山柰酚通过改善肾小管上皮细胞的氧化应激与炎症反应减轻1型糖尿病小鼠肾损伤

背景糖尿病肾病是糖尿病最严重的并发症之一,长期高血糖会导致全身性的氧化应激和低度炎症状态。山柰酚是一种天然的黄酮类化合物,具有出众的抗炎和抗氧化的能力,可能会对糖尿病肾病的治疗有一定作用。目的研究山柰酚对糖尿病肾病小鼠肾损伤的治疗作用及其机制。方法18只6~8周龄FVB小鼠随机分为对照组、糖尿病模型组和山柰酚灌胃组,每组6只,并通过对模型组和山柰酚组腹腔注射链脲佐菌素构建1型糖尿病小鼠模型。模型建立后,治疗组灌胃山柰酚[70 mg/(kg·d)],对照组与模型组灌胃等量对照溶剂CMC-Na,16周后处死小鼠。病理染色观察小鼠肾病理损伤;qPCR和Western blot检测小鼠肾组织内炎症因子mRNA和氧化应激相关蛋白的表达;通过流式细胞术检测小鼠肾内巨噬细胞的数量和种类。体外建立高糖诱导肾小管上皮细胞(HK2)损伤模型,使用CCK-8试剂盒检测不同浓度山柰酚对HK2的活性影响,检测肾小管上皮细胞活性氧生成;qPCR和Western blot检测HK2内炎症因子mRNA和氧化应激相关蛋白以及炎症激活通路蛋白p38的表达。结果动物实验结果显示,与糖尿病模型组相比,经过灌胃山柰酚治疗后,肾病理损伤得到改善,肾小球系膜增生减少,足突融合减少;肾组织内白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α等炎症因子转录水平降低(P<0.01);NADPH氧化酶4表达降低(P<0.01);肾内炎性巨噬细胞数量减少,肾炎症微环境得到改善。细胞实验结果显示,山柰酚能够抑制高糖诱导下HK2的活性氧产生,改善氧化应激相关蛋白酶的表达(P<0.05);降低相关炎症因子mRNA的表达(P<0.01),且降低了p38的磷酸化(P<0.05)。结论山柰酚可能通过HO-1/p38通路减轻糖尿病肾小管上皮细胞炎症因子的分泌,增加相关氧化还原酶的表达,进而减轻糖尿病导致的肾损伤,保护肾功能。

脓毒症大鼠来源的外泌体对WJ-MSC的免疫调控能力的影响

目的探究脓毒症大鼠外周血来源外泌体对人脐带华通胶来源间充质干细胞(WJ-MSC)免疫调控能力的影响。方法采用盲肠穿孔结扎(CLP)方法建立脓毒症大鼠模型,分别提取对照组(假手术组)和实验组(CLP模型组)大鼠外周血的外泌体,鉴定其表面标志物及形态特征,并分别处理WJ-MSC,CCK8检测WJ-MSC的细胞活性,Annexin-VFITC/PI检测凋亡细胞比例,q PCR检测细胞因子(IL-10、TNF-α)的mRNA水平;分别将两组外泌体处理后的WJ-MSC与LPS刺激后的人单核巨噬细胞(THP-1)共培养,q PCR检测THP-1细胞中细胞因子(IL-6、IL-10、TNF-α、IL-1β)的mRNA水平变化。结果两组外泌体在表面标志物和形态特征上无明显差异;实验组外泌体不影响WJ-MSC的增殖活性,但可抑制其凋亡,同时能够上调IL-10的mRNA表达,下调TNF-α的mRNA表达;经过两组外泌体处理后的WJ-MSC,均能够降低LPS刺激下THP-1细胞中促炎性细胞因子(IL-1β,TNF-α)的表达,两组无明显差异。结论脓毒症大鼠外周血来源的外泌体能够上调WJ-MSC中IL-10的表达,下调TNF-α的表达,可增强其免疫调控能力。

