2/Bax比值明显上调(P<0.05)。结论黄芪皂苷Ⅳ能够促进海马神经元Bc l-2表达,抑制Bax表达,升高Bc1-2/Bax比值,降低细胞凋亡指数,这可能是其抑制脑缺血后神经元凋亡的机制之一。

超短波对大鼠周围神经缺损修复术后神经再生的影响

目的:通过检测小剂量超短波对脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损后再生神经传导速度、患侧胫前肌湿重比率、患侧L4脊髓内脑源性神经营养因子(BDNF)和降钙素基因相关肽(CGRP)的表达,来观察小剂量超短波对周围神经缺损修复术后神经再生的影响。方法:将36只Wistar大鼠随机分成3组:正常组(n=4),对照组(n=16)及实验组(n=16),对照组采用脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经1cm缺损,实验组于术后第2天开始给予小剂量超短波治疗,7min/天,1次/天,直至取材,后两组分别于术后第2、4、8、12周时检测患侧L4脊髓内BDNF及CGRP蛋白表达,术后第12周时行患侧胫前肌湿重比率及再生神经电生理检测。结果:①对照组术后第2周时患侧L4脊髓内BDNF表达已开始增高,第4周时达高峰,第8周后逐渐降低,第12周时仍显著高于正常对照组,与对照组相比,实验组只有在第8周时BDNF蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),其余各时间点差异无显著性意义。②对照组患侧L4脊髓内CGRP蛋白表达与BDNF表达趋势基本一致,实验组在术后各时间点脊髓内CGRP蛋白表达均明显高于对照组(P<0.05)。③与对照组相比,术后第12周时实验组再生神经传导速度加快,波幅升高,潜伏时缩短,胫前肌湿重比率明显增加(P<0.05)。结论:小剂量超短波可以促进大鼠周围神经缺损修复术后神经髓鞘及轴索的再生,此作用可能与小剂量超短波上调患侧脊髓内CGRP蛋白的表达,延长BDNF表达的高峰持续时间有关。

许旺细胞与脱细胞神经移植物共培养在周围神经损伤修复中的作用

目的:观察体外分离、培养、纯化的许旺细胞对脱细胞神经移植物修复神经损伤的促进作用,为临床应用组织工程化神经修复周围神经缺损提供实验依据。方法:实验于2004-04/2005-04在中国医科大学组织工程实验室完成。纳入普通级雄性Wistar大鼠24只,体质量180～220g。随机分为实验组、空白对照组、自体移植对照组共3组,每组8只。分笼饲养。另纳入5～8d龄Sprague-Dawley乳鼠40只,取其双侧坐骨神经与臂丛神经。实验组大鼠右后腿用种植许旺细胞的ARSN桥接人为造成的神经缺损。空白对照组大鼠右后腿用单纯ARSN桥接人为造成的神经缺损。酶反复消化法与差速贴壁法分离和培养许旺细胞;许旺细胞与10mm长的脱细胞神经移植物共培养后,应用外科手术移植到大鼠坐骨神经缺损处,自体移植对照组大鼠右后腿用单纯切断的神经上下颠倒原位桥接人为造成的神经缺损。13周取材通过透射电镜和扫描电镜观察神经纤维的再生情况。结果:Wistar大鼠24只全部进入结果分析,没有脱失。①实验组较空白对照组的再生有髓神经纤维均匀,轴索略粗,髓鞘厚度有差别,部分神经纤维髓鞘还未形成板层结构,许旺细胞包绕神经纤维,轴索内微丝微管结构较清晰,无髓神经纤维直径较小,不均匀分布在有髓神经纤维之间,由一层纤维结缔包裹形成纤维束,实验组较自体移植对照组的髓鞘略薄,自体移植组再生神经纤维均较粗,许旺细胞包裹轴突形成排列规则、电子密度较高的髓鞘,髓鞘厚薄基本相同。②实验组可见大量许旺细胞呈双极梭形,并且首尾相连排列成链状或网状特征性分布。许旺细胞还可在神经纤维上的胶原丝上附着。③实验组有髓神经纤维数、髓鞘厚度、G率(有髓纤维总面积/神经干总面积)接近自体移植对照组,差异无显著性意义[(5344±592),(5514±373);(3.13±0.16),(3.19±0.25)μm;(48.43±3.62)%,(57.11±2.28)%;P>0.05];与空白对照组比较差异有显著性意义[(5344±592),(3191±236);(3.13±0.16),(1.28±0.33)μm;(48.43±3.62)%,(31.05±4.19)%;P<0.05]。结论:与许旺细胞共培养的脱细胞神经移植物可加快宿主轴索再生,促进神经损伤修复,是临床修复神经缺损的可行办法。

