脂肪干细胞体外分离培养鉴定及免疫学性质

背景:脂肪干细胞由于具备易于获取等特点,在组织工程中比骨髓间充质干细胞具有更加广阔的应用前景,并因此成为当今的研究热点之一。目的:观察脂肪干细胞的生长规律,鉴定其干细胞特性和免疫学性质。方法:自整形外科行抽脂的3名健康志愿者身上获取皮下脂肪组织及外周血,志愿者年龄20-30岁,均为女性。用Ⅰ型胶原酶消化脂肪组织获得脂肪干细胞,在体外原代培养及传代培养,观察其体外增殖能力等生物学特性;通过流式细胞术检测人脂肪干细胞分化群表面抗原和主要组织相容性抗原的表达。并将异体脂肪干细胞和淋巴细胞共培养,观察脂肪干细胞是否可以刺激后者增殖。结果与结论:所获脂肪干细胞具有很强的体外增殖能力,其生长曲线呈"S"形;第3代脂肪干细胞表面CD29、CD44、CD90以及主要组织相容性抗原Ⅰ呈阳性表达,CD31、CD45、CD34及主要组织相容性抗原Ⅱ呈阴性表达;未发现异体脂肪干细胞刺激淋巴细胞增殖。提示所获细胞确为脂肪干细胞,且具有较弱的排斥反应,有可能成为细胞治疗或组织工程的同种异体细胞来源。

高转移性结肠癌细胞株HT29的基因筛选

目的在结肠癌HT29细胞株基础上获得高转移结肠癌细胞株,并建立高侵袭性结肠癌肝转移的动物模型。方法将结肠癌HT29细胞株通过体内连续传代方法获得高转移结肠癌细胞株,并成功建立高侵袭性结肠癌肝转移的动物模型,采用cDNA-microarray技术比较结肠癌细胞株及高转移细胞株形成的肝转移组织,获得与结肠癌肝转移相关的差异基因。采用荧光定量PCR方法检测亲代细胞和高转移细胞的基因表达。结果建立高侵袭性结肠癌肝转移的动物模型。定量PCR检测显示结肠癌高转移性HT29的酪氨酸激酶受体家族、基质金属蛋白酶家族和细胞周期调控蛋白的基因较亲代HT29细胞均有不同程度的变化。结论结肠癌HT29细胞株及其高侵袭性结肠癌肝转移的动物模型为结肠癌转移的生物学研究提供了一个良好的技术平台。

γ型干扰素增强脂肪干细胞介导的免疫抑制

背景:脂肪干细胞可以向成骨细胞和软骨细胞、平滑肌细胞、心肌细胞和神经细胞等分化。脂肪源性干细胞与间充质干细胞不但具有非常近似的生物学性质,而且在细胞表面标志谱的表达方面也十分接近。目的:探索脂肪源性干细胞表面白细胞抗原Ⅱ类分子的表达以及其免疫原性和免疫调节作用,并探讨其具体机制是通过什么途径诱导的。方法:分离培养脂肪源性干细胞,并用γ型干扰素刺激,然后用流式细胞术检测其表面免疫分子白细胞抗原Ⅱ的表达,实时荧光定量PCR和Western bolt分别检测吲哚胺-2,3-双加氧酶基因和蛋白的表达。脂肪源性干细胞单向刺激淋巴细胞,观察细胞增殖情况。淋巴细胞用植物血凝素刺激后,加入1×102-1×105脂肪源性干细胞,观察淋巴细胞增殖情况;同时,1×102-1×105脂肪源性干细胞作为"第三者"细胞加入混合双向淋巴细胞反应体系中,同样观察淋巴细胞增殖情况。结果与结论:脂肪干细胞低表达白细胞抗原Ⅱ和吲哚胺-2,3-双加氧酶,但在γ型干扰素刺激后,白细胞抗原Ⅱ和吲哚胺-2,3-双加氧酶表达均明显上调。脂肪源性干细胞不能刺激淋巴细胞增殖,但能抑制植物血凝素或异体淋巴细胞导致的淋巴细胞增殖,且脂肪源性干细胞与混合淋巴细胞共培养的上清中检测到大量γ型干扰素的表达。提示脂肪干细胞具有低免疫原性,同时可在体外抑制淋巴细胞增殖反应,添加外源性γ型干扰素有助于脂肪源性干细胞发挥免疫抑制作用。