慢肌肌钙蛋白C(Troponin C type 1,TNNC1)具有高度保守性,调控骨骼肌慢肌和心肌的收缩,影响肌蛋白的生成,从而可能导致动物肌肉的生长、进化和功能的差异。本研究以大熊猫和亚洲黑熊骨骼肌为材料,提取总RNA和基因组DNA,运用RT-PCR和Touc...慢肌肌钙蛋白C(Troponin C type 1,TNNC1)具有高度保守性,调控骨骼肌慢肌和心肌的收缩,影响肌蛋白的生成,从而可能导致动物肌肉的生长、进化和功能的差异。本研究以大熊猫和亚洲黑熊骨骼肌为材料,提取总RNA和基因组DNA,运用RT-PCR和Touch-down PCR分别扩增出TNNC1基因的cDNA序列和结构基因序列,并且构建了含有TNNC1 cDNA的重组表达载体,转化进入E.coli BL21进行超表达研究。结果表明大熊猫TNNC1基因的cDNA片段长602 bp,包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2 831 bp,包含6个外显子和5个内含子。亚洲黑熊TNNC1基因的cDNA片段长486 bp,亦包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2 758 bp,同样包含6个外显子和5个内含子。该两个物种的TNNC1基因与已报道的13种动物的TNNC1基因具有很高的相似性。拓扑预测表明,大熊猫和亚洲黑熊TNNC1蛋白有1个蛋白激酶C磷酸化位点,5个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,1个N-豆蔻酰化位点,3个EF手性钙结合域及1个N-糖基化位点。将TNNC1基因在大肠杆菌中表达发现TNNC1蛋白与氮端多聚组氨酸标签蛋白(His6)融合成大小为23.5kD左右的多肽,这与预期结果相一致。本研究结果为进一步深入探讨大熊猫和亚洲黑熊TNNC1基因及蛋白的结构、功能和进化关系提供资料。展开更多
Scleroderma is a connective tissue disease characterized by the fibrosisization of skin and internal organs.In this study,the genomic sequence and cDNA of Sjogren’s syndrome/scleroderma autoantigen 1(SSSCA1)gene of t...Scleroderma is a connective tissue disease characterized by the fibrosisization of skin and internal organs.In this study,the genomic sequence and cDNA of Sjogren’s syndrome/scleroderma autoantigen 1(SSSCA1)gene of the giant panda was cloned successfully using RT-PCR.The cDNA fragment cloned was 642 bp in length,and contained an open reading frame (ORF) of 600 bp encoding 199 amino acids.The genomic sequence was 1 262 bp,containing four exons and three introns. The deduced amino acid sequence showed that this protein was composed of 199 amino acids and its estimated molecular weight was 21.53841 kDa with a pI of 5.14. Three different patterns of functional sites were found:one protein kinase C phosphorylation site,five casein kinase Ⅱ phosphorylation sites,and three N-myristoylation sites. The SSSCA1 gene of the giant panda were highly homologous to those of some other mammals.展开更多
桑树与土壤的物质交换发生在根际土层,研究不同品种桑树根际土壤的细菌群落,对了解不同品种桑树的根系生理活动差异,确定有利于桑树生长发育的土壤细菌群落生态系统有重要意义。对采集的不同品种桑树根际土壤细菌的16S r DNA部分序列进...桑树与土壤的物质交换发生在根际土层,研究不同品种桑树根际土壤的细菌群落,对了解不同品种桑树的根系生理活动差异,确定有利于桑树生长发育的土壤细菌群落生态系统有重要意义。对采集的不同品种桑树根际土壤细菌的16S r DNA部分序列进行PCR,根据扩增产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)图谱计算Shannon-Weaver多样性指数(H)、丰富度(S)和均匀度(E),并结合土壤理化性质,对20个桑品种的桑树根际土壤细菌群落的多样性进行分析。在一定范围内,各桑品种的桑树根际土壤细菌群落多样性指数与含水率和速效钾含量呈负相关,而与p H值及碱解氮、速效磷、有机质和全氮含量呈正相关,说明不同品种桑树根系的生理活动影响到根际土壤的理化性质;不同品种桑树根际土壤中存在共有的细菌,根际土壤细菌16S r DNA扩增产物的DGGE图谱呈现13个优势条带,其中4个条带属于γ-变形菌纲,有4个条带属于拟杆菌门,占条带总数的57.14%,为桑树根际土壤中的优势菌群;20个桑品种的桑树根际土壤样品细菌群落的Shannon-Weaver指数,以实钴11-6最高,桐乡青最低,说明不同品种桑树的根际土壤细菌群落多样性存在差异。综上结果建议生产上选择适合桑品种的栽培土壤并改善土壤质量和施用高效微生物肥料,促进桑树根际土壤优势菌群的形成,从而促进桑树生长。展开更多