腹膜透析滤出液外泌体miR-200a在不同腹膜转运特性患者中的表达差异及其生物学功能预测

目的·提取和鉴定腹膜透析滤出液(peritoneal dialysis effluent,PDE)外泌体,比较不同腹膜转运特性患者PDE外泌体miR-200a的表达水平,预测其潜在靶基因及参与的生物学过程。方法·将20例腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)患者按照腹膜平衡实验(peritoneal equilibrium test,PET)值分为H组(高转运/高平均转运)和L组(低转运/低平均转运)。每位患者收集500 mL留腹过夜PDE,浓缩后超速离心,透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、纳米粒子跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)和Western blotting鉴定外泌体。提取外泌体miRNA,实时荧光定量PCR检测2组患者PDE外泌体miR-200a的表达水平,分析其与PET值和超滤量的相关性。利用Targetscan、miRmap和miRWalk数据库预测miR-200a的靶基因,用DAVID数据库进行基因功能(gene ontology,GO)富集分析。结果·浓缩的PDE超速离心后提取到的外泌体,TEM下呈双层膜包裹的圆形囊泡,NTA显示其直径大多在50~150 nm,表面具有外泌体标志蛋白CD9和CD63。L组中PDE外泌体miR-200a的相对表达量显著高于H组,并且与PET值呈负相关(r=-0.871,P=0.000),与4 h超滤量呈正相关(r=0.448,P=0.048),但与24 h超滤量无相关性(r=0.355,P=0.125)。生物信息学分析发现共有679种基因可由3个数据库共同预测到;GO分析显示这些靶基因不仅参与正向调控间充质细胞增殖,也在金属离子结合方面有一定富集。结论·PDE中存在外泌体,腹膜转运特性较低的患者PDE外泌体miR-200a相对表达量较高,其与PET值呈负相关,与4 h超滤量呈正相关。miR-200a的潜在靶基因众多,可能通过不同生物学过程影响腹膜转运特性。

纤维样肾小球病一例

纤维样肾小球病是一种罕见的肾小球疾病,其主要临床表现为蛋白尿、血尿、高血压和肾功能异常,一般不伴有系统性疾病。本病的特异性诊断标准为电子显微镜下见肾小球内存在刚果红染色阴性的类似淀粉样纤维物质。纤维样肾小球病的发病机制不明,预后较差,目前尚无明确有效的治疗方法。现报道1例72岁女性纤维样肾小球病患者,其病理表现为膜增生性肾小球肾炎,经糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗后病情无缓解,进入终末期肾病,行维持性血液透析治疗。

护理干预在全胃切除术治疗胃癌中的应用价值探讨

目的探讨在对胃癌患者给予全胃切除术治疗期间,开展护理干预的临床价值。方法选择我院2014年4月至2016年8月收治的胃癌患者130例作为研究对象;所有胃癌患者凭借抽签分组;对照组:全胃切除术治疗期间配合选择常规护理理念展开护理干预;观察组:全胃切除术治疗期间配合选择综合护理理念展开护理干预;对比全胃切除术并发症发生率以及疾病护理工作开展满意度。结果在全胃切除术并发症发生率方面,观察组胃癌患者(3.08%)低于对照组胃癌患者(20.00%)非常明显(P<0.05);在疾病护理工作开展满意度方面,观察组胃癌患者(98.46%)高于对照组胃癌患者(80.00%)非常明显(P<0.05)。结论对于胃癌患者的手术指征等加以明确后,临床在选择全胃切除术进行治疗期间,开展综合护理干预,可以成功降低全胃切除术临床治疗并发症发生率,确保护患关系可以保持密切,从而对于胃癌患者疾病的康复发挥明显的促进作用。

