SaRNA:克服重组蛋白药物基因工程中转基因沉默的潜在工具

为了研究saRNA(small activating RNA)在重组蛋白药物持续表达中克服转基因沉默效应的潜力,利用两个成熟应用的克服转基因沉默效应的染色质调节元件UCOE(universal chromatin opening element)或MAR(matrix attachment region)作为参照系,与反式作用的saRNA共同靶OCT4基因启动子,利用4C(circular chromosome conformation capture)技术结合基因表达分析方法表征UCOE或MAR与saRNA靶向在三维染色质层面的相互作用,探讨UCOE或MAR在克服转基因沉默效应中的染色质调控机制与saRNA调节启动子染色质的机制的内在关联。结果表明,UCOE或MAR都能与saRNA通过内在关联的机制使共同靶向的OCT4启动子产生独特的染色质相互作用,其中UCOE与saRNA的相互作用使靶向的OCT4启动子上染色质相互作用片段大幅降低,同时OCT4启动子介导的表达效率显著下降;MAR与saRNA的相互作用使靶向的OCT4启动子上染色质相互作用片段大幅增加,同时相应的OCT4启动子介导的表达效率显著增加。UCOE或MAR对saRNA靶向的OCT4启动子的染色质相互作用片段的影响,与体现UCOE或MAR属性的CG或AT含量无关联,显示UCOE或MAR与saRNA的相互作用可能源于染色质调控的内在机制。结论:UCOE或MAR与saRNA共同作用于同一启动子时,存在染色质三维结构方面的相互干涉并影响下游基因表达,提示saRNA靶向表达载体中启动子可能具有克服转基因沉默的相同机制。