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不同时间采集尿样对检验结果的影响研究 被引量:11
1
作者 侯剀 《河北医学》 CAS 2011年第1期4-7,共4页
目的:探讨同一病人不同时段采集尿标本对检验结果的影响。方法:用优利特-100型半自动尿分析仪对107名志愿者同一天内的晨尿、2次晨尿进行常规尿沉渣定量和干化学检测,并对结果进行对比分析。结果:2次晨尿除亚硝酸盐、红细胞计数、变形... 目的:探讨同一病人不同时段采集尿标本对检验结果的影响。方法:用优利特-100型半自动尿分析仪对107名志愿者同一天内的晨尿、2次晨尿进行常规尿沉渣定量和干化学检测,并对结果进行对比分析。结果:2次晨尿除亚硝酸盐、红细胞计数、变形红细胞阳性率低于晨尿外,其余指标均高于晨尿,其中尿糖、尿蛋白、白细胞、上皮细胞、红细胞计数、变形红细胞阳性率具有统计意义。结论:作为尿沉渣、干化学检查的标本,2次晨尿代替晨尿准确性不但无影响,还可做到从排尿到检查在2h内完成,使尿中红、白细胞、管型等成份不变形或溶解。显著提高了尿液分析中某些检验项目的阳性率,建议临床留取2次晨尿进行尿沉渣定量和干化学检测。 展开更多
关键词 晨尿 2次晨尿 尿沉渣定量 干化学检测
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大鼠高亲和力二羧酸转运蛋白的克隆表达及细胞内定位
2
作者 侯剀 白雪源 +2 位作者 陈香美 冯哲 傅博 《生物技术通讯》 CAS 2008年第3期328-331,共4页
目的:克隆大鼠高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT2)的全长cDNA,并明确其在肾小管上皮细胞内的定位表达情况。方法:从大鼠肾组织中提取总RNA,用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增出SDCT2全长基因并测序,将其插入真核表达载体... 目的:克隆大鼠高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT2)的全长cDNA,并明确其在肾小管上皮细胞内的定位表达情况。方法:从大鼠肾组织中提取总RNA,用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增出SDCT2全长基因并测序,将其插入真核表达载体中构建SDCT2真核表达载体,然后将它们转染到肾小管上皮细胞LLC-PK1中表达,并用激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况。结果:扩增出2kb的SDCT2全长基因,Westernblot表明SDCT2基因在LLC-PK1细胞中得到了正确的表达;共聚焦显微镜分析显示正常SDCT2蛋白主要定位于细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致;为了比较不同连接温度对重组DNA连接效率的影响,观察了3种连接温度下的转化效率,结果显示温度循环法的连接效率明显比其他2种常规连接温度要高。结论:高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白全长基因被成功克隆,其主要表达于肾小管上皮细胞膜上。 展开更多
关键词 二羧酸转运蛋白 三羧酸循环 肾小管 亚细胞定位 连接效率
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高尿酸通过miR-155下调eNOS表达而导致内皮细胞功能障碍 被引量:31
3
作者 张雪光 洪权 +3 位作者 侯剀 王远大 吴镝 陈香美 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1141-1145,共5页
目的高尿酸血症是心血管和肾脏疾病的独立风险因素,本研究拟从miR-155入手初步探索其在高尿酸导致内皮功能障碍过程的作用机制。方法培养人脐静脉内皮细胞系HUVEC,以600μmol/L的尿酸孵育24、48 h之后收集细胞及细胞上清液,检测eNOS的... 目的高尿酸血症是心血管和肾脏疾病的独立风险因素,本研究拟从miR-155入手初步探索其在高尿酸导致内皮功能障碍过程的作用机制。方法培养人脐静脉内皮细胞系HUVEC,以600μmol/L的尿酸孵育24、48 h之后收集细胞及细胞上清液,检测eNOS的蛋白表达及上清液的NO含量;预测并利用双荧光素酶系统验证miR-155的靶基因,随后利用荧光定量PCR检测高尿酸环境中内皮细胞miR-155的表达情况,通过miR-155 inhibitor的转染检测它对内皮功能障碍的影响。结果 600μmol/L的尿酸能诱导内皮细胞eNOS表达下降,NO分泌减少;microRNA在线分析软件及双荧光素酶报告实验提示eNOS的翻译水平受miR-155直接调控;同时发现高尿酸刺激内皮细胞后miR-155的表达上调,而miR-155 inhibitor能抑制它的表达;内皮细胞转染miR-155 inhibitor之后再进行高尿酸的孵育,eNOS的表达及NO的分泌水平与单独高尿酸孵育组相比均显著升高。结论高尿酸可通过miR-155下调eNOS表达而导致内皮细胞功能障碍。 展开更多