运用基因芯片技术分析松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因表达的影响及分子机制。结果表明,经松乳菇多糖600μg/m L处理48 h后,在人喉癌Hep-2细胞中发现相关肿瘤差异基因共68个,其中人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因下调倍数大于100...运用基因芯片技术分析松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因表达的影响及分子机制。结果表明,经松乳菇多糖600μg/m L处理48 h后,在人喉癌Hep-2细胞中发现相关肿瘤差异基因共68个,其中人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因下调倍数大于100倍的基因共8个,下调50~100倍的基因共14个,同时按基因转录水平将这些基因进行了分类。运用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析技术分析相关基因通路,结果显示松乳菇多糖主要抑制人喉癌Hep-2细胞中的MAPK信号转导通路和PI3K-AKT信号转导通路。在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2细胞的凋亡是多种基因共同作用的综合结果。用筛选出的基因进一步研究肿瘤凋亡的分子机制,对寻找潜在的抗肿瘤作用靶点具有重要生物学意义。展开更多
文摘Scleroderma is a connective tissue disease characterized by the fibrosisization of skin and internal organs.In this study,the genomic sequence and cDNA of Sjogren’s syndrome/scleroderma autoantigen 1(SSSCA1)gene of the giant panda was cloned successfully using RT-PCR.The cDNA fragment cloned was 642 bp in length,and contained an open reading frame (ORF) of 600 bp encoding 199 amino acids.The genomic sequence was 1 262 bp,containing four exons and three introns. The deduced amino acid sequence showed that this protein was composed of 199 amino acids and its estimated molecular weight was 21.53841 kDa with a pI of 5.14. Three different patterns of functional sites were found:one protein kinase C phosphorylation site,five casein kinase Ⅱ phosphorylation sites,and three N-myristoylation sites. The SSSCA1 gene of the giant panda were highly homologous to those of some other mammals.
文摘桑树与土壤的物质交换发生在根际土层,研究不同品种桑树根际土壤的细菌群落,对了解不同品种桑树的根系生理活动差异,确定有利于桑树生长发育的土壤细菌群落生态系统有重要意义。对采集的不同品种桑树根际土壤细菌的16S r DNA部分序列进行PCR,根据扩增产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)图谱计算Shannon-Weaver多样性指数(H)、丰富度(S)和均匀度(E),并结合土壤理化性质,对20个桑品种的桑树根际土壤细菌群落的多样性进行分析。在一定范围内,各桑品种的桑树根际土壤细菌群落多样性指数与含水率和速效钾含量呈负相关,而与p H值及碱解氮、速效磷、有机质和全氮含量呈正相关,说明不同品种桑树根系的生理活动影响到根际土壤的理化性质;不同品种桑树根际土壤中存在共有的细菌,根际土壤细菌16S r DNA扩增产物的DGGE图谱呈现13个优势条带,其中4个条带属于γ-变形菌纲,有4个条带属于拟杆菌门,占条带总数的57.14%,为桑树根际土壤中的优势菌群;20个桑品种的桑树根际土壤样品细菌群落的Shannon-Weaver指数,以实钴11-6最高,桐乡青最低,说明不同品种桑树的根际土壤细菌群落多样性存在差异。综上结果建议生产上选择适合桑品种的栽培土壤并改善土壤质量和施用高效微生物肥料,促进桑树根际土壤优势菌群的形成,从而促进桑树生长。
文摘运用基因芯片技术分析松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因表达的影响及分子机制。结果表明,经松乳菇多糖600μg/m L处理48 h后,在人喉癌Hep-2细胞中发现相关肿瘤差异基因共68个,其中人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因下调倍数大于100倍的基因共8个,下调50~100倍的基因共14个,同时按基因转录水平将这些基因进行了分类。运用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析技术分析相关基因通路,结果显示松乳菇多糖主要抑制人喉癌Hep-2细胞中的MAPK信号转导通路和PI3K-AKT信号转导通路。在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2细胞的凋亡是多种基因共同作用的综合结果。用筛选出的基因进一步研究肿瘤凋亡的分子机制,对寻找潜在的抗肿瘤作用靶点具有重要生物学意义。
