油茶未授粉胚珠愈伤组织诱导及形态学和细胞学特征

【目的】筛选适合油茶‘华金’Camellia oleifera‘Huajin’未授粉胚珠诱导愈伤组织的最适培养基,并对愈伤组织进行细胞学观察,为油茶单倍体育种提供依据。【方法】以油茶‘华金’为试材,筛选未授粉胚珠诱导愈伤组织的最适培养基配方,研究基础培养基类型MS培养基、木本植物用培养基(WPM)、MT培养基、1/2MS培养基、B5培养基、生长素萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、二氯苯氧乙酸(2,4-D)和细胞分裂素苄氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、噻苯隆(TDZ)组合,以及植物生长调节剂浓度对愈伤组织诱导的影响;选取不同外部形态的愈伤组织进行石蜡切片,并根据流式细胞仪的倍性鉴定结果,研究愈伤组织来源及发育进程。【结果】MS作为基础培养基,添加1.0mg·L^(-1)NAA+2.0 mg·L^(-1)TDZ+40 g·L^(-1)蔗糖的诱导率最高,为92.97%,NAA和TDZ对诱导率影响显著(P<0.05),其中TDZ的影响程度大于NAA。胚性愈伤组织呈浅绿色颗粒状,细胞学特征为排列紧密,核大,倍性鉴定为六倍体。【结论】油茶未授粉胚珠诱导胚性愈伤组织的最适培养基配方为:MS+40 g·L^(-1)蔗糖+7 g·L^(-1)琼脂+1.0 mg·L^(-1)NAA+2.0mg·L^(-1)TDZ;愈伤组织由外珠被细胞脱分化形成。

‘德油6号’油茶带芽茎段快繁体系的建立

【目的】探究基本培养基、激素类型及配比对油茶带芽茎段芽诱导、芽增殖及无菌苗生根的影响,建立油茶高效快繁体系,为今后‘德油系列’油茶商品化育苗提供技术支撑。【方法】以油茶优良单株‘德油6号’的带芽茎段为试材,研究基本培养基、生长素、激素配比对芽诱导初代培养,IBA、IAA、KT等激素配比对芽增殖培养,速蘸IBA、水杨酸等处理方法对瓶内外生根培养的影响,确定适宜的消毒方法以及增殖和生根培养基。【结果】IAA与IBA诱导外植体腋芽萌发显著高于NAA,且IAA在促进芽伸长方面明显优于IBA;WPM与1/2MS基本培养基对于芽诱导均有较好的生长效果,WPM培养基对芽生长速度方面有促进作用;油茶带芽茎段芽诱导正交试验设计采用6-BA、IAA、GA_(3) 3种激素,因素主次:IAA>6-BA>GA_(3),组合A_(1) B_(1) C_(1):WPM+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+2.0 mg/L GA_(3),诱导率为93.8%;采用WPM+2.0 mg/L 6-BA+0.25 mg/L IBA+1.0 mg/L KT,增殖系数为3.14,且生长强壮,叶片翠绿;对单芽处理其基部速沾5.0 mg/mL IBA(10 s)+1.0 mg/L水杨酸(20 s),生根效果明显,接入1/2MS(4 g/L琼脂)空白培养基生根率高达90.9%,而接入扦插基质为蛭石+珍珠岩=1∶1时,生根率达到了87.5%。【结论】建立了油茶带芽茎段的组培快繁体系,尤其是采用速蘸高浓度生长素的方法,通过瓶内外生根的方式达到了较高的生根率。