农杆菌介导的“野大1号”高效遗传转化体系建立

栽培大豆在驯化过程中丢失了大量的优异基因,我国野生大豆种质资源丰富,蕴含着许多高蛋白、抗逆方面的基因。大豆新品种“野大1号”作为一份重要的种质资源,保存着宝贵的遗传基因和许多优良的性状,具有较高的营养价值,其中异黄酮的含量高达千分之二,在农业育种上具有重要的价值。本研究以“野大1号”为材料,通过设计不同的消毒方式和时间以及不同的芽诱导6-BA浓度配比,通过GUS染色方法比较摇床和针管真空渗漏两种侵染方式在不同侵染时间下对基因转化效率的影响,分析侵染后外植体最佳抗生素筛选浓度,建立“野大1号”大豆品种的高效遗传转化体系。结果表明:“野大1号”种子消毒最佳方法为75%酒精消毒45 s后再使用15%过氧化氢消毒30 min;最佳侵染方法为针管真空渗漏浸染30 min;最佳不定芽诱导培养基为MS+2 mg·L^(-1)6-BA;抗性筛选标记潮霉素的最适浓度为60 mg·L^(-1)。通过该遗传转化体系成功移栽了14株植株,其中8株为转基因阳性植株。该高效再生及遗传转化体系的建立为大豆的新品种培育奠定坚实基础。

阳离子化魔芋葡甘聚糖插层蒙脱石的制备与表征

采用季铵化魔芋葡甘聚糖(CMKGM)对钠基蒙脱石(MMT)进行改性制备有机蒙脱石(CMKGM-MMT),并对改性后的蒙脱石进行红外光谱(FT-IR)和X射线衍射(XRD)等分析表征。结果表明,当制备季铵化魔芋葡甘聚糖改性蒙脱石时,反应条件pH值为4.6、反应温度为60℃,且CMKGM的用量是MMT的1.0倍阳离子交换容量时(CMKGM和MMT的质量比为0.9),形成的插层型有机蒙脱石的有机化程度最高,并考察了改性蒙脱石的体外细胞毒性及其对牛血清白蛋白(BSA)的载药性能。

GhCDPK4基因的克隆和功能分析

为了研究棉花中GhCDPK4基因在响应非生物胁迫中所起的作用,通过PCR的方法克隆GhCDPK4基因,利用基因重组技术,构建植物过表达载体,采用农杆菌介导的叶盘法转化模式植物烟草,分析干旱和盐胁迫处理对转基因烟草表型和生理生化指标的影响。本研究成功克隆了属于棉花CDPK家族的基因GhCDPK4,构建了植物过表达载体pCAMBIA2300-GhCDPK4。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测发现转基因烟草中GhCDPK4基因高水平表达,并且转基因烟草相比于野生型烟草表现出较强的耐旱和耐盐性,其中SOD、POD和CAT活性显著升高,而相对电导率和MDA含量降低。研究结果表明GhCDPK4基因可正向参与应答干旱和盐胁迫。