TFEB介导的溶酶体功能障碍在ZEA致TM3细胞凋亡中的作用

为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)的雄性生殖毒性机理,对转录因子EB(TFEB)介导的溶酶体功能障碍在ZEA致TM3细胞凋亡中的作用进行了研究,试验以小鼠睾丸间质细胞株(TM3细胞)为材料,用0(对照组)、5、10μmol/L ZEA分别处理细胞24 h,流式细胞术检测TM3细胞内Lysotracker水平;Western-blot检测凋亡相关蛋白CC3、CC9、Bax、Bcl2,溶酶体相关膜蛋白LAMP1、LAMP2,组织蛋白酶B(CTSB)、D(CTSD)以及细胞质内TFEB蛋白等的表达水平。过表达TFEB,Western-blot检测CC3、CC9、Bax、Bcl2表达水平。结果显示,与对照组相比,ZEA处理组Bax、CC3、CC9表达水平显著上升而Bcl2表达水平显著下降(P<0.05);流式细胞术检测结果显示溶酶体膜稳定性下降;CTSD和CTSB表达水平显著升高(P<0.05),LAMP2和TFEB表达水平显著降低(P<0.05),LAMP1表达水平在ZEA为5μmol/L时显著降低(P<0.05)。与ZEA组相比,TFEB过表达后ZEA组的Bax、CC3和CC9蛋白表达水平显著下降(P<0.05),而Bcl2表达水平显著上升(P<0.05),过表达TFEB可缓解ZEA引起的凋亡。结果表明,ZEA可引起TM3细胞凋亡增加,其作用机制与破坏TFEB信号通路,导致溶酶体出现功能障碍有关。