急性子多糖脱蛋白方法研究

目的:筛选急性子多糖脱蛋白工艺。方法:以蛋白脱除率和多糖损失率为测定指标,考察了三氯乙酸(TCA)法、酶法和酶-TCA法3种方法的脱蛋白效果,并用Box-Behnken响应面法优化最佳工艺。结果:TCA法、酶法、酶-TCA法的蛋白脱除率分别为86.5%、80.4%、84.2%,多糖损失率分别为64.2%、32.4%2、6.2%。结论:酶-TCA法是急性子脱蛋白的最佳方法。

星点设计-响应面法优化急性子多糖提取工艺

目的利用响应面分析法对急性子多糖的提取工艺进行优化。方法以提取温度、提取时间、料液比为自变量,多糖得率为因变量,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用星点设计-响应面法选取最佳工艺,并进行预测分析。结果最优工艺条件为:料液比为1∶25.8,提取温度为92.0℃,浸提时间为120.5 min,浸提2次;提取实际值与预测值偏差为-2.9%。结论方法简便合理,稳定,可预测性较优。

Box-Behnken设计-效应面法优化水红花子中总黄酮和花旗松素的提取工艺

目的优化水红花子中总黄酮和花旗松素的提取工艺。方法采用Box-Behnken设计,以水红花子总黄酮、花旗松素提取率为指标,并对2种指标进行归一化处理,优化水红花子最佳提取工艺。结果最优工艺条件为:乙醇体积分数为66%,提取时间为93 min,乙醇量为20倍,提取1次;提取实际值与预测值偏差为2.44%、-2.11%。结论方法简便合理,稳定,可预测性较优。

《中药学》课堂教学多样化的探索与实践

随着我国中医药产业发展和中药研究不断深入,西医院校中的《中药学》教学应丰富多媒体教学,使教学内容形象化;注重分类解析,药性与功效内在联系性,并对不同功效的施用要点进行阐释,便于知识简单化。将功效与现代药理对应讲解并紧密结合药物的特点进一步深度阐释现代应用,加强教学深度;基于临床常用中成药,扩展相关中药应用,进一步充实、完善教学内容,增强应用性;通过翻转课堂,师生互动,加强学生能力培养等多样化教学模式,从而有助于推进《中药学》教学内容合理构建、适应中药发展的新形势,提高教学质量。

小檗碱对糖尿病大鼠认知功能改善及对Notch1和Hes1蛋白表达的影响

目的:研究小檗碱对糖尿病大鼠空间学习记忆障碍的改善作用以及糖尿病大鼠海马区神经元的凋亡影响。方法:制备STZ诱导的糖尿病大鼠模型,以60 mg/kg剂量的小檗碱治疗6周,检测其体重和空腹血糖水平,Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力;尼氏染色观察大鼠海马区病理改变; TUNEL染色检测大鼠海马神经元凋亡; Western Blot检测海马中Caspase3、Bcl-2、Notch1和Hes1蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,小檗碱降低糖尿病大鼠血糖[(27. 53±3. 69) v. s.(26. 81±3. 07) mmol/L,P> 0. 05],但无统计学差异;小檗碱改善糖尿病大鼠空间记忆障碍(P <0. 05);小檗碱干预后,大鼠海马区神经元细胞排列紧密,细胞形态清晰,正常形态细胞明显增多;小檗碱降低海马区神经元的凋亡水平(P <0. 05),小檗碱组鼠大脑海马组织中Notch信号通路相关蛋白Hes1水平相对于模型组组均明显降低(P <0. 05)。结论:小檗碱调节海马组织中Notch1和Hes1蛋白而改善糖尿病大鼠认知功能障碍。

HPLC测定不同商品急性子中槲皮素和山奈酚的含量

目的测定急性子药材中双指标成分槲皮素与山萘酚的含量,为急性子商品药材的质量控制提供方法。方法 HPLC法,Agilent C18(5μm,4·6×150mm);流动相以甲醇(A)-0·3%磷酸水(B)梯度洗脱。0～12min,从45%A线性变化至50%A。流速1mL/min,检测波长360nm,柱温为25℃。结果槲皮素、山奈酚分别在0·322～0·874μg,0·009～0·025μg范围内线性良好,r分别为0·9999,0·9996;平均回收率分别为99·6%,99·0%。结论实验方法简便、快速、准确,可为控制急性子药材的质量提供参考。

