Hedgehog信号通路基因Shh、Ptch1、Smo及Gli1在胰腺癌中的表达及意义

目的:检测Hedgehog信号通路基因Sonic Hedgehog(Shh)、Patched1(Ptch1)、Smoothened(Smo)及神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(glioma-associated oncogene homolog 1,Gli1)在胰腺癌组织中的表达及其生物学意义.方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测48例胰腺癌组织和配对的癌旁组织中Shh、Ptch1、Smo及Gli1 mRNA的表达情况.结果:RT-PCR检测结果显示:Shh、Ptch1、Smo及Gli1 mRNA在胰腺癌组织中的相对表达量分别是0.652±0.036、0.604±0.063、0.493±0.011、0.512±0.052,在胰腺癌旁组织中为0.312±0.013、0.319±0.053、0.214±0.046、0.247±0.059(P<0.05).与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中Shh、Ptch1、Smo及Gli1 mRNA表达量显著升高(P<0.05),胰腺癌组织中Shh、Ptch1、Smo及G l i1mRNA表达与胰腺癌的分化程度有显著性差异(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、糖链抗原(CA19-9)无显著性差异(P>0.05).结论:Hedgehog信号通路基因Shh、Ptch1、S m o及G l i1在胰腺癌组织中表达增高,Hedgehog信号通路的异常激活可能与胰腺癌发生发展过程相关.

胸段食管鳞癌淋巴结转移影响因素的探讨

目的分析胸段食管鳞癌淋巴结转移与临床病理特征的相关性,了解胸段食管鳞癌淋巴结转移的特点。方法 2006年1月~2007年7月在新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科收治的215例胸段食管鳞癌患者的手术及临床病理资料,应用Logistic回归方法回顾性分析胸段食管鳞癌淋巴结转移规律及影响因素。结果全组淋巴结总转移率为53.5%（115/215）,通过单因素Logistic回归分析：肿瘤部位,肿瘤浸润深度,分化程度与淋巴结转移有关（P〈0.05）。性别、族别、体重变化、肿瘤长度、大体病理类型、淋巴管浸润等因素与淋巴结转移无相关性（P〉0.05）。通过逐步Logistic回归分析进一步了解上述三个因素与淋巴结转移相关性。结论本研究结果显示：（1）影响淋巴结转移的临床病理因素为肿瘤浸润深度、分化程度、肿瘤位置;（2）胸段食管鳞癌可向颈部、胸部、腹部淋巴引流区域转移,最常见淋巴结转移区域是纵隔,其次为腹部及颈部。

原发性肝癌患者手术后发生感染的相关因素研究

目的探讨原发性肝癌患者手术后发生感染的相关因素。方法选取新疆医科大学附属肿瘤医院2012年2月至2015年1月收治的108例行肝切除术的原发性肝癌患者,根据术后是否发生感染分为感染组和非感染组。分析可疑危险因素与肝切除术后发生感染的关系。结果 108例患者中,20例发生术后感染,占18.52%。感染组和非感染组在糖尿病史、病灶、血管癌栓、手术时间、术中出血量、术中输血量、引流管放置时间、术前使用抗菌药物、营养不良和血清清蛋白方面比较差异有统计学意义(P<0.05),Logistic回归分析显示,合并有糖尿病、病灶多发、血管癌栓、手术时间、引流管放置时间、术前使用抗菌药物、营养不良和血清清蛋白为原发性肝癌患者手术后发生感染的独立影响因素(P<0.05)。结论合并有糖尿病、病灶多发、血管癌栓、手术时间、引流管放置时间和血清清蛋白为原发性肝癌患者手术后发生感染的独立危险因素。

54例复杂性肝癌手术治疗的临床分析

目的：探讨复杂性肝癌手术切除的安全性及预后因素。方法：回顾性分析2010年1月-2013年6月行手术切除的54例复杂性肝癌临床病理资料及手术方式。Kaplan-Meier法计算生存率,Log-rank法进行各组间的生存比较,Cox回归模型进行多因素分析。结果：手术均顺利切除,右半肝切除23例,左半肝切除21例,肝中叶切除10例,其中合并尾叶切除9例。第一肝门平均阻断（4.5±0.9）次[（31±9）min],术中出血量（703±201）mL。术后第5天ALT平均（93.9±32.2）IU/L,术后AFP降低率70.6%。术后并发症包括胆瘘3例,胸腔积液7例,膈下积液2例,腹腔感染2例,并发症发生率25.9%,经积极处理后均治愈。单因素分析提示：肝硬化程度、肿瘤有无包膜、有无癌栓、第一肝门阻断时间、出血量及术时等8项指标与预后有关;多因素分析得出五个独立预后因素为肝硬化程度、肿瘤有无包膜、门静脉或肝静脉有无瘤栓及术时。结论：积极的手术切除是治疗复杂性肝癌的主要措施。术前良好的评估、术中避免损伤肝门、术中合理血流控制、术后积极防治并发症是复杂性肝癌手术切除的安全保障。术后能否长期生存取决于肝硬化的程度、肿瘤有无包膜、门静脉或肝静脉有无瘤栓及术时。

