荧光免疫层析技术检测寨卡病毒IgG抗体

目的建立和开发一种高特异性、高灵敏度的寨卡病毒IgG抗体的检测方法。方法本研究对寨卡病毒E蛋白核酸序列优化,减低其交叉反应,经过大肠杆菌诱导表达,亲和层析纯化获得特异性蛋白。将获得的寨卡病毒E蛋白抗原喷于检测区捕获样品中的目标抗体,将羊抗小鼠IgG喷于控制区进行质量控制;将鼠抗体人IgG单克隆抗体标记荧光纳米颗粒(激发谱峰365 nm;发射光谱峰610 nm)作为标记抗体;建立荧光免疫层析试剂,配合荧光免疫检测仪YG10,检测人血清中的寨卡病毒IgG抗体,并对该检测方法进行性能验证。结果寨卡病毒E蛋白经大肠杆菌表达,菌液经过收集并超声后,上清和沉淀分别进行SDS-PAGE鉴定,多存在于沉淀中;纯化后的蛋白经SDS-PAGE鉴定,均呈现较单一的蛋白条带,纯度达到90%以上。建立的荧光层析试剂检测50份正常人血清,荧光免疫检测仪YG1分别扫描读取T、C信号值,读取T/C值,计算平均值(AVERAGE)和标准差(STDEVP),3倍标准差加上平均值作为阳性判断值,即:T/C≥3SD+AVG为阳性;与对比试剂ZIKV IgG酶联免疫试剂盒(Dia.Pro.)同时检测3份寨卡阳性标本均为阳性反应;10份正常人血清均为阴性反应;批内重复性CV≤20%,批间重复性CV≤15%;与相似的蚊媒病毒基孔肯雅病毒、登革病毒、黄热病毒、日本脑炎病毒均无交叉反应。结论该荧光层析试剂具有较好的灵敏性和特异性,可作为人血清、血浆、全血样本中寨卡病毒IgG抗体的快速筛查。

荧光免疫层析技术定量检测蓖麻毒素

为了建立免疫层析技术定量检测蓖麻毒素试剂,首先依据蓖麻毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术对蓖麻种子进行亲和层析纯化;其次采用凝胶过滤层析技术,获得更纯的天然蓖麻毒素纯品;最后以天然的蓖麻毒素脱毒为免疫原,分别免疫获得鼠抗相思中毒素单克隆抗体和兔抗蓖麻毒素多克隆抗体,利用获得的鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体作为标记抗体,标记羧基荧光微球(激发波长365nm,发射波长610nm)在NC膜上包被兔抗蓖麻毒素多克隆体作为检测线、包被羊抗鼠IgG抗体作为质控线,建立蓖麻毒素双抗体夹心定量检测试剂,并对该试剂进行性能评价。结果显示,纯化后的蛋白经SDS-PAGE处理后,分为分子量为65kDa左右的单条带、分子量为31kDa左右的双条带和33kDa左右的双条带,分别为Ricin毒素A链和B链。用TotalLab2.0软件分析纯化率为96%;检测试剂配合荧光免疫检测仪在0~50ng/mL的检测范围时,拟合曲线R2>0.990,线性范围为1~10ng/mL,R2>0.990,最低检出限为1ng/mL,且批间、批内重复性均小于15%。此法特异性良好,常温稳定性14个月,样本检测能力良好,可在食品和环境中应用蓖麻毒素进行定量检测。

胶体金免疫层析法快速定量检测蓖麻毒素

目的 利用胶体金免疫层析技术,建立快速定量检测蓖麻毒素的方法。方法 利用兔抗蓖麻毒素多克隆抗体作为标记抗体,标记胶体金颗粒;在硝酸纤维素膜上包被蓖麻毒素抗体(RCA)作为检测线,包被羊抗兔Ig G抗体作为质控线,建立蓖麻毒素的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并利用胶体金生物传感器读取信号,拟合检测曲线,完成定量检测;对常见的食品进行模拟添加蓖麻毒素,评价方法的检测能力。结果 研发的胶体金免疫层析试纸条可在15 min内完成检测,灵敏度为0.925μg/ml,线性范围0.925~14.8μg/ml;特异性、稳定性良好。结论 建立的检测蓖麻毒素的胶体金免疫层析方法可对样品直接检测。

利用荧光免疫层析技术检测新冠病毒IgG抗体

目的建立新冠病毒IgG抗体的快速检测方法。方法制备并纯化重组新冠病毒N蛋白,将获得的重组N蛋白免疫家兔,获得多克隆抗体。将鼠抗人IgG单克隆抗体和兔抗新冠病毒N蛋白多克隆抗体分别喷于硝酸纤维素膜的检测线和控制线,用重组N蛋白标记荧光纳米颗粒作为标记抗原,建立荧光免疫层析方法。结果重组新冠病毒N蛋白经表达纯化后,纯度达到90%以上。用新冠病毒IgG抗体标准品测得建立的荧光层析方法灵敏度为1∶5 000;与甲型流感病毒(H1N1、H3N2、H5N1、H7N9)、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒IgG抗体无交叉反应;批内、批间变异系数均低于10%。结论建立的新冠病毒IgG抗体检测方法具有较好的灵敏性和特异性,可用于新冠病毒抗体的快速筛查。

利用荧光免疫层析技术定量检测相思子毒素

目的利用荧光免疫层析技术,研发定量检测相思子毒素的试纸条。方法采用亲和层析法纯化相思子种子,用凝胶过滤层析纯化天然相思子毒素,制备鼠抗相思子毒素单克隆抗体和兔抗相思子毒素多克隆抗体,将特异性单抗结合荧光微球,兔多抗包被检测线,羊抗鼠二抗包被质控线,建立相思子毒素双抗体夹心定量检测方法及其试纸条,并对该试纸条进行性能评价。结果经纯化获得分子量31 k Da的相思子毒素A链和33 kDa的B链。研发的荧光免疫层析试纸条配合荧光免疫检测仪在0~50 ng/ml的检测范围内拟合曲线R^2=0.990,线性范围为1~10 ng/ml,最低检出限为1 ng/ml。批间、批內重复性均小于15%,常温稳定性14个月,采用动物血清和食物模拟样本检测特异性良好。结论开发的荧光免疫层析试纸条可以用于食品和环境中相思子毒素的检测。

完善机械租赁管理 提高工程项目经济效益

近年来，我国建设事业迅猛发展，建筑业体制发生了深刻变化，工程项目管理成为建筑企业生产经营管理体制中的核心问题，受到人们的重视，机械租赁作为设备管理的方向，对于提高工程项目经济效益有着直接的影响。下面根据自己从事设备管理的体会谈谈对这一问题的看法。当前，我国建筑施工企业的机械配置方式已逐渐由配属方式向租赁方式转移。在施工企业，特别是大中型施工企业，机械租赁终将取代固定配属，逐步推行机械租赁制则是设备管理的必然趋势。