对行阑尾切除术阑尾炎患者实施综合护理的作用探讨

目的探讨对行阑尾切除术的阑尾炎患者实施综合护理的作用。方法选取2015年4月至2016年10月我院收治的行阑尾切除术的108例阑尾炎患者作为研究目标,按照不同护理方法分为常规组和干预组,每组中54例患者,常规组给予常规护理,干预组给予综合护理,对两组临床护理效果进行比较。结果干预组护理总有效率、护理满意度与常规组进行统计比较,两组间具有统计学差异(P<0.05);常规组并发症发生率显著高于干预组,组间差异明显(P<0.05)。结论综合护理可显著提高阑尾炎行阑尾切除术患者的治疗效果,改善护理质量,降低并发症发生概率,值得临床采纳和进一步推广。

居家腹膜透析患者自我管理量表的编制及信度、效度分析研究

目的·完成腹膜透析(腹透)患者居家透析操作过程中自我管理水平量表的编制及信度、效度分析。方法·通过患者访谈、专家咨询、查阅文献等方式,在结合腹透患者管理临床经验的基础上完成对初始量表的编制。采用方便抽样的方式发放问卷,通过临界比值法、同质性检验筛选条目,探索性因子分析评估结构效度,最终确定量表共同因素数目及条目。计算Cronbach’sα系数、折半系数对量表信度进行分析。结果·初始量表由5个维度26个条目组成,共发放136份问卷,收集有效问卷132份。根据项目分析结果,除条目3未达到校正题项与总分相关性、共同性、因素负荷量的筛选条件外,其余条目均满足入选标准。因条目3是考察患者无菌意识的关键步骤,经专家咨询后保留该条目至因素分析。初始量表取样适切性量数(KMO)值为0.880,Bartlett’s球形检验χ2值为2272.938(P=0.000),提示总体的相关矩阵有共同因素存在,适合进行因素分析。根据量表初始设计条目初衷,限定萃取5个共同因素,采取直交转轴的最大变异法,最终删除条目7、11、16,根据各因素构面包含的条目变量特性,提取的共同因素分别命名为“对腹透并发症和腹透充分性评价的知晓度”“腹透规范化操作能力”“药物管理能力”“饮食管理能力”“腹透效果评估和监测能力”,形成5个维度23个条目的正式量表,各维度的特征值分别为4.604、3.286、3.207、2.817、2.140,累积方差贡献率为66.428%。最终总量表Cronbach’sα系数为0.930,折半系数为0.946。结论·腹透患者自我管理水平量表具有良好的信度和效度,可用于腹透患者自我管理能力测评。

慢性牙周炎在腹膜透析患者中的发病状况及其与患者透析充分性的相关性研究

目的·基于单中心人群分析腹膜透析患者慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)的发病状况,探讨CP严重程度与腹膜透析充分性指标的相关性。方法·选取2018年12月—2019年12月于上海交通大学医学院附属第九人民医院肾脏内科腹膜透析患者,符合入选标准者共57例。收集患者基线资料,透析充分性评价指标,包括尿素清除指数、肌酐清除率等,及其他相关生化指标,同时收集CP相关指标,包括临床附着丧失、牙龈指数、探诊深度。比较患者不同严重程度CP的腹膜透析患者透析充分性相关指标及指标达标率的差异,采用Pearson相关性分析、线性回归分析探讨CP相关指标与腹膜透析充分性指标之间相关性。结果·入选的所有腹膜透析患者均患有中度或重度的CP,中度CP患病率为24.6%,重度CP患病率为75.4%。重度CP组中、重度贫血的比例高于中度CP组(28.0%vs 14.3%),但差异无统计学意义(P>0.05);2组的透析充分性评价指标及指标达标率之间差异也均无统计学意义(均P>0.05)。CP相关指标与透析充分性相关指标间无明显相关性(均P>0.05)。结论·腹膜透析患者中、重度CP患病率较高,同时患有重度CP的腹膜透析患者可能有发生中、重度贫血倾向;CP的严重程度与腹膜透析患者透析充分性之间未发现明显相关性。