组织工程化天然神经支架的制备

目的 为修复神经干缺损提供理想的天然神经支架。方法 取Wistar大鼠双侧坐骨神经 ,运用低渗 -脱细胞的组织工程学方法处理大鼠坐骨神经 ,对该神经支架分别进行组织学和透射、扫描电镜检测。结果 神经水平切面上见雪旺细胞基底膜管呈网眼状 ,纵切面上呈典型的长空管状 ;未见轴突、髓鞘和雪旺细胞核。透射、扫描电镜观察 ,空虚的基底膜管内未见残留结构 ,基底膜管壁胶原纤维排列有序。结论 本实验采用的低渗 -脱细胞的组织工程学方法可制备出理想的周围神经支架。该支架可作为神经干缺损的桥接物 ,也可作为神经组织工程种子细胞的支架。

深低温冻储同种异体气管移植并骨髓间充质干细胞移植后气管上皮细胞血管内皮生长因子的表达

背景:深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减抗原性。目的:静脉移植骨髓间充质干细胞合并深低温处理供体气管后进行同种异体气管移植,观察骨髓间充质干细胞在促进上皮再生和再血管化后的作用。方法:用深低温冻储2周和6周的气管进行Wistar大鼠同种异体气管移植后,用PKH-26标记的3～5代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入受体内,等量的磷酸盐缓冲液注射作为实验对照。观察供体气管的组织学和血管内皮生长因子蛋白表达。结果和结论:骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储后的移植气管结构完整,软骨无变性坏死;深低温6周的移植气管上皮再生情况优于2周。骨髓间充质干细胞移植组的上皮细胞表达血管内皮生长因子水平高于磷酸盐缓冲液对照组。结果提示,骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储6周后移植气管存活期好于深低温冻储2周;骨髓间充质干细胞能够促进移植物周围新生血管的增加,从而促进气管损伤的修复。

颧脂肪垫的解剖结构

目的:研究颧脂肪垫的解剖结构和固定结构,为寻找新的面中部年轻化手术方法打下基础.方法:对10具用40g/L甲醛浸泡过的尸体头部进行肉眼及显微镜下解剖,观察颧脂肪垫的位置、分布及与皮肤层和深部表浅肌肉腱膜系统(SMAS)层的固定结构.结果:发现颧脂肪垫为面中部皮下脂肪的一个增厚区域,它的范围外侧起自颧弓和颧骨体交界,内侧到达鼻唇沟,上界位于眼轮匝肌下缘,下界位于口角外下方,在老年尸体可达下颌缘,近似一个倒置的三角形.颧脂肪垫与皮肤层之间有三个由致密的细小纤维隔组成的区域紧密结合,其与深面的SMAS层之间同样有三个纤维隔连接.颧脂肪垫与颊脂体通过薄层的表情肌可以清楚地分开.结论:颧脂肪垫是面中部皮下层的重要结构,其周围有韧带和纤维隔起到固定的作用.通过悬吊颧脂肪垫结合传统的SMAS除皱术可以更好地改善面中部衰老的容貌.

联合应用碱性成纤维细胞生长因子和脑源性神经营养因子对成年大鼠脑海马神经干细胞分化为神经元的影响

背景：调控神经干细胞分化的微环境因素很多，数种因素可以不同程度地刺激神经干细胞向神经元分化，如何使神经干细胞更有效地分化为神经元尤为关键。目的：观察碱性成纤维细胞生长因子与脑源性神经营养因子联合应用对成年大鼠脑海马神经干细胞分化为神经元的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察．于2008-05在中国医科大学神经解剖研究室完成。材料：清洁级雄性SD大鼠3只，由中国医科大学实验动物部提供。方法：无菌条件下分离大鼠脑海马组织，胰蛋白酶消化后采用无血清培养技术体外培养神经干细胞，传至第4代克隆球直径约为200um时，滴加含B27、表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的DMEM／F12进行单细胞克隆培养。传代的神经干细胞分成4组：空白对照组加入含体积分数为10％胎牛血清的DMEM／F12培养液，碱性成纤维细胞生长因子组、脑源性神经营养因子组、联合组分别在空白对照组培养液的基础上加入10μg／L碱性成纤维细胞生长因子、200μg／L脑源性神经营养因子、10μg／L碱性成纤维细胞生长因子＋200μg／L脑源性神经营养因子，培养1周。主要观察指标：免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞，检测神经干细胞分化为神经元的比例。结果：单细胞克隆培养后，克隆球细胞表达巢蛋白，诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达。与空白对照组比较，碱性成纤维细胞生长因子组、脑源性神经营养因子组、联合组神经干细胞分化为神经元的比例均明显提高（t=3．409-7．558，P〈0．05），且联合组升高幅度尤为显著。结论：适宜浓度的碱性成纤维细胞生长因子和脑源性神经营养因子联合应用，比其单独应用具有更强的促神经干细胞向神经元分化的作用。