关键词 高尿酸血症 microRNA-155 内皮细胞
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IgA肾病肾病综合征临床病理特点及肾脏病理危险因素 被引量:24
4
作者 列才华 陈香美 +4 位作者 谢院生 吴杰 王涌 陈仆 侯剀 《中国中西医结合肾病杂志》 2008年第4期321-324,共4页
目的:探讨IgA肾病肾病综合征患者临床病理特点及肾脏病理损害的危险因素。方法:选择1987年~2006年经肾活检确诊IgA肾病并表现为肾病综合征的患者118例,分析其临床病理特点,按肾脏病变轻重分为A组(n=34,包括Lee氏分级Ⅰ级、Ⅱ级)... 目的:探讨IgA肾病肾病综合征患者临床病理特点及肾脏病理损害的危险因素。方法:选择1987年~2006年经肾活检确诊IgA肾病并表现为肾病综合征的患者118例,分析其临床病理特点,按肾脏病变轻重分为A组(n=34,包括Lee氏分级Ⅰ级、Ⅱ级)、B组(n=84,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级),比较两组临床指标,并多因素分析影响肾脏病理损害的危险因素。结果:A、B两组高血压分别占11.8% vs 63.1%;肾衰竭分别占15% vs 41.7%;A、B两组尿蛋白≥6g/24h者分别占58.8% vs 32.1%;尿红细胞满视野分别为14.7% vs 50%。A组高血压、肾衰竭、镜下尿红细胞满视野发生率显著低于B组(P〈0.01),尿蛋白≥6g/24h发生率显著高于B组(P〈0.01)。A组平均动脉压、血肌酐明显低于B组(P〈0.01);而尿蛋白定量、血红蛋白显著高于B组(P〈0.05)。多因素分析显示IgA肾病肾病综合征患者肾脏病理损害重的危险因素有平均动脉压、尿蛋白〈6g/24h、镜下尿RBC〉5.0×10^7/L(0R值分别为1.048,3.227,6.578;P值分别为0.034,0.047,0.002),血红蛋白是保护性因素(OR=0.723,P=0.035)。随着平均动脉压的升高、血红蛋白的降低、镜下尿红细胞数的增多,肾脏病理损害程度加重(P〈0.01)。结论:IgA肾病肾病综合征患者临床、病理表现存在差异,高血压、血红蛋白水平、24h尿蛋白排泄量、镜下尿红细胞程度有助于判断肾脏病理损害轻重。 展开更多
关键词 IGA肾病 肾病综合征 临床病理 危险因素
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人肾尿酸转运蛋白1基因克隆、抗体制备及其在肾小管上皮细胞中的定位 被引量:4
5
作者 吴镝 张萍 +6 位作者 陈香美 洪权 许国双 张晓洁 冯哲 丁瑞 侯剀 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期397-400,共4页
目的制备人尿酸转运蛋白1(hURAT1)多克隆抗体并利用该抗体检测hURAT1在肾组织中的表达及亚细胞定位。方法用RT PCR方法从人肾组织中扩增出hURAT1基因全长及其抗原表位区,分别构建绿色荧光蛋白hURAT1pEGFP融合表达载体和GST融合表达载体p... 目的制备人尿酸转运蛋白1(hURAT1)多克隆抗体并利用该抗体检测hURAT1在肾组织中的表达及亚细胞定位。方法用RT PCR方法从人肾组织中扩增出hURAT1基因全长及其抗原表位区,分别构建绿色荧光蛋白hURAT1pEGFP融合表达载体和GST融合表达载体pGEX5X1。诱导表达并纯化GST融合蛋白,利用改良的蛋白免疫法制备多克隆抗体;Westernblot及免疫组化方法观察人肾组织的hUART1基因产物的表达。将hURAT1pEGFP重组质粒转染细胞,激光共聚焦显微镜动态观察hU RAT1pEGFP在肾小管上皮细胞LLC PK1细胞膜的定位及表达。结果成功获得高效特异的hURAT1抗体,利用该抗体证实hU RAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘,Westernblot证实hURAT1蛋白在肾组织中表达。激光共聚焦显微镜动态观察显示hURAT1pEGFP定位于LLC PK1细胞膜。结论制备的hURAT1抗体及其全长基因可用于hURAT1基因的生理功能及病理研究,hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘。 展开更多
