2021年宁夏重点行业工作场所职业病危害因素检测现况分析

目的了解2021年宁夏重点行业工作场所职业病危害因素接触与检测现况。方法对2021年宁夏回族自治区内正常生产经营的重点行业进行调查和现场检测,采用统一编制的《工作场所职业病危害因素监测项目调查表》收集用人单位的劳动者接触职业病危害因素情况,现场检测严格按照国家标准进行采样,采样结果与国家现行标准进行比较,判定是否超标。结果宁夏重点行业用人单位主要分布在银川市、石嘴山市和吴忠市,占比分别为25.08%、28.76%和25.75%;企业规模以小型企业为主,占比为51.17%;2021年宁夏重点行业劳动者接触职业病危害因素人数最多的地区为银川市,为40576人;接触人数最多的行业为煤炭开采和洗选业,为27331人;接触人数最多的企业规模为大型企业,为44436人;粉尘与物理因素的超标率较高,岗位超标率分别16.43%和13.18%,场所超标率分别为12.20%和13.52%。结论宁夏回族自治区小微企业数量较多但接触危害因素劳动者主要分布在大型企业,今后职业病危害因素的治理工作应主要放在银川市、煤炭开采和洗选业以及大型企业。职业病危害因素则应以粉尘的治理为主。

lncRNA MRAK050699对二氧化硅粉尘诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上皮-间质转换的影响

[背景]矽肺发病机制未明且没有特效治疗方法,长链非编码RNA(lncRNA)在矽肺纤维化进程中或可发挥作用。[目的]探讨lncRNA MRAK050699对SiO_(2)粉尘诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN细胞)发生上皮-间质转换(EMT)过程的影响。[方法]建立大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383细胞)与RLE-6TN细胞共培养体外矽肺模型,分为正常组、模型组、敲减对照组、敲减组。采用CCK8法检测NR8383细胞在10、20、40、80、160、320μg·cm^(-2)SiO_(2)粉尘刺激下的活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测在0、20、40、80μg·cm^(-2)粉尘刺激下的转化生长因子-β(TGF-β)含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测MRAK050699敲减效率。取四个6孔板,在前两个6孔板中正常培养RLE-6TN细胞24 h,后两个6孔板分别培养转染阴性对照病毒的RLE-6TN细胞24 h,和转染敲减MRAK050699病毒的RLE-6TN细胞24 h;同时在另四个6孔板中,插入Transwell小室,正常培养NR8383细胞24 h。NR8383细胞与RLE-6TN细胞铺板比例为1∶2,之后将Transwell小室连同NR8383细胞一同转入RLE-6TN细胞的6孔板中,向后三组共培养体系的Transwell小室中加入40μg·cm^(-2)SiO_(2)粉尘悬液150μL后,四组同时继续培养24 h,取Transwell小室下室的RLE-6TN细胞置于显微镜下观察,使用Western blotting及RT-qPCR法检测E-cadherin、N-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平。[结果]CCK8、ELISA法结果显示SiO_(2)剂量在40μg·cm^(-2)时,细胞活力下降较为明显且可保证后续实验的有效进行,上清液中TGF-β表达水平是对照组的2.94倍,可用于后续实验;敲减组MRAK050699的表达水平相比敲减对照组明显下调,敲减效率约为50%(P<0.05)。显微镜下观察共培养后RLE-6TN细胞形态,正常组细胞呈现典型的上皮样特征,为多边形、卵圆形且紧密连接。模型组细胞呈现间质样细胞形态,表现为长梭形、纺锤形,并且细胞间隙变宽。敲减对照组与模型组类似,呈现间质细胞形态。而敲减组的细胞基本处于紧密连接状态。各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=28.11、35.72、15.26,P<0.05;F=328.78、51.84、13.39,P<0.05)。与正常组相比,模型组E-cadherin mRNA和蛋白表达水平分别下降32%、67%,N-cadherin mRNA和蛋白表达水平分别上升至2.28、1.64倍,α-SMA mRNA和蛋白表达水平分别上升至2.74、1.66倍(均P<0.05);敲减组相较于敲减对照组,E-cadherin mRNA和蛋白表达水平上升,而N-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05);模型组与敲减对照组的各基因mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]MRAK050699在矽肺纤维化中发挥着重要的作用,可能参与了SiO_(2)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT过程。

LncRNA MRAK052509对矽尘诱导RLE-6TN中TGF-β信号通路与纤维化影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MRAK052509对矽尘诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞株RLE-6TN中转化生长因子-β(TGF-β)/SMAD信号通路及下游相应纤维化因子表达的影响。方法(1)建立大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383/RLE-6TN细胞共培养体系,随机分为对照组和模型组,模型组予剂量为400 mg/m^(2)的游离二氧化硅刺激,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测2组RLE-6TN中lncRNA MRAK052509相对表达水平。(2)将RLE-6TN随机分为对照组、阴性对照组和敲减组,后2组分别以阴性对照病毒和lncRNA MRAK052509敲减病毒转染,以qPCR法检测转染效率。(3)将NR8383/RLE-6TN细胞共培养体系随机分为4组,对照组和矽肺模型组下室均种入RLE-6TN细胞,阴性对照组和敲减组下室分别种入稳定转染阴性对照病毒和lncRNA MRAK052509敲减病毒的RLE-6TN细胞。除对照组外,其余3组向Transwell上室加入剂量为400 mg/m^(2)的游离二氧化硅刺激24 h后,收集RLE-6TN。采用qPCR法检测RLE-6TN中TGF-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)、Smad3和纤维黏连蛋白(FN)的mRNA相对表达水平,以蛋白免疫印迹法检测RLE-6TN中TGF-βRⅠ、SMAD3、磷酸化SMAD3(p-SMAD3)、FN、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和Ⅲ型胶原(COLⅢ)蛋白相对表达水平。结果(1)模型组RLE-6TN细胞的lncRNA MRAK052509 mRNA表达水平较对照组升高(P<0.01)。(2)敲减组RLE-6TN中lncRNA MRAK052509 mRNA相对表达水平分别低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05)。(3)与对照组比较,模型组RLE-6TN中TGF-βRⅠ、Smad3、FN的mRNA相对表达水平和TGF-βRⅠ、SMAD3、p-SMAD3、FN、COLⅠ、COLⅢ蛋白相对表达水平均升高(P值均<0.05);与矽肺模型组和阴性对照组比较,敲减组RLE-6TN中上述指标相对表达水平均下降(P值均<0.05)。结论敲减LncRNA MRAK052509可通过抑制TGF-βRⅠ的表达,阻断TGF-β/SMAD信号通路,延缓SiO2刺激所致RLE-6TN间质转化,下调FN、COLⅠ和COLⅢ等胶原纤维的表达,影响肺纤维化的进展。