大鼠骨骼肌细胞的原代培养及鉴定

探讨体外条件下骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化及鉴定的方法。取新生3～5 d的SD大鼠处死清洗后,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶联合酶消化30 min,细胞悬液过滤离心后,用含有10%胎牛血清的培养液悬浮细胞,1 h后重新接种,重新接种2次,最后接种于L-多聚赖氨酸铺底的培养瓶中;采用骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometric actin)免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞。肌卫星细胞培养5～6 h后开始贴壁,48 h完全贴壁,之后细胞进一步增多并相互融合,逐渐按一定方向呈有序排列。当细胞增殖至70%密度时,有融合趋势,加入分化培养基培养48 h后可形成多核的肌管,行免疫荧光染色,90%以上的细胞α-sarcometric actin染色阳性,证明培养的为骨骼肌细胞。

胰岛素抵抗骨骼肌细胞中P-Ser473PKB及糖原合成酶-3表达

目的探讨棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗(IR)骨骼肌细胞中P-Ser473PKB及糖原合成酶(GSK)-3的表达。方法培养大鼠骨骼肌细胞,免疫荧光鉴定原代大鼠骨骼肌细胞;设立对照组、PA组(0.6mmol/L PA),在细胞培养6、122、4 h后,胰岛素刺激15 min,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联(GOD-POD)法测定培养液中葡萄糖的浓度;Western blot检测P-Ser473PKB及P-Ser21/9GSK-3α/β的蛋白表达。结果 90%以上的肌细胞-αsarcometric actin单克隆抗体染色呈阳性,证明培养的为骨骼肌细胞;培养24 h后,PA组培养液中葡萄糖浓度高于对照组,P-Ser473PKB蛋白水平低于对照组,而P-Ser21/9GSK-3α/β高于对照组(P值均<0.05)。结论 PA作用下,胰岛素刺激的骨骼肌细胞对葡萄糖的处理能力下降,即PA可诱导骨骼肌细胞产生胰岛素抵抗,其机制可能与P-Ser473PKB蛋白表达下调,P-Ser21/9GSK-3α/β表达增加有关。

蛋白激酶C对胰岛素抵抗骨骼肌细胞的影响

目的探讨蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)在棕榈酸(Palmitic Acid,PA)诱导的骨骼肌细胞胰岛素抵抗(Isulin Resistance,IR)中的作用。方法免疫荧光鉴定原代大鼠骨骼肌细胞,氧化酶-过氧化物酶偶联法(GOD-POD法)检测培养液中葡萄糖浓度。设立对照组、棕榈酸组(PA组)、罗格列酮组(Rosiglitazone,Ros组),每组一分为二,分别加PKC抑制剂白屈莱红碱(Chelerythrine Chloride,CC)与正常培养液作用1h,Western Blot检测PKB及P-Ser473 PKB表达水平。结果 90%以上的细胞-αsarcometric actin免疫荧光染色呈阳性反应,表明培养的细胞为骨骼肌细胞;0.6mmol/L的PA作用24h可诱导骨骼肌细胞产生胰岛素抵抗;PA组与对照组相比P-Ser473 PKB水平显著降低,与本组未加CC相比显著升高。同时,罗格列酮组及本组加CC中P-Ser473PKB水平均高于PA组。结论在PA诱导的骨骼肌细胞IR方面PKC起重要作用,罗格列酮与PKC抑制剂CC均能改善PA引起的IR。

初发的自发酮症倾向糖尿病患者的临床特征及分型

目的探讨自发酮症起病的糖尿病患者的临床特征及分型。方法将206例自发酮症起病的糖尿病患者根据糖尿病抗体分为抗体阳性组、抗体阴性组。阴性组依据体质量分为肥胖组、非肥胖组。比较不同组别在起病年龄、体质量指数、体质量下降、C肽水平等方面的差异,并对抗体阳性组20例,阴性组50例进行了随访观察。结果抗体阳性与阴性组相比,起病年龄、体质量指数、C肽水平、血甘油三酯等差异有统计学意义,2组起病时血糖、体质量下降、糖尿病家族史等差异无统计学意义。肥胖组与非肥胖组相比,空腹血糖、C肽水平、血甘油三酯等差异有统计学意义,2组之间葡萄糖耐量试验(OGTT)2 h血糖、起病年龄、糖尿病家族史等差异无统计学意义。随访的抗体阳性20例患者,其中4例停用胰岛素治疗,16例继续胰岛素治疗,20例患者3个月后复查C肽,治疗前后差异无统计学意义。随访的50例抗体阴性患者中肥胖组21例停用胰岛素治疗,4例胰岛素治疗;非肥胖组16例停用胰岛素治疗,9例胰岛素治疗;50例患者中8例停用胰岛素患者3个月后复查C肽,2 hC肽水平治疗前后差异有统计学意义,2例继续胰岛素治疗患者C肽水平差异无统计学意义。结论在自发酮症倾向的初发患者中不仅包括1型糖尿病,也包括部分血糖升高的有胰岛素抵抗的2型糖尿病,对初发自发酮症倾向的糖尿病患者分型不明确者,需在病程中监测胰岛功能,逐渐明确分型。

