ABO新生儿溶血病患儿血浆中血管细胞粘附分子-1的 表达差异与意义

目的检测ABO新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn,HDN)患儿的血浆血管细胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)水平,预测ABO-HDN患儿内皮受损程度及体内溶血情况。方法回顾性收集了2022年6月—2023年6月就诊于我院的127例ABO-HDN患儿一般资料及外周血标本,分为轻度、中度和重度高胆红素血症组3个亚组;设127例母婴血型匹配的健康新生儿作为健康对照组及非溶血性黄疸对照组41例。通过溶血三项试验明确ABO-HDN诊断,检测所有样本血型以及不规则抗体,酶联免疫吸附法检测血浆中VCAM-1浓度,并获取其一般临床信息和实验室检查结果。结果单因素分析对比分析ABO-HDN组与健康对照组新生儿的性别、出生体重、血型、其母亲的分娩方式、有无胎膜早破,差异无统计学意义(P>0.05)。新生儿胎龄、母亲年龄及妊娠次数存在差异(P<0.05);比较三实验组的血红蛋白(hemoglobin,Hb)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、间接胆红素(indirect bilirubin,IBIL)、网织红细胞(reticulocyte,Ret)、超敏C-反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)及VCAM-1水平存在差异(P<0.05),且VCAM-1水平与LDH、IBIL、Ret水平呈正相关,而与Hb水平呈负相关(P<0.05)。ABO-HBN组VCAM-1水平与Hb、Ret、IBIL、LDH水平呈现独立相关性(P<0.05);三个亚组中重度高胆红素血症组VCAM-1水平明显高于轻度和中度高胆红素血症组(P<0.05)。结论ABO-HDN患儿VCAM-1升高可能与血管内皮受损相关,并有助于评估疾病的溶血严重程度。

子痫前期孕妇实验室指标水平及其对妊娠结局的影响

目的探讨子痫前期孕妇实验室指标水平及其对妊娠结局的影响。方法选择2014年1月至2018年12月扬州市妇幼保健院468例子痫前期孕妇为研究对象(观察组),根据子痫前期诊断标准,分为慢性高血压合并子痫前期组88例、重度子痫前期(包含HELLP综合征)组380例;同期选取正常分娩孕妇375例为对照组,比较3组孕妇血清25-羟维生素D[25(OH)D]、生化和凝血功能指标水平,以及子痫前期两组间不良妊娠结局的发生率;用logistic回归分析上述实验室指标对子痫前期发生的预测价值,运用受试者工作曲线(ROC)分析实验室指标对子痫前期的诊断价值。结果重度子痫前期组的尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、三酰甘油(TG)、D-二聚体(D-D)和镁离子(Mg 2+)水平高于慢性高血压合并子痫前期组和对照组,25(OH)D、钙离子(Ca 2+)水平低于慢性高血压合并子痫前期组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。子痫前期两组患者间早产、胎儿生长受限和胎儿窘迫发生率差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归表明,25(OH)D、TG、Mg 2、BUN水平对子痫前期具有较好的预测价值,ROC曲线发现TG诊断子痫前期的曲线下面积(AUC)最大。结论定期监测孕妇25(OH)D、生化和凝血功能指标,对预测子痫前期和减少不良妊娠结局有重要意义。

不同卵巢储备功能患者AMH、性激素水平变化及诊断价值研究

目的研究不同卵巢储备功能患者抗苗勒管激素(AMH)、性激素[卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、催乳素(PRL)]的水平变化及诊断价值。方法选取2017—2018年在该院就诊的256例患者为研究对象,其中多囊卵巢综合征(PCOS)患者94例为PCOS组,卵巢早衰(POF)患者59例为POF组,卵巢储备功能下降(DOR)患者103例为DOR组,另选取卵巢储备功能正常者180例为对照组。分析各组AMH与性激素水平的差异;采用Pearson相关分析研究AMH水平与性激素水平的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析AMH对PCOS、POF、DOR的诊断价值。结果PCOS组AMH、T和PRL水平均明显高于POF组、DOR组和对照组(P<0.05);POF组FSH、LH水平均明显高于PCOS组、DOR组和对照组(P<0.05);POF组E2水平明显低于DOR组和对照组(P<0.05)。AMH水平与T、PRL水平呈正相关(P<0.05),与FSH、E2水平呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,AMH诊断PCOS的曲线下面积(AUC)为0.871,灵敏度为67.4%,特异度为92.0%,最佳诊断切点为6.64 ng/mL;AMH诊断POF和DOR的AUC分别为0.935、0.800,灵敏度分别为78.9%、76.7%,特异度分别为98.9%、79.5%。结论AMH水平在不同卵巢储备功能患者中存在明显差异,可作为PCOS、POF及DOR早期诊断的血清学指标。