关键词 阴离子转运蛋白质类 尿酸 荧光抗体技术 抗体
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超重和肥胖对IgA肾病患者临床及病理指标的影响 被引量:8
6
作者 列才华 谢院生 +5 位作者 陈香美 吴杰 陈仆 王涌 侯剀 尹忠 《北京医学》 CAS 2009年第3期141-145,共5页
目的探讨超重和肥胖对原发性IgA肾病患者临床及病理指标的影响。方法回顾性分析690例IgA肾病患者的临床及病理资料,根据体质指数(BMI,kg/m2)分为四组,分别比较低体重(BMI<18.5,n=32)、正常体重(BMI18.5~23.9,n=259)、超重(BMI24~27... 目的探讨超重和肥胖对原发性IgA肾病患者临床及病理指标的影响。方法回顾性分析690例IgA肾病患者的临床及病理资料,根据体质指数(BMI,kg/m2)分为四组,分别比较低体重(BMI<18.5,n=32)、正常体重(BMI18.5~23.9,n=259)、超重(BMI24~27.9,n=252)和肥胖(BMI≥28,n=147)四组间的临床和病理指标,并按年龄段进行分层分析。结果超重和肥胖IgA肾病患者以男性为主(P<0.05),超重和肥胖组年龄、平均动脉压、甘油三酯、血尿酸显著高于正常体重组(P<0.01)。超重和肥胖组肾脏病理总积分显著增加,肾小管间质积分及肾内血管积分显著高于低体重及正常体重组(P<0.05)。超重和肥胖对IgA肾病临床和病理指标的不利影响,以20~40岁年龄段最为明显。结论超重和肥胖与许多影响IgA肾病进展的危险因素有关,尤其是青壮年,应重视并早期干预。 展开更多
关键词 肥胖 体质指数 IGA肾病 危险因素
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人SDCT2蛋白亚细胞定位信号分析 被引量:1
7
作者 白雪源 侯剀 +3 位作者 陈香美 冯哲 傅博 吴镝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期881-886,共6页
为了确定人高亲和力钠离子依赖性二羧酸共转运蛋白 (high affinitysodium dependentdicarboxylateco transporter,SDCT2 ,NaDC3)在细胞内的定位 ,构建了SDCT2与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的融合蛋白表达载体 ,并转染肾小管上皮细胞LLC P... 为了确定人高亲和力钠离子依赖性二羧酸共转运蛋白 (high affinitysodium dependentdicarboxylateco transporter,SDCT2 ,NaDC3)在细胞内的定位 ,构建了SDCT2与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的融合蛋白表达载体 ,并转染肾小管上皮细胞LLC PK1,激光共聚焦显微镜观察显示 ,SDCT2蛋白主要定位于细胞的基底侧膜上 .同时将SDCT2 EGFP融合基因mRNA显微注射到爪蟾卵母细胞中表达 ,可见融合蛋白的绿色荧光仅分布在细胞膜上 .为了进一步确定该蛋白质的亚细胞定位信号序列 ,将SDCT2基因的N端及C端分别缺失 ,并构建缺失突变体与EGFP的融合蛋白表达载体 ,将它们转染到LLC PK1中 ,观察SDCT2缺失体在细胞内的分布情况 .结果显示 ,N端缺失的SDCT2蛋白主要位于细胞质中 ,顶膜和基底侧膜上也有表达 ;C端缺失的SDCT2蛋白主要位于基底侧膜上 ,顶膜几乎没有表达 ,细胞质中表达很少 .免疫组化结果也显示 ,SDCT2只表达于人近端肾小管上皮细胞的基底侧膜 .这表明SDCT2蛋白的N端序列对其亚细胞定位是必需的 ,人SDCT2蛋白的基底膜定位信号位于N端序列中 . 展开更多
关键词 二羧酸共转运蛋白 亚细胞定位 增强型绿色荧光蛋白 肾小管
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人SDCT2基因的两种不同转录产物选择性转录机理分析 被引量:1
8
作者 白雪源 陈香美 +2 位作者 侯剀 朱晗玉 邱强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期615-622,共8页