胰腺癌中Ptch1、融合阻抑蛋白基因的表达及临床意义

目的探讨Patched1(Ptch1)、融合阻抑蛋白Su(Fu)基因在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌发生、发展的关系。方法采用RT-PCR、Western blot法检测56例胰腺癌组织中Ptch1、Su(Fu)基因和蛋白的表达情况,并分析其与胰腺癌临床病理参数之间的关系。结果 RT-PCR检测结果显示,Ptch1、Su(Fu)m RNA在胰腺癌中相对表达量分别为0.413±0.045、0.376±0.053,在癌旁组织中分别为0.203±0.013、0.214±0.062(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,Ptch1、Su(Fu)蛋白在胰腺癌中的相对表达量分别为0.724±0.021、0.625±0.075,在胰腺癌旁组织中分别为0.516±0.098、0.413±0.051。胰腺癌组织中Ptch1、Su(Fu)m RNA与蛋白表达均高于癌旁组织。胰腺癌组织中Ptch1、Su(Fu)m RNA与蛋白表达与胰腺癌的分化程度和TNM分期明显相关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤直径、侵犯血管和神经无明显相关(P>0.05)。结论胰腺癌组织中Ptch1、Su(Fu)蛋白呈高表达,Ptch1、Su(Fu)蛋白的高表达可能与胰腺癌的发生及发展有关。

Hedgehog信号通路相关分子在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达

目的对于Hedgehog信号通路相关分子在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达进行讨论和分析。方法选择我院肝胆胰外科2011年1月—2013年12月手术切除的经病理诊断明确为胰腺导管细胞癌的患者作为研究对象,采用实时定量PCR以及Western blot方法检测胰腺癌组织及癌旁组织中Hh信号通路相关分子的表达。结果 Hh信号通路在胚胎发育、成熟组织的稳态维持中有重要意义,其异常激活与胰腺癌的发生发展密切相关。结论在胰腺癌的发生发展过程中Hedgehog信号通路相关分子起着重要作用。

Notch信号通路在胰腺癌中的表达及其作用研究

目的研究Notch信号通路成员在胰腺癌组织中的异常表达及其在胰腺癌发生发展中的重要作用。方法应用Affymetrix基因表达谱芯片筛选10例胰腺癌组织及其癌旁组织中Notch信号通路存在差异表达的成员,并应用实时定量PCR和Western blot印迹法加以验证;利用携锯齿2(Jagged 2,JAG2)基因siRNA片段的慢病毒表达载体转染胰腺癌原代细胞构建JAG2基因阻遏表达胰腺癌细胞株,并采用MTT法、流式细胞术、侵袭小室实验法观察与分析该细胞株增殖、细胞周期及侵袭转移能力的变化。结果 Affymetrix基因表达谱芯片共检测到差异表达基因512个,其中表达上调的基因419个,表达下调的基因93个; Notch信号通路中存在差异表达的为JAG2(上调表达8. 20倍)、NOTCH1(上调表达3. 74倍)、HES1(上调表达3. 27倍)、NOTCH2(上调表达3. 16倍); PCR和Western blot法验证结果与基因芯片结果相符;与对照组相比,JAG2基因阻遏表达胰腺癌细胞株的生长明显受到抑制;经流式细胞仪分析两组细胞周期示JAG2基因阻遏表达胰腺癌细胞株的凋亡与S期阻滞明显增强;侵袭小室侵实验结果示JAG2基因阻遏表达胰腺癌细胞株袭转移能力明显减弱(P <0. 05)。结论 Notch信号通路部分成员在胰腺癌组织中存在显著差异表达,且阻遏该成员表达可影响胰腺癌细胞生长、细胞周期及侵袭转移。