间充质干细胞外泌体对腹膜间皮细胞高糖损伤的作用研究

目的 探讨间充质干细胞来源外泌体(MSCs-Exo)对高糖致腹膜间皮损伤的影响。方法 将MET-5A细胞分成3组:正常对照组(不予处理)、高糖组(高糖处理)、共培养组(高糖和MSCs-Exo共培养),通过CCK-8法选用效果最明显的高糖浓度和MSCs-Exo浓度,各组分别处理24 h后收集细胞和上清液。CCK-8法测定各组细胞增殖活力,流式细胞技术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测细胞因子IL-6、TNF-α的表达,ELISA检测培养上清液中IL-6的水平。结果高糖组细胞的增殖能力明显低于正常对照组(P<0.001),细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的表达显著高于正常对照组(P<0.001);与高糖组相比,共培养组细胞增殖能力提高(P<0.001),细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的表达则明显下调(P<0.05)。结论 高糖对腹膜间皮细胞有明显的促凋亡和促炎作用,MSCs-Exo可以促进腹膜间皮细胞的增殖,抑制高糖刺激下细胞凋亡的发生和炎症因子的表达。

BK通道抑制剂对人脐带华通胶来源的间充质干细胞的增殖、凋亡及细胞因子的影响

目的探究BK通道抑制剂对人脐带华通胶来源的间充质干细胞(WJ-MSC)的细胞活性、细胞凋亡、细胞因子分泌的影响。方法以组织贴壁法分离培养人WJ-MSC,Western-blot检测BK通道的表达;用不同浓度BK通道抑制剂处理后,CCK-8法检测细胞活性,Annexin-V-FITC/PI检测细胞凋亡,Elisa检测细胞因子(IL6、IL10)的表达。结果人WJ-MSC上存在BK通道的表达,BK通道抑制剂能够明显降低细胞活力(P<0.05);促进细胞凋亡(P<0.05);促进细胞因子(IL6)的分泌(P<0.05),但并不增加IL10的分泌。结论 BK通道抑制剂能够抑制人WJ-MSC的活性,促进细胞凋亡,促进IL6的分泌。

急性肾损伤的内质网应激相关基因和通路的生物信息学分析

目的通过生物信息学方法及动物实验寻找并验证与内质网应激相关的急性肾损伤(AKI)共表达关键基因,探索分析这些基因在AKI的发生和发展中的作用。方法本文选取了基因表达综合数据库中的GSE30718数据集,从中筛选与内质网应激相关的差异基因。采用差异分析、分组比较、蛋白相互作用网络分析、相关性分析、受试者工作特征(ROC)曲线分析、基因本体和京都基因与基因组百科全书富集分析等方法,对内质网应激的特征基因的表达特征进行分析。进一步使用了对侧肾切除+单侧肾缺血再灌注损伤小鼠模型进行实验验证,通过在不同时间点(1 d、3 d、7 d和14 d)采集模型小鼠的肾脏组织进行实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)实验,对相关基因的表达特征进行分析。结果发现11个与内质网应激相关的AKI共表达基因蛋白,包括FOS、VMP1、CEL、HSP90B1、TIMP1、FAS、RDH12、RALYL、PCK2、LCN2和PTX3。通过蛋白相互作用网络分析,找出了与上述基因密切相关的20个节点基因;相关性分析提示除HSP90B1与FOS之间无明显相关性外,其他内质网应激相关差异基因两两之间均密切相关;ROC曲线分析提示上述11个基因的ROC曲线下面积均>0.70;基因本体和京都基因与基因组百科全书富集分析提示,FOS、HSP90B1和LCN2参与了IL-17信号通路,通过影响细胞的增殖、内质网功能、及组装蛋白的分泌,从而影响AKI进展。在对侧肾切除+单侧肾缺血再灌注损伤小鼠模型的qPCR实验中,Timp1、Lcn2基因表达早期显著增高,而Fos仅在14 d时显著增加;Hsp90b1、Ptx3、Rdh12等基因表达呈总体下降趋势,且均在早期出现了显著的下降。Western印迹结果提示Lcn2、Timp1、c-Fos随AKI的进展呈增多趋势。结论本研究发现了11个内质网应激相关的AKI共表达基因,可能通过IL-17信号通路影响细胞的增殖、内质网功能、及组装蛋白的分泌进程,参与调节内质网应激,进而影响AKI的进展。内质网应激相关差异基因与炎症反应、细胞凋亡和细胞周期调控等功能具有一定的相关性,且可能对AKI具有较好的诊断价值,其中4个基因在动物实验中得到了关键性验证,为后续探索内质网应激影响AKI的机制研究提供新的靶点和思路。