叶酸基因多态性和唐氏综合征高危风险之间的相关性研究

目的探讨唐氏综合征高危风险与叶酸基因多态性间的相关性。方法采用化学发光法对679例孕中期妇女血清中甲胎蛋白(AFP)、人类绒毛膜性腺激素(β-HCG)和游离雌三醇(uE3)进行检测;采用分析软件综合计算胎儿唐氏综合征风险性;通过聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性法对受试孕妇进行叶酸代谢相关基因检测,包括亚甲基四氢叶酸还原酶MTHFR A1298C、甲硫氨酸合成还原酶MTRR A66G和RFC1A80G;分析2组唐氏综合征风险水平中3种叶酸代谢基因分布频率及等位基因频率。结果 (1)在唐氏综合征的高、低危组中,采用χ2检验MTHFR A1298C、MTRR A66G和RFC1A80G不同基因型和等位基因频率,仅MTHFR A1298C基因型比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)高危组中孕妇血清β-HCG的MOM值大于低危组,而AFP和uE3的MOM值小于低危组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)经Logistic回归分析,AFP、β-HCG、uE3和MTHFR A1298C可能与唐氏综合征高危风险相关(P<0.05),OR值分别为0.076、43.224、0.071和0.306。结论叶酸代谢酶MTHFR A1298C的基因多态性可能与唐氏高危风险具有一定相关性,而MTRR A66G和RFC1A80G可能不具有相关性。

学龄前儿童维生素D水平的影响因素分析

目的分析扬州市健康儿童的维生素D水平,评价其营养状况,对其影响因素进行探讨。方法对2014年1-12月该院进行健康体检的学龄前儿童进行静脉末梢血血浆的血清25-羟维生素D[25-（OH）D]水平测定,使用SPSS17.0对获得数据进行分析。结果各年龄阶段的学龄前儿童维生素D水平差异有统计学意义（P〈0.05）,季节变化、产妇的维生素D水平对学龄前儿童的维生素D水平也有一定的影响。结论扬州市学龄前儿童维生素D水平偏低,孕妇维生素D补充可以提高新生儿的维生素D水平,降低相关疾病的发生。

高危型HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈高级别鳞状上皮内病变的筛查价值

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)DNA和HPV E6/E7 mRNA检测两种方法对宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL,包含宫颈上皮内瘤变Ⅱ级及以上病变)的筛查价值。方法回顾性选择2020年6月至2021年7月在扬州市妇幼保健院因宫颈炎症、接触性出血等原因就诊的疑似宫颈病变而转阴道镜活检的639例患者为研究对象,患者均行HR-HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测、液基薄层细胞学检查及宫颈活体组织检查。比较不同细胞病理学和组织病理学分级患者HR-HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA阳性率。以组织病理学检查结果为金标准,分析HR-HPV DNA、HPV E6/E7mRNA检测对HSIL的筛查价值。结果HR-HPV DNA总阳性率为81.06%,明显高于HPV E6/E7 mRNA的52.58%(P<0.05)。不同细胞病理学分级患者比较,未见上皮内瘤变或恶性病变(NILM)、不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)和HSIL患者间HR-HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA阳性率差异均有统计学意义(P<0.05);相同细胞病理学分级患者比较,NILM、ASCUS、LSIL患者的HR-HPV DNA阳性率高于HPV E6/E7 mRNA阳性率(P<0.05),而HSIL患者的HPV DNA阳性率与HPV E6/E7 mRNA阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。不同组织病理学分级患者比较,HR-HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA阳性率均随组织病理学分级增高而升高(P<0.05),且相同组织病理学分级患者HR-HPV DNA阳性率均高于HPV E6/E7 mRNA阳性率(P<0.05)。HR-HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA检测筛查HSIL的受试者工作特征曲线下面积分别为0.587、0.755,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA检测筛查HSIL的临床价值高于HR-HPV DNA,可为宫颈癌前病变分流提供依据。

副溶血弧菌CalR蛋白的表达纯化及其DNA结合活性分析

目的:原核表达和纯化副溶血弧菌的CalR蛋白并分析其DNA结合活性,为后续深入研究其对靶基因的分子调控机制奠定基础。方法:以副溶血弧菌野生株RIMD2210633基因组DNA为模板,PCR扩增calR的编码区序列,将其克隆入p ET28a中获得重组载体;将重组载体导入大肠埃希菌BL21λDE3中,获得重组蛋白表达菌株,该菌株经IPTG诱导表达His6-CalR,用Ni-柱树脂进行蛋白纯化。PCR扩增T3SS1相关基因exsC、exsD和VP1687的启动子区序列,通过凝胶阻滞实验检测His6-CalR蛋白对它们的结合活性。结果:成功表达纯化出可溶性His6-CalR蛋白;凝胶阻滞实验结果显示,重组蛋白His6-CalR能够直接结合exsC、exsD和VP1687的启动子区。结论:本研究表达纯化的副溶血弧菌CalR蛋白具有DNA结合活性,可用于后续的转录调控机制研究。