为了克隆人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (highaffinitysodium dependentdicarboxylatetransporter,SDCT2 ,或NaDC3)基因并研究其生理功能 ,用大鼠SDCT2基因序列作为电子杂交探针对人EST数据库进行电子筛选 ,得到了一系列与大鼠S... 为了克隆人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (highaffinitysodium dependentdicarboxylatetransporter,SDCT2 ,或NaDC3)基因并研究其生理功能 ,用大鼠SDCT2基因序列作为电子杂交探针对人EST数据库进行电子筛选 ,得到了一系列与大鼠SDCT2序列具有高度同源性的人EST序列 ,将它们拼接成 2个基因重叠群 ,设计特异性PCR引物通过RT PCR扩增得到 2条杂交探针用于筛选人肾cDNA文库 .从肾组织中同时克隆出了人SDCT2基因 2种mRNA变异体的全长cDNA(SDCT2α和SDCT2 β) ,两者 5′端前 3435bp序列完全一致 ,但 3′端长度不同 ,SDCT2 β在第 3435bp以后比SDCT2α多出了 5 85bp的序列 .Northern杂交和RT PCR显示 ,SDCT2α在人肾中的表达丰度最高 ,在肝、脾、胎盘、脑及结肠中也有低水平的表达 .而SDCT2 β主要在肾脏中表达 ,在脾也有低水平的表达 .基因组结构分析表明 ,虽然两种mRNAs均由 13个外显子组成 ,但是SDCT2α的第 13外显子含有 1个poly(A)加尾信号AATAAA ,而SDCT2 β的第 13外显子含有 2个poly(A)加尾信号 .这表明在肾脏和脾脏组织中 ,人SDCT2基因可能通过选择性使用位于第 13外显子不同位置的 2个poly(A)信号而转录出 2种不同长度的mRNA变异体 . 展开更多
关键词 SDCT2基因 选择性转录终止 选择性剪接 转录产物 变异体
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人尿酸转运蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:2
9
作者 洪权 吴镝 +1 位作者 陈香美 侯剀 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第6期623-625,629,共4页
目的获得编码人尿酸转运蛋白(humanuricacidtransporter,hUAT)的全长基因。方法从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA,根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物,然后通过RT-PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP-C1连接... 目的获得编码人尿酸转运蛋白(humanuricacidtransporter,hUAT)的全长基因。方法从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA,根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物,然后通过RT-PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP-C1连接,经酶切及序列分析鉴定。结果成功扩增出980bp的hUAT全长基因,克隆到pEGFP-C1载体后酶切分析结果与预期一致,序列分析结果与Genbank上公布的hUAT序列完全一致。结论成功克隆出hUAT基因,序列分析结果完全正确,为对该基因进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 尿酸转运蛋白 逆转录-聚合酶链反应 克隆 序列分析
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人胆酸转运蛋白基因的克隆、亚细胞定位及其在肾组织中的表达
10
作者 白雪源 马玉香 +5 位作者 罗成华 师锁柱 侯剀 冯哲 傅博 陈香美 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期335-339,共5页