荭草花提取物体外抗肿瘤活性研究

目的:筛选荭草花中的抗肿瘤活性部位。方法:采用MTT法观察荭草花的各提取部位对人宫颈癌HeLa细胞、人肝癌SMMC-7721细胞株生长的影响。结果:荭草花的乙酸乙酯部位及正丁醇部位对人宫颈癌HeLa细胞的抑制率约分别为60%及40%;对人肝癌SMMC-7721细胞均约为60%,并具有明显的量效关系。结论:荭草花对人宫颈癌HeLa细胞及人肝癌SMMC-7721细胞的增值具有一定的抑制作用,是一类具有开发前景的抗肿瘤中药。

花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用

目的探讨从红蓼成熟果实中分离出来的花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人体肿瘤细胞的增殖抑制作用。方法用结晶紫染色法检测花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人胃癌MGC细胞、人肝癌HepG-2细胞和人盲肠癌Hce-8693细胞的增殖抑制作用。结果花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在1～500μg/mL质量浓度范围内对MGC细胞、HepG-2细胞和Hce-8693细胞均有一定的生长抑制作用,随着剂量的增大和作用时间的延长,呈较好的剂量-时间-效应关系;同等条件下,花旗松素比3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的抑制作用强。结论花旗松素与3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷均有体外抗肿瘤活性,能抑制MGC细胞、HepG-2细胞和Hce-8693细胞的增殖。

响应面法优化荭草花提取工艺研究

目的:利用响应面分析法优化荭草花的最佳提取工艺。方法:以荭草花中花旗松素的含量为指标,选取乙醇浓度、提取时间、液料比3个因素进行Box-Behnken中心组合设计,采用响应面法对荭草花的提取工艺参数进行优化。结果:荭草花的最佳提取工艺为:乙醇浓度为65%,提取时间为129 min,液料比为18,在该条件下平均提取量为2.79 mg/g。结论:采用响应面法优化提取工艺合理,方法简单,且具有较好的预测性。

荭草花HPLC特征指纹图谱研究

目的:建立荭草花HPLC特征指纹图谱,为该药材的品质评价提供参考。方法:以花旗松素为参照物,采用HPLC法,Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸(梯度洗脱);检测波长为280 nm;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃。结果:12个不同产地的荭草花药材指纹图谱标定出18个共有峰,其中指认出4个共有峰,分别为花旗松素、儿茶素、没食子酸、3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄糖苷。通过"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"软件计算,12个不同产地荭草花指纹图谱相似度均大于0.9。结论:本实验方法重现性好,指纹图谱专属性强,可为荭草花药材的鉴别及质量控制提供科学依据。

小檗碱对糖尿病大鼠肠系膜血管形态改变的作用

目的:观察小檗碱对糖尿病大鼠肠系膜血管病变的干预作用。方法:24只SD大鼠随机分为对照组、模型组和小檗碱组,每组8只。模型组和小檗碱组腹腔注射链脲佐菌素(STZ,55mg/kg)制备糖尿病大鼠模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。大鼠成模两周后,小檗碱组灌胃给予小檗碱(200mg/kg),对照组和模型组灌胃等量双蒸水,三组均每日一次,连续2周,比较各组体重及血糖变化。之后处死各组大鼠,取其肠系膜、各级血管及其周围组织制备石蜡切片,HE染色,显微镜观察各组大鼠肠系膜各级血管管径及血管和周围组织的病理学变化。结果:与对照组比较,模型组大鼠实验28天后体重减轻(P<0.01),血糖升高(P<0.01)。二、三级动静脉管径较对照组明显增大(P<0.05或P<0.01);血管弹性膜分层不清,内膜白细胞黏附增多;血管周围脂肪组织中脂肪细胞皱缩,大量炎性细胞浸润,神经节肿胀。小檗碱组较模型组体重、血糖无明显差异(P>0.05),但三级动脉管径和二级静脉管径较模型组明显收缩(P<0.05或P<0.01);而且小檗碱组较模型组血管弹性膜分层清晰,内膜白细胞黏附减少;脂肪细胞形态、炎性细胞浸润及神经节形态均有一定程度的改善。结论:小檗碱对糖尿病大鼠肠系膜小血管和微血管及周围组织的病理变化有一定改善作用。