伤寒沙门菌线性质粒pBSSB1的p17基因的生物学功能分析

H:z66阳性伤寒沙门菌含有一特有的介导鞭毛单向相变换的线性质粒pBSSB1,其上第17号基因(p17)编码一未知功能蛋白(P17)。利用λ-Red系统制备p17基因缺陷变异株,测定变异株和野生株的生长曲线,比较其生长差异,同时通过半固体LB培养基进行动力试验比较其动力差异。利用PCR技术扩增获得p17基因,构建其重组表达载体pET28a(+)-p17,通过镍柱纯化目的蛋白P17-His6,纯化后蛋白作为抗原免疫兔子以制备多克隆抗体。结果显示,制备了p17基因缺陷变异株,变异株的生长明显迟缓于野生株(P<0.05),变异株的动力明显减弱。构建了重组表达载体pET28a(+)-p17,纯化获得了高纯度的目的蛋白P17-His6并制得相应的多克隆抗体。

不同宫颈病变下高危型HPV亚型分布和HPVE6/E7 mRNA表达

目的:探讨不同宫颈病变下高危型HPV亚型分布和HPV E6/E7 mRNA表达。方法:回顾性分析2020年6月-2021年12月,21360名妇女在扬州市妇幼保健院接受高危型HPV DNA筛查检测,其中疑似宫颈病变转阴道镜活检患者799例,进行HPV E6/E7 mRNA检测和宫颈活体组织检查。以活检病理结果为金标准,比较分析不同宫颈病变下高危型HPV亚型分布和HPV E6/E7 mRNA表达。结果:21360名筛查对象中高危型HPV总感染率23.98%(5122例),各年龄组间HPV感染率不同,差异有统计学意义(P<0.05),其中20~25岁感染率最高,为38.62%(611例)。高危型HPV分型中HPV52感染率最高,为4.58%(979例)。在不同级宫颈组织病变中,高危型HPV DNA阳性率、HPV E6/E7 mRNA阳性率和表达随着组织病理级别的升高而增加,且各组间有显著性差异(P<0.05)。宫颈高级别病变中HPV16感染阳性率明显高于低级别病变和炎症组,差异有统计学意义(P<0.05)。高危型HPV多重感染组中HPV E6/E7mRNA表达明显高于单一感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高危型HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA阳性率和表达随着宫颈病变级别升高而增加,高危型HPV多重感染提高HPV E6/E7 mRNA阳性率和表达,可能影响HPV致病性。

副溶血弧菌calR的基因敲除株与回补株构建

目的构建副溶血弧菌calR的基因突变株和回补株,为研究CalR的功能奠定基础。方法 PCR扩增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自杀质粒p DS132中。通过接合转移的方式将重组自杀质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重组的方法替换原始calR基因以构建calR无痕突变株(ΔcalR)。PCR扩增calR的基因序列,并将其直接克隆入p BAD33质粒中,构建回补质粒。将回补质粒转入到ΔcalR中,即得回补株(ΔcalR/calR∷p BAD33)。将vop N的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒分别转入WT/p BAD33、ΔcalR/p BAD33和ΔcalR/calR∷p BAD33中,通过测定并比较3株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对vop N的调控关系。结果与结论 Lac Z结果表明,CalR负调控vop N的转录,且回补株的回补效果良好,表明成功构建了副溶血弧菌calR基因的突变株和回补株,为后续对CalR的功能研究打下了基础。

H-NS对副溶血弧菌泳动能力的调控研究

目的研究H-NS对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)泳动能力的调控作用。方法将VP接种于泳动实验平板上,37℃静置培养4.5 h后,通过比较不同菌株间菌苔直径的差异来判定H-NS对泳动表型的影响。提取WT和hns基因突变株(Δhns)的总RNA,采用实时定量RT-PCR方法研究H-NS对极鞭毛蛋白基因fla A的转录调控关系。将fla A启动子区DNA克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒转入WT和Δhns中,通过比较二者中β-半乳糖苷酶活性的差异研究H-NS对fla A的调控关系。结果与结论动力表型结果显示,H-NS可促进VP的泳动能力;实时定量RT-PCR和Lac Z报告基因融合实验结果表明H-NS正调控fla A的转录。这表明H-NS至少可通过激活fla A的转录而促进VP的泳动能力。

AphA蛋白对副溶血弧菌vopT的转录调控研究

【目的】研究副溶血弧菌AphA对vop T的转录调控机制。【方法】提取野生株(WT)和aphA突变株(ΔaphA)的总RNA,采用引物延伸实验研究vop T的转录起始位点,并根据产物的丰度差异判断AphA对其调控关系。分别将WT和ΔaphA的总RNA逆转录成c DNA,利用实时定量RT-PCR进一步研究AphA对靶基因的调控关系。将vop T的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒转入WT和ΔaphA中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定AphA对vop T的调控关系。PCR扩增靶基因整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,利用凝胶阻滞实验(EMSA)验证His-AphA对靶基因启动子区是否具有直接的结合作用。【结果】vop T只有一个转录起始位点A(-86),且其转录活性受AphA的间接抑制。RT-PCR和EMSA结果显示AphA对vtrA的转录也具有间接的抑制作用。【结论】AphA间接抑制vop T转录,且该间接抑制作用与VtrA无关。