目的:克隆人肾与小肠ASBT(顶端Na+/胆汁酸协同转运蛋白)基因并比较2者的序列差别,明确ASBT蛋白在肾小管上皮的亚细胞定位及在人肾组织中的表达情况。方法:从人肾和小肠组织中提取总RNA,然后用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩... 目的:克隆人肾与小肠ASBT(顶端Na+/胆汁酸协同转运蛋白)基因并比较2者的序列差别,明确ASBT蛋白在肾小管上皮的亚细胞定位及在人肾组织中的表达情况。方法:从人肾和小肠组织中提取总RNA,然后用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增ASBT全长cDNA基因并测序,并将其插入真核表达载体中构建ASBT蛋白真核表达载体,然后将其转染到肾小管上皮细胞LLC-PK1中表达并用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况。用免疫组化技术观察ASBT在人肾组织中的表达分布。结果:序列分析结果表明肾小管ASBT基因的序列与小肠ASBT序列完全一致。Western blotting表明ASBT基因在LLC-PK1细胞中得到了正确的表达。共聚焦显微镜分析显示正常ASBT蛋白主要定位于肾小管上皮细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致。免疫组化染色表明ASBT蛋白主要表达于人近端肾小管上皮的刷状缘侧,在间质及远端小管没有表达。结论:人肾小管ASBT基因序列与小肠ASBT相同,ASBT蛋白主要表达于近端肾小管上皮细胞管腔侧细胞膜。 展开更多
关键词 胆汁酸类 肾小管 亚细胞定位 载体蛋白质类
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高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白基因的克隆、表达及亚细胞定位研究
11
作者 白雪源 陈香美 +2 位作者 侯剀 冯哲 傅博 《科学技术与工程》 2004年第11期909-912,920,共5页
为了研究高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白(high affinity sodium-dependent dicarboxylate trans-porter,SDCT2,NaDC3)的功能,从小鼠肾组织中克隆出了其cDNA基因,并对其结构特征、基因表达谱及细胞内定位情况进行了分析。结果显示NaDC... 为了研究高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白(high affinity sodium-dependent dicarboxylate trans-porter,SDCT2,NaDC3)的功能,从小鼠肾组织中克隆出了其cDNA基因,并对其结构特征、基因表达谱及细胞内定位情况进行了分析。结果显示NaDC3蛋白由600个氨基酸组成,同源性分析表明其氨基酸序列与大鼠及人NaDC3分别有97%和87%相同。二级结构分析显示,该蛋白有13个跨膜α-螺旋区。Northern杂交显示该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达。激光共聚焦显微镜观察显示该蛋白定位于肾小管上皮细胞膜上。 展开更多
关键词 钠离子 二羧酸转运蛋白 克隆 肾小管 亚细胞定位 基因表达 生物信息学
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人尿酸转运蛋白在肾小管上皮细胞的定位表达研究 被引量:7
12
作者 洪权 吴镝 +5 位作者 陈香美 侯剀 冯哲 傅博 许国双 丁瑞 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期527-533,共7页
目的明确人尿酸转运蛋白(hUAT)在人肾小管上皮细胞(HKC)内的定位表达情况。方法利用DNA重组技术构建hUAT。绿色荧光蛋白的融合基因分别导入人HKC及非洲爪蟾卵细胞。构建hUAT的谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达载体并制备抗hUAT的多克隆抗体... 目的明确人尿酸转运蛋白(hUAT)在人肾小管上皮细胞(HKC)内的定位表达情况。方法利用DNA重组技术构建hUAT。绿色荧光蛋白的融合基因分别导入人HKC及非洲爪蟾卵细胞。构建hUAT的谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达载体并制备抗hUAT的多克隆抗体。利用免疫荧光、Western印迹及激光共聚焦显微镜等技术观察hUAT在人HKC的定位表达。结果成功制备了兔抗hUAT-GST多克隆抗体。利用该抗体及构建的pEGFP-hUAT荧光表达载体进行Western印迹和免疫荧光检测,结果表明hUAT是一种膜蛋白,并且表达于人HKC胞膜上,Northernblot结果也表明人HKC在高尿酸环境中的hUAT表达水平明显上调(P<0.05)。结论hUAT并非典型的膜转运蛋白,可能是以二聚体的形式才能够表达在细胞膜上,它在细胞内的定位表达可能需要特殊的转录调控机制。 展开更多