SMO基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其对胰腺癌细胞SMO基因表达的影响

目的：Hegdehog信号通路在胰腺癌发生发展过程中发挥着重要的作用,针对其调控机制的研究将对胰腺癌发病机制的阐明奠定良好的理论基础.构建携带SMO靶向si RNA慢病毒表达载体,并证实其对胰腺癌细胞中SMO基因表达的抑制作用.方法：设计并合成3条SMO基因靶向si RNA片段,利用基因重组技术构建携带此3条片段的慢病毒表达载体并测定其滴度,构建好的慢病毒表达载体转染人胰腺癌细胞株SW1990后,采用RT-PCR法检测SMO基因的表达以筛选出效果最佳的干扰表达载体,并以此载体转染SW1990细胞后采用Western blot法检测SMO蛋白表达.结果：基因测序与酶切电泳结果提示成功合成SMO靶向siRNA片段且其正确插入慢病毒表达载体,无碱基缺失错排与突变,测定病毒滴度分别为5.31×10~8TU/m L,1.49×10~9TU/m L及8.50×10~8TU/m L,经转染SW1990细胞后,测定对SMO基因表达的抑制率分别为86.00%、74.85%及19.22%,效果最优的干扰表达载体转染SW1990细胞后对SMO蛋白表达的抑制率〉80%.结论：成功构建携带SMO基因靶向si RNA的慢病毒表达载体,且该载体可有效抑制胰腺癌细胞中SMO基因的表达,为进一步的研究提供了良好的实验工具.

胰十二指肠切除术后胰瘘相关因素的Meta分析

目的探讨胰十二指肠切除术后发生胰瘘的危险因素。方法采用根据PRISMA声明制定的Meta分析法,检索2009年1月—2013年12月公开发表的关于胰十二指肠切除术后发生胰瘘相关因素的文献,应用RevMan 5.2软件进行数据的提取和分析。结果共有14篇文献纳入研究。胰十二指肠切除术中胰胃吻合与胰肠吻合术后胰瘘发生率相当（P〉0.05）;有无糖尿病与胰瘘的发生无明显相关性（P〉0.05）。体质量指数（BMI）≥25kg/m2病人术后胰瘘发生率明显增高（OR=3.52,95%CI=2.31~5.36,P〈0.05）;主胰管直径≥3 mm病人胰瘘发生率明显小于直径〈3mm病人（OR=0.24,95%CI=0.17~0.35,P〈0.05）;胰腺质软病人的胰瘘发生率明显高于质硬病人（OR=6.03,95%CI=3.72~9.77,P〈0.05）;术后病理诊断为胰腺癌病人的胰瘘发生率明显低于非胰腺癌病人（OR=0.32,95%CI=0.24~0.44,P〈0.05）。结论 BMI、胰管直径、胰腺质地、是否胰腺癌为胰十二指肠切除术后发生胰瘘的危险因素。

胰十二指肠切除术后胰瘘发生的危险因素分析

目的:探讨胰十二指肠切除术(PD)后导致胰瘘(PF)发生的危险因素,为临床上PD后PF的防治提供参考。方法:回顾2010年1月—2014年03月期间新疆医科大学附属肿瘤医院收治的122例行PD术患者的临床资料,针对可能与PF相关的14个危险因素进行单因素及多因素Logistic回归分析。结果:全组PF发生率为13.9%(17/122)。单因素分析结果显示,上腹部手术史(P=0.024),术前胆红素(P=0.003)、术中出血量(P=0.023)、术后血红蛋白(P=0.021)、胰腺质地(P=0.046)、胰管直径(P=0.007)为PD后发生PF有意义的因素。多因素分析结果表明,上腹部手术史、胰管直径<3 mm、术后血红蛋白<90 g/L是PD术后发生PF的独立危险因素(OR=4.308、5.052、3.958,均P<0.05)。结论:对于上腹部手术史、胰管直径<3 mm、术后血红蛋白<90 g/L的PD患者,应采取相应的措施,减少术后PF的发生。

Affymetrix基因表达谱芯片技术筛选胰腺癌异常表达基因的研究

目的:利用基因表达谱芯片筛选出胰腺癌组织与癌旁正常组织的差异表达基因。方法:收集新疆医科大学第三附属医院2014年1月—2016年6月间手术切除的10例胰腺导管细胞癌组织及其相应癌旁正常组织,用TRIzol法提取总RNA后采用含49395个基因探针的Affymetrix基因表达谱芯片筛选出差异表达基因,并行GO分析和pathway分析,对部分差异表达基因行实时定量PCR法验证表达情况。结果:样本总RNA检测合格,基因芯片质量评估良好,检测结果可靠且可重复性高。经芯片降噪处理后共检测38079个基因,其中存在差异表达的基因共512个,表达上调的基因419个,表达下调的基因93个;共287个差异表达基因编码与3个GO分类(生物学过程、分子功能、细胞组分)相关的蛋白;共29条信号通路存在明显基因差异表达,涉及126个基因。经PCR验证,差异表达基因CPB1、CELA3B、CPA1、POSTN、PLA2G1B、CTRC及SPINK1的表达情况与基因芯片检测结果吻合。结论:胰腺导管细胞癌组织与癌旁正常组织间存在大量差异表达的基因,这些基因主要与生物学过程、分子功能及细胞组分相关,且参与了多个细胞信号通路的调控。