1型糖尿病大鼠模型早期胃平滑肌功能的改变研究

目的探讨1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus)早期大鼠离体胃平滑肌收缩、舒张反应的改变。方法雄性SD大鼠,腹腔注射65 mg/kg链脲佐菌素(STZ)溶液诱导1型糖尿病大鼠模型。采用离体器官肌张力分析方法,以电场刺激及激动剂诱发胃各部位平滑肌收缩、舒张反应,观察糖尿病早期大鼠离体胃平滑肌功能的改变。结果 (1)电场刺激诱发1型糖尿病大鼠胃底平滑肌收缩反应小于正常大鼠(P<0.05),且收缩幅度紊乱,参差不齐;(2)正常大鼠及1型糖尿病大鼠胃体平滑肌收缩反应、胃窦自发收缩活动均无明显改变;(3)与正常大鼠相比,电场刺激诱发1型糖尿病大鼠胃底平滑肌舒张反应明显增加,而幽门环形肌收缩反应明显增加(P<0.01)。结论 STZ造模4周的1型糖尿病大鼠胃平滑肌收缩舒张功能的变化中,胃各部位敏感性不同;胃底平滑肌收缩反应明显减小且紊乱,舒张反应明显增强;幽门环形肌舒张反应明显减小。提示在1型糖尿病早期大鼠胃平滑肌功能改变中,胃底和幽门可能最先发生病变,且主要源自神经调节的改变。

小檗碱对H_2O_2损伤大鼠神经干细胞增殖的影响

目的探讨小檗碱(berberine,BBR)对H_2O_2诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖作用的影响。方法采用悬浮培养法分离纯化新生SD大鼠大脑NSCs。实验分为正常对照组、H_2O_2组、小檗碱组、DAPT(Notch信号通路阻断剂)组。采用Nestin免疫化学染色鉴定NSCs,通过CCK8检测NSCs细胞活力,测量NSCs平均直径反映NSCs增殖能力,Ki67/Nestin双标法检测NSCs增殖情况,Western blot检测Ki67、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 Nestin鉴定为阳性,与正常对照组相比,H_2O_2组细胞存活率降低、细胞平均直径降低,Ki67阳性率降低(P<0.05);与H_2O_2组相比,小檗碱组(5μmol/L)明显增强细胞活力,提高NSCs的平均直径,上调Ki67、Notch1、Hes1蛋白表达水平(P<0.05),小檗碱促进损伤NSCs增殖作用可以被DAPT拮抗。结论小檗碱处理提高H_2O_2损伤NSCs的存活率,可能通过Notch信号通路发挥促增殖作用。

基于“以学生为中心”的《生药学》新媒体教学资源平台建设研究与实践

《生药学》课程是我校国家级特色专业———药学专业的核心专业课程之一。在“以学生为中心”的教学理念指导下,开发建设《生药学》新媒体教学资源平台,通过“基源”、“本草考证”、“现代研究”、“国家和地方标准”等不同板块,利用各种信息工具构建课程资源。利用微信公众号互动功能,实现“不依赖课堂”的随时学、随地学、选择学、兴趣学,做到专业课堂向生活延伸,拓展学生获取信息的渠道,提升学生学习的兴趣,将学生被动学习改变为主动摄取,以实现预期的教学目标和效果。通过该项目的组织与开展实施,形成由教师和学生共同参与、面向药学专业大学生《生药学》理论教学、实验教学以及知识拓展学习的信息平台,为丰富现代化教学手段提供可靠的探索。

基于生物信息学和分子对接分析栀子柏皮汤治疗炎症性肠病的作用机制

目的 基于生物信息学和分子对接,探讨栀子柏皮汤治疗炎症性肠病(Inflammatory bowel disease, IBD)的主要活性成分及作用机制。方法 通过中药系统药理学分析平台(Traditional Chinese Medicine Database and Analysis Platform, TCMSP)和本草组鉴(HERB)数据库筛选“栀子”“甘草”“黄柏”三味药材的有效成分和作用靶点,构建“中药-成分-靶点”网络图。通过基因表达数据库(GEO)和DisGeNET数据库筛选炎症性肠病的相关基因,并用R软件进行数据分析和可视化。通过String平台构建药物和疾病交集靶点的蛋白互作网络(PPI),并利用Cytoscape的MCODE插件筛选核心靶点。使用DAVID平台对核心靶点进行GO和KEGG富集分析。使用AutoDock将核心靶点与活性成分进行分子对接。结果 栀子柏皮汤与炎症性肠病共同作用的目标靶点有13个,GO富集分析得到相关条目49个,KEGG通路富集得到35条信号通路。结论 初步探究了栀子柏皮汤治疗炎症性肠病的潜在靶点和相关通路,栀子柏皮汤中的槲皮素、小檗碱等活性成分,可能通过作用于STAT3、IL-1β和TNF等靶点,调控以TNF、Jak-STAT及NF-κB为代表的信号通路治疗炎症性肠病。