关键词 高尿酸血症 尿酸 转运蛋白质类 肾小管 膜蛋白 人肾小管上皮细胞 膜转运蛋白 表达研究 WESTERN印迹 激光共聚焦显微镜
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定量RT-PCR方法检测衰老大鼠肾脏PAI-1基因的表达 被引量:3
13
作者 吕杨 洪权 +3 位作者 陈香美 张利 刘航 侯剀 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期172-175,共4页
目的 采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ (SYBRGREENⅠ )定量PCR法 ,对来源珍贵的微量组织中的基因进行检测 ,并对其可行性及适用性进行研究。 方法 取 2 4月龄的老年大鼠、3月龄青年大鼠各 6只 ,提取其肾脏组织的RNA ,采用SYBRGREENI实时检测... 目的 采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ (SYBRGREENⅠ )定量PCR法 ,对来源珍贵的微量组织中的基因进行检测 ,并对其可行性及适用性进行研究。 方法 取 2 4月龄的老年大鼠、3月龄青年大鼠各 6只 ,提取其肾脏组织的RNA ,采用SYBRGREENI实时检测的逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测纤溶酶系活化剂抑制物 1(PAI 1)基因的表达 ,并用磷酸甘油醛脱氢酶 (G3PDH)作为外参。 结果 标准曲线有良好的相关性 (R2 >0 99) ,PCR产物特异 ,将PAI 1的拷贝数与G3PDH的拷贝数相除 ,青年大鼠肾脏PAI 1表达水平为 (1 2 7± 0 90 )× 10 -3,老年大鼠肾脏PAI 1表达水平为 (3 84± 2 0 0 )× 10 -3,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 结论 只要严格控制PCR反应条件 ,SYBRGREENⅠ定量PCR法可以作为一种良好的定量PCR方法对来源珍贵的微量组织的基因表达进行检测 ,并证实了老年大鼠肾脏PAI 展开更多
关键词 定量RT-PCR方法 检测 衰老 大鼠 纤溶酶原激活物抑制物1
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细胞周期抑制因子p19ARF对人二倍体细胞衰老的影响 被引量:1
14
作者 白雪源 陈香美 +3 位作者 侯剀 张萍 冯哲 傅博 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2007年第1期15-19,共5页
为了探讨细胞周期抑制因子p19ARF对人二倍体细胞复制性衰老的影响,构建了重组p19ARF真核表达载体,并通过脂质体的介导将p19ARF基因转染到人二倍体成纤维细胞WI-38中过表达,观察其对WI-38细胞衰老的影响.结果发现与对照细胞相比,在p19AR... 为了探讨细胞周期抑制因子p19ARF对人二倍体细胞复制性衰老的影响,构建了重组p19ARF真核表达载体,并通过脂质体的介导将p19ARF基因转染到人二倍体成纤维细胞WI-38中过表达,观察其对WI-38细胞衰老的影响.结果发现与对照细胞相比,在p19ARF基因导入后,细胞中p53和p21的表达水平明显上调,细胞传代数减少10~12代,生长速率降低,细胞周期阻滞于G1期,衰老标志物SA-β-gal染色阳性率上升,线粒体膜电位下降,细胞形态呈衰老细胞样变化,这些结果表明p19ARF高表达可促进人二倍体细胞的衰老进程. 展开更多
关键词 p19ARF 细胞衰老 二倍体细胞 细胞周期 抑癌基因
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大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白对枸橼酸及草酸转运电生理特性的研究
15
作者 吴镝 丁瑞 +4 位作者 陈香美 侯剀 洪权 朱晗玉 冯哲 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期195-198,共4页