Notch受体在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨胰腺癌及癌旁组织中Notch1～4蛋白和mRNA表达及临床意义。方法:应用免疫组化方法检测40例胰腺癌组织及对应的癌旁组织石蜡标本中Notch1～4蛋白的表达情况;分析Notch1～4受体表达水平与胰腺癌临床病理特征关系;应用实时逆转录聚合酶链反应(Real-time RT PCR)检测冰冻胰腺癌组织及对应的癌旁组织手术标本中Notch1～4的mRNA表达情况。结果:免疫组化结果显示:Notch1、Notch2在胰腺癌组织中蛋白表达明显比胰腺癌旁组织低(P<0.05);Notch3在胰腺癌组织中蛋白表达比胰腺癌旁组织高,但是差异无统计学意义(P>0.05);Notch4在胰腺癌组织中蛋白表达比胰腺癌旁组织高(P<0.05)。Notch1～4受体的表达与肿瘤分化程度和临床分期呈负相关(P<0.05)。Real-time RT PCR结果显示:与胰腺癌旁组织相比,癌组织中Notch1,Notch2的mRNA相对表达水平显著下调;胰腺癌癌组织中Notch3,Notch4的mRNA相对表达水平显著上调。结论:Notch家族的Notch1～4受体在胰腺癌组织及其旁组织的蛋白和mRNA表达不同,Notch蛋白表达可以作为胰腺癌的风险预测因子。

Cx43与Smo基因在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究细胞间隙连接蛋白43（Cx43）与信号通路基因Smoothened（Smo）在胰腺癌中的表达及其临床意义。方法：选择从2013年1月-2015年12月在医院接受手术治疗的胰腺癌患者53例切除组织及与癌组织相配对的3cm外癌旁组织，对比不同胰腺组织中Cx43与Smo阳性表达率，及Cx43 mRNA与Smo mRNA表达水平，分析胰腺癌组织中Cx43和Smo表达与胰腺癌的病理特征之间的关系及两者的相关性。结果：胰腺癌组织中Cx43的阳性表达率及Cx43 mRNA表达水平明显低于在癌旁组织，而Smo的阳性表达率及Smo mRNA表达水平明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。胰腺癌患者组织学分级为Ⅲ级、有淋巴结转移者的Cx43mRNA表达水平分别明显低于Ⅰ～Ⅱ级、无淋巴结转移者，Smo mRNA表达水平则明显高于I～II级、无淋巴结转移者，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。Pearson相关性分析结果发现，胰腺癌组织中Cx43 mRNA和Smo mRNA表达呈负相关关系（r=-0．846，P=0．000）。结论：Cx43 mRNA在胰腺癌中的表达下降，而Smo mRNA则表达上调，临床监测Cx43及Smo基因的表达情况，有助于评价患者的病情与预后。

携Jagged 2基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其转染对胰腺癌细胞影响

目的:构建携带Jagged 2(JAG2)基因siRNA的慢病毒表达载体,并观察其转染人胰腺癌细胞生物学特性的影响。方法:采用基因重组技术构建若干携JAG2基因siRNA片段的慢病毒表达载体,将其转染经酶解法从胰腺癌组织标本中原代分离的胰腺癌细胞;选择对JAG2基因抑制效率最高的siRNA片段,通过MTT法、流式细胞术、Transwell小室实验观察其转染对原代胰腺癌细胞生长、凋亡、细胞周期及侵袭转移能力的影响。结果:所构建的携JAG2基因siRNA片段的慢病毒表达载体均能不同程度降低原代胰腺癌细胞JAG2 mRNA与蛋白的表达。JAG2 siRNA转染后,胰腺癌细胞的增殖明显降低、凋亡与S期阻滞明显增强、侵袭转移能力明显减弱(均P<0.05)。结论:成功构建携JAG2基因siRNA慢病毒表达载体,其转染能有效削弱人胰腺癌细胞的恶性生物学特征。