1型糖尿病早期大鼠空肠的神经功能及组织形态学变化

目的探讨1型糖尿病早期大鼠空肠平滑肌的氮能神经和胆碱能神经功能,以及空肠组织形态学变化。方法将雄性S D大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)60 mg/kg建立糖尿病大鼠模型。4周后运用电场刺激诱发神经源性收缩反应,并采用离体器官肌张力分析方法观察离体空肠平滑肌的收缩反应,以及氮能神经和胆碱能神经功能的改变;石蜡组织切片行H E染色及免疫组织化学检测,观察空肠组织形态学变化。结果与正常大鼠相比,STZ诱导的糖尿病早期大鼠的空肠肌间胆碱能神经功能受损,而氮能神经功能未见明显变化;糖尿病大鼠空肠组织绒毛杂乱无序且断裂,肌层增厚,杯状细胞减少,绒毛长度与肠隐窝深度之比(绒腺比)减小。结论在STZ诱导后4周的1型糖尿病早期大鼠模型中,空肠组织的神经功能和形态学均发生了明显变化,提示肠道作为糖尿病敏感器官,在糖尿病早期诊断及预防中具有重要的临床参考意义。

天然药物化学史话:海洋毒素

海洋的特殊生存环境造就了海洋中奇特及庞大的生物种类,其中某些海洋生物会产生结构新颖、生物活性独特且对其他生物产生异常敏锐刺激甚至灭绝作用的次生代谢产物即海洋毒素。从化学角度分析,海洋毒素主要是复杂结构的聚醚类化合物。海洋毒素虽然给人类带来了一定的危险,但是也引起科学家特别的关注,这些海洋毒素不仅可以作为药物的先导化合物,而且可以直接作为生命科学的研究工具。对目前分离得到的一些重要的海洋毒素按照化学结构分类进行了简要总结,为其进一步研发提供一定的参考。

不同产地急性子中人体必需微量元素含量测定与分析

目的:分析不同产地急性子中9种人体必需微量元素的含量,评价药材质量。方法:采用ICP-MS法测定急性子微量元素含量,使用SPSS软件分析急性子中微量元素之间的相关性,并通过主成分分析对药材进行质量评价。结果:Fe,Zn,Mn,Cu等对人体有益元素含量丰富。微量元素含量间具有显著相关性。主成分分析确定综合评价函数,其函数为F=0.209x1+0.256x2+1.194x3+0.236x4+0.267x5+0.044x6+0.196x7-0.084x8+0.263x9。结论:9种人体必需微量元素对急性子的药效起主要或辅助的作用,不同产地间含量差异较大,可为不同产地急性子药材质量评价提供科学依据。

HPLC-DAD同时测定柘树和构棘根与茎中4种黄酮类成分的含量

目的:分析比较柘树与构棘根及茎中花旗松素、柑桔素、槲皮素、山柰酚的含量,为品种鉴定与质量评价提供科学参考。方法:采用高效液相二极管阵列检测法(HPLC-DAD),色谱柱为Agilent C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.1%磷酸溶液梯度洗脱(0～15 min,35%～50%A;15～30 min,50%～65%A),检测波长290 nm(花旗松素、柑桔素)和365 nm(槲皮素、山柰酚),柱温30℃。结果:花旗松素、槲皮素的含量柘树根明显高于构棘根,柘树茎明显高于构棘茎,种间含量差异大;柑桔素、山柰酚的含量构棘根高于柘树根,柘树茎与构棘茎含量相当,种间含量差异小,同种药用部位间含量差异大。结论:4种成分的含量在柘树和构棘及其药用部位根和茎都存在一定的差异,在临床上不可混淆使用。

不同贮存期水红花子中花旗松素的含量比较

目的：探讨水红花子中指标性成分花旗松素的含量与贮存时间的相关性。方法：采用HPLC，色谱柱Diamonsil C18（4．6mm×200mm，5μm），流动相为乙腈-0．1％磷酸水（梯度洗脱），检测波长为290nm，流速为1．0mL·min^-1，柱温为30℃。结果：花旗松素的进样量在0．07～0．35μg线性良好，回收率99．7％，RSD0．2％。药材贮存10年花旗松素的平均质量分数为0．84mg·g^-1，7年为1．36mg·g^-1，6年为1．75mg·g^-1，5年为1．99mg·g^-1，1年为2．16mg·g^-1。结论：水红花子中花旗松素的含量随着贮存时间的延长而降低，当贮存期超过6年时，其含量低于2010年版《中国药典》的要求。该实验方法精密度，重复性，准确性良好，可为水红花子的临床用药及质量评价提供科学参考。