达格列净对2型糖尿病伴代谢综合征患者代谢指标的影响

代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是以肥胖、高血糖、血脂异常以及高血压等聚集发病的影响机体健康的一组临床征候群,是在代谢上相互关联的危险因素的一种组合。这些因素可直接促进动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)的发生,也会增加2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)发生的风险,与非MS患者相比,MS患者发生心血管疾病和T2DM的风险均显著增加[1]。

高渗性非酮症糖尿病昏迷15例临床分析

目的:探讨高渗性非酮症糖尿病昏迷的临床特点及诊治体会。方法:采用回顾性调查研究,对15例高渗性非酮症糖尿病昏迷患者的临床资料进行分析。结果:高渗性非酮症糖尿病昏迷患者中老年人占66.7%,临床好转9例,死亡5例,自动放弃1例,病死率为33.3%。结论:高渗性非酮症糖尿病昏迷好发于老年人,病死率高,早期诊断,及早纠正脱水、电解质紊乱,积极治疗诱因与并发症是成功的关键。

胰岛素泵强化治疗对初诊2型糖尿病患者血糖控制的临床疗效

目的:分析胰岛素泵强化治疗对初诊2型糖尿病(T2DM)患者血糖控制的临床疗效。方法:选取2019年1月至2020年10月我院收治的72例初诊T2DM患者。随机分为观察组和对照组,各36例。对照组采用胰岛素4次皮下注射治疗;观察组采用胰岛素泵强化治疗。比较两组的血糖控制情况、血糖达标时间,平均使用胰岛素剂量及低血糖发生情况。结果:两组治疗后血糖水平均明显恢复,但观察组改善更明显(P<0.05);观察组的FBG、P2hBG低于对照组(P<0.05),血糖达标所需时间短于对照组(P<0.05),平均胰岛素用量少于对照组(P<0.05),低血糖发生率低于对照组(P<0.05)。结论:初诊T2DM患者应用胰岛素泵强化治疗在改善血糖水平方面优于胰岛素4次皮下注射,可明显减少胰岛素用量,缩短住院时间,降低血糖风险低。

不打胰岛素只吃降糖药行吗

q我今年68岁,饿的时候总觉得心慌、头晕,自觉小便发黏,用血糖仪在家自测随机血糖13.9毫摩尔/升,又去医院挂号,经检查后确诊为2型糖尿病。医生建议我用胰岛素治疗,可是我觉得是不是胰岛素一打上就得打一辈子了,不太想用,光吃药行吗?A胰岛素是身体内唯一直接发挥降糖作用的激素,各种原因引起胰岛素缺乏或作用减弱,都会导致糖尿病。反过来,血糖特别高的时候,也会抑制胰岛素的分泌。

新型动态血糖仪是“智商税”吗

Q最近发现自己患上了糖尿病,病友给我推荐了一种戴在手臂上的动态血糖仪,佩戴好了以后两周一换,就不用老扎手指了,使用手机应用程序可以随时随地监测血糖。我买了一盒,花了几百块,但是测出来的数值总是比我用手指血糖仪测的低一点。这种新型动态血糖仪靠谱吗,是不是“智商税”?用什么方法测血糖会更准一些呢?

忘吃降糖药了,应该怎么补服

Q我是2型糖尿病患者,平时一直饭前服用降糖药。临时有事需要在外用餐,发现自己没有随身带药,我先吃饭回家后再补服药物可以吗?如果是忘记服药了,应该怎么补服呢?北京路先生。A降糖药物有多种类型,有些药物是可以补服的,但是要把握好时机。