纳米荧光素酶的表达、纯化及性质鉴定

由荧光素酶(luciferase)催化的一大类发光反应被统称为生物发光(bioluminescence),该反应具有背景低、灵敏度高、线性范围广等特点,是高灵敏检测的发展方向之一。课题组在近期的研究中全基因合成了一种纳米荧光素酶(nano luciferase),研究清楚了其理化性质的基础上,将其作为一种新型的生物发光检测工具。将荧光素酶基因克隆至原核高表达载体上,通过自动诱导系统进行了表达。通过Ni-NTA亲和层析纯化和分子筛将重组纳米荧光素酶进行纯化,其产量可稳定达到每升菌25.3 mg,纯度超过98%;通过酶活实验鉴定了纳米荧光素酶的活性,在1.0×10^(-4)~1.0×10^(-7)mg/m L的范围内,该酶均具有良好的线性反应,其线性检测下限低至1.0×10^(-7)mg/m L(约5pmol)。纳米荧光素酶具有灵敏度高、数据重复性好、操作简便、稳定性高、易于保存等多重优点,可利用其作为基础平台,开发具有应用前景的超灵敏新型生物发光探针。