兔抗弓形虫Ⅰ型液泡型质子焦磷酸酶多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备兔抗弓形虫I型液泡型质子焦磷酸酶(Tg VP1)多克隆抗体并鉴定其应用。方法选择弓形虫ME49株Tg VP1氨基酸序列中的两条多肽,Tg VP1-1与Tg VP1-2,进行人工合成,并将其与KLH偶联作为抗原免疫新西兰大耳白兔,收集血清制备多克隆抗体,并通过ELISA、Western blot、免疫荧光等方法进行鉴定。结果经间接ELISA测定,兔抗Tg VP1-1及Tg VP1-2的多克隆抗体效价均达1∶128 000;Western blot结果显示两种多抗均能识别弓形虫天然蛋白中85 000左右条带,与Tg VP1预测相对分子质量大小相符,且特异性较好;通过免疫荧光技术检测到两株多抗识别的蛋白均定位于细胞质中,与酸性钙体的分布相同。结论采用人工合成多肽为免疫原所获得的兔抗Tg VP1多克隆抗体效价高,特异性好,弓形虫Tg VP1和酸性钙体的深入研究奠定了基础,同时也为弓形虫病的诊断提供了新的有效工具。