人工肾研究:文献计量学分析

目的:对人工肾研究进行文献计量学分析,以探讨该领域研究的现状和趋势。方法:以科技引文数据库(web of science core collection;WoSCC)2000年至2022年的人工肾相关文献为样本,使用CiteSpace和VOSviewer软件对出版物的数量以及国家、机构、作者、期刊、关键词等进行统计分析。结果:经筛选和去重后,共获得人工肾研究相关文章382篇。美国是文献贡献最多的国家,荷兰特文特大学(University of Twente)是领先的学术机构,人工器官(Artificial Organs)是最活跃的期刊。Ronco C是发文量最多的作者,并在共引作者中也排名第一。可穿戴人工肾、血液透析、腹膜透析和生物人工肾是高频出现的关键词;吸附和去除是主要的突发关键词。结论:20年来人工肾研究相关领域的年出版物逐年增加,可穿戴人工肾和生物人工肾是持续热门的研究方向。人工肾的吸附和去除代谢产物功能近期关注度高,提示其可能是该领域的近期研究热点。

不同腹膜转运特性患者腹膜透析滤出液外泌体miR-503表达差异及生物信息学分析

目的比较腹膜透析滤出液(PDE)外泌体微RNA(microRNA,miR)-503在不同腹膜转运特性患者中的表达差异,并预测miR-503的靶基因及其可能的生物学作用,为其在腹膜转运特性方面的研究提供生物信息学数据。方法选取24例稳定维持性腹膜透析(PD)患者,根据腹膜平衡试验(PET)结果分为高转运(高/高平均转运组,n=12)和低转运(低/低平均转运组,n=12)两组。收集患者留腹过夜的PDE 500 ml,利用超滤杯进行浓缩后,超速离心法提取外泌体,重悬于磷酸盐缓冲液(PBS),通过透射电镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)、Western印迹和荧光染色鉴定外泌体的形态结构和功能。提取PDE外泌体miR,实时荧光定量PCR法检测两组PDE外泌体miR-503的表达水平,并分析miR-503的相对表达量与PET值和24 h超滤量的相关性。使用Targetscan和miRDB数据库预测miR-503的靶基因,运用富集分析工具DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析。结果PDE中提取到的外泌体透射电镜下呈杯状,直径100 nm左右,表达特异性表面标志CD63、CD81和热休克蛋白-70(HSP-70),可被间皮细胞内化吞噬。与低转运组相比,高转运组PDE外泌体miR-503的相对表达量较高(P=0.002),且PDE外泌体miR-503的相对表达量与PET值呈正相关(r=0.547,P=0.006),但与24 h超滤量无相关性(r=-0.297,P=0.159)。miR-503共有156个靶基因可通过2个不同数据库同时预测出,156个靶基因的GO分析显示主要富集在与蛋白激酶结合、调节蛋白修饰和代谢过程以及调控上皮细胞增殖方面。KEGG通路则富集了许多肿瘤相关和经典的信号传导通路,包括转化生长因子-β(TGF-β)通路和血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,同时血管内皮生长因子A(VEGFA)也是miR-503的直接靶基因,与许多纤维化机制中的蛋白相关。结论PDE外泌体miR-503在高转运组中明显升高,并与PET值呈正相关。生物信息学分析提示其可能通过靶向VEGFA调控腹膜血管新生。