东方粘虫中肠V-ATP酶A亚基突变体TSCA的原核表达及复性纯化

根据得到的东方粘虫[Mythimna separate(Walker)]中肠V-ATPase A亚基(VHA-A)基因(VATPA),预测其三维结构,构建定点突变并复性。利用Swiss-Model在线预测VHA-A三维结构,确定突变位点,通过重折叠PCR(Overlap-PCR)技术构建突变基因并将其整合到pET-22b(+)载体上,得到重组质粒pET-22b(+)-TSCA,转入大肠杆菌BL21中表达,最后通过亲和层析纯化包涵体蛋白质并进行透析复性。结果表明,成功构建突变基因和融合表达载体,融合蛋白质以包涵体形式表达,并得到大量纯化的可溶性蛋白。

人降钙素受体胞外域的复性及新的体外活性测定方法

人降钙素受体胞外域是降钙素受体的药物靶点区域.本研究截取降钙素受体的N端胞外域22-140氨基酸残基区域,依据大肠杆菌偏爱密码子优化并人工合成基因,克隆至pET22b（＋）载体,构建的表达质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中表达.表达产物经复性、纯化后进行受体-配体结合实验.结果表明,目的蛋白质绝大部分以包涵体形式存在.本研究探索出了一套高效的复性方法,经SDS-PAGE鉴定,纯化蛋白质为单一条带,质谱测定蛋白质分子量与理论分子量一致.复性后的蛋白质采用新的体外活性测定方法证实,有较强的结合鲑鱼降钙素（salmon calcitonin,sCT）的能力.这为其进一步的结构与功能研究奠定了基础.

苦皮藤素V对东方粘虫中肠V-ATP酶AB亚基复合物水解ATP活性的抑制作用

苦皮藤素V是一种对昆虫具有毒杀活性的化合物,从植物苦皮藤(Celastrus angulatus Max)中分离出来。目前,已发现苦皮藤素V可与粘虫中肠液泡型ATP酶(V-ATPase)的H、B和a亚基结合,但是其具体作用机理还尚不清楚。本研究将大肠杆菌(Escherichia coli)中表达得到的东方粘虫中肠V-ATPase A亚基突变体TSCA和V-ATPase B亚基包涵体洗涤、溶解后进行复性,获得可溶性AB亚基复合物后采用亲和层析纯化。将纯化好的AB亚基复合物测定H^+K^+-ATPase活性,证明其有ATP水解活性。随后,测定苦皮藤素V对复合物ATPase的抑制活性,发现加入苦皮藤素后,复合物ATPase活性降低。因此,其可能是通过抑制了AB亚基复合物的ATPase活性,从而产生了杀虫效果,证明AB亚基复合物为苦皮藤素V的潜在靶点之一。这为了解苦皮藤素与VATPase相互作用机制打下了基础,也为进一步开发新型杀虫药物奠定了基础。

中医护理对体外受精-胚胎移植患者心理状况和临床结局的影响

目的:观察中医护理对体外受精-胚胎移植患者心理状况和临床结局的影响。方法:选取接受体外受精-胚胎移植手术治疗的50例患者,分为观察组和对照组,每组各25例。对照组患者采用常规护理措施;观察组患者给予中医护理干预措施。对比分析两组患者的心理状态及临床结局。结果:观察组患者的心理状态评分(131.89±23.74),低于对照组的(157.37±22.19),差异有统计学意义(t=3.9204,P=0.00014);观察组患者的胚胎种植成功率(64.00%)及临床妊娠成功率(56.00%),高于对照组的(32.00%)及(24.00%),差异有统计意义(P<0.05)。结论:对接受体外受精-胚胎移植术患者采用中医护理效果优于常规护理。

降钙素受体药物靶点区域的表达、复性及鉴定

本实验截取了人降钙素受体N端胞外结构域涉及药物靶点的第20～160位氨基酸残基区域对应的编码序列,根据大肠杆菌偏爱密码子优化后,人工合成相应的基因,运用分子克隆技术将所合成的基因克隆到pET22b（＋）载体,重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中原核表达.结果表明,Nt-CTR蛋白质以包涵体形式表达,所得包涵体蛋白质通过高效的复性方法,最终得到了大量纯化的可溶性Nt-CTR蛋白质.融合蛋白质通过Western-Blot鉴定表达正确.本研究为CTR的结构研究和CTR相关疾病的药物筛选提供了基础.