目的 探讨大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT1)对枸橼酸及草酸的转 运特点。方法 克隆出大鼠SDCT1全长cDNA基因。应用爪蟾卵母细胞异源性表达SDCT1,并 使用双电极电压钳法记录通道电流。通过改变灌流液中枸橼酸、草酸的浓度,以及... 目的 探讨大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT1)对枸橼酸及草酸的转 运特点。方法 克隆出大鼠SDCT1全长cDNA基因。应用爪蟾卵母细胞异源性表达SDCT1,并 使用双电极电压钳法记录通道电流。通过改变灌流液中枸橼酸、草酸的浓度,以及两种底物转运 时钠离子的浓度及pH值,对其特性进行了研究。结果SDCT1对枸橼酸及草酸的转运均为底 物浓度及钠离子依赖。pH值变化显著影响2者的转运。但低pH对草酸的转运影响要远大于枸 橼酸。结论 在临床实践中,虽然升高尿液pH值可以抑制枸橼酸的重吸收,发挥其抑制钙盐沉 积的功能。但过度地碱化尿液也会使草酸的重吸收受到抑制,使草酸大量存留在尿中而导致结 石。保持适当的尿酸碱度是必要的。 展开更多
关键词 钠依赖二羧酸转运蛋白 低亲和力 枸橼酸 电生理特性 草酸 大鼠 CDNA基因 爪蟾卵母细胞 双电极电压钳 pH值变化 通道电流 临床实践 钙盐沉积 碱化尿液 尿酸碱度 钠离子 重吸收 异源性 灌流液 浓度 低pH 抑制 底物
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EGFP/SDCT1融合蛋白表达、亚细胞定位信号分析、组织分布及电生理功能研究
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作者 白雪源 陈香美 +4 位作者 冯哲 吴镝 侯剀 程根阳 彭丽霞 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2004年第3期271-278,共8页
从正常人肾中克隆低亲和力钠离子依赖二羧酸共转运蛋白1(sodium-dependentdicarboxylateco-transporter1,SDCT1,NADC1)全长基因,并将其和N端及C端缺失突变的SDCT1基因分别插入增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达载体中构建EGFP/SDCT1融... 从正常人肾中克隆低亲和力钠离子依赖二羧酸共转运蛋白1(sodium-dependentdicarboxylateco-transporter1,SDCT1,NADC1)全长基因,并将其和N端及C端缺失突变的SDCT1基因分别插入增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达载体中构建EGFP/SDCT1融合蛋白真核表达载体,然后将它们转染到人肾小管上皮细胞HKC中表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的亚细胞定位情况以确定其定位信号.双重PCR分析证实融合基因已整合到细胞基因组中,Westernblot显示融合基因已在细胞中得到表达.共聚焦显微镜分析显示正常人SDCT1蛋白主要定位于细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致,而C端缺失的SDCT1基因转染的细胞,其绿色荧光位于细胞质,N端缺失基因转染的细胞,其绿色荧光主要位于细胞膜上.将体外转录的融合基因mRNA显微注射到爪蟾卵母细胞中表达并用双电极电压钳技术记录细胞跨膜电流,结果在卵细胞膜上测定出了Na+内向电流.免疫组化结果显示SDCT1主要表达于人近端肾小管上皮细胞的管腔侧,而在远端肾小管、集合管、肾间质和肾小球中未见SDCT1的表达.上述研究表明,正常人SDCT1蛋白定位于近端肾小管上皮细胞的管腔侧膜上,SDCT1蛋白的C端部分对于其合成后的迁移及靶向定位是必需的,人SDCT1蛋白的细胞膜定位序列可能位于其C端部分. 展开更多
关键词 融合蛋白 亚细胞 二羧酸共转运蛋白 三羧酸循环 肾小管 组织分布 电生理 生物信息学
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微波石蜡切片免疫荧光双重染色在肾脏病理研究中的应用 被引量:2
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作者 师锁柱 陈香美 +3 位作者 洪权 侯剀 冯哲 尹忠 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期136-136,共1页
我们尝试用石蜡切片进行免疫荧光双重染色,目的是希望它既有冰冻切片免疫荧光染色抗原特异性高,敏感性强,能同时显示表达于同一部位的两种抗原的特点,又具有石蜡切片免疫组化染色组织细胞结构清晰,抗原定位准确的优点。
关键词 微波石蜡切片 免疫荧光染色 双重染色 肾脏病理 抗原特异性 组织细胞结构 免疫组化染色 冰冻切片
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