烯丙孕素片的制备及质量研究

对烯丙孕素片的制备及质量进行研究。以药物的崩解时限和溶出度为主要指标,应用正交设计法对其处方进行优化,制备一种延缓崩解开始时间的烯丙孕素片,以适应不同猪场和环境的湿法饲喂需求。考察烯丙孕素片的外观性状、硬度、片重差异、脆碎度、崩解时限、溶出度、含量测定等,重点对烯丙孕素片的溶出度方法进行了研究。结果表明,烯丙孕素片外观性状、硬度、片重差异、脆碎度、崩解时限、溶出度、含量测定等结果符合要求,含量测定为标示量的90.0%~105.0%。崩解时限和溶出度结果表明,烯丙孕素片在遇水后7~15 min全部崩解完毕,溶出度大于90%。研究所得烯丙孕素片的崩解时限延长了5~10 min,且溶出度和含量均达标。由此确定研制的烯丙孕素片处方工艺可行,质量可控,符合拟定的质量标准。

类卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素对后备母猪诱情效果及繁殖性能的影响

后备母猪初情期推迟,导致繁殖性能和利用率低。试验通过促性腺激素诱导长大二元杂种后备母猪发情,以期提高其繁殖性能和利用率。以类FSH(卵泡刺激素)和HCG(人绒毛膜促性腺激素)处理6.5月龄后备母猪,激素诱导组1周内75.58%的后备母猪出现发情,第2次规律发情比例为67.44%,而空白对照组分别为6.80%和44.22%;激素诱导组首次配种日龄和配种时的情期数分别为259天和2.72次,与空白对照组的266.5天和1.84次,差异达显著和极显著水平;激素诱导组利用率比空白对照组提高12个百分点;激素诱导组母猪第1胎断奶至配种的时间间隔为6.31天,显著短于空白对照组9.47天。后备母猪当胎的分娩率、窝均总产仔数、窝均合格仔数和第1胎断奶后发情配种率等指标,激素诱导组和空白对照组差异均不显著。可见,激素诱导后备母猪发情可显著使母猪的初情期提前,繁殖性能和利用率提高。

新型激素制剂FG600对不发情母猪诱情效果及繁殖性能的影响

以PG600为对照,应用新型激素制剂FG600(细胞工程产品类FSH+HCG)对10月龄以上不发情后备母猪、断奶1周后及断奶2周后不发情母猪进行诱情配种试验,以探索提高母猪繁殖性能的最佳使用剂量。试验结果表明,低剂量FG600(100 IU类FSH+400 IU HCG)能够提高超龄不发情后备母猪、断奶1周后及断奶2周后不发情母猪的当胎发情率和繁殖性能,与PG600对照组差异不显著,高剂量FG600(200 IU类FSH+400 IU HCG)的效果则稍逊于PG600。因此,低剂量FG600应为诱导母猪发情的最佳使用剂量。经FG600处理的断奶2周后不发情母猪在下一胎时表现正常的自然发情率、分娩率、窝产仔数及断奶-配种间隔等,并没有出现激素依赖现象。FG600在养猪生产中应用是可行的。

治疗急性脑梗死新药——凯力康

凯力康(注射用尤瑞克林),是由广东天普生化医药股份有限公司研制的国家一类新药。它 通过催化激肽原产生胰激肽、之后在激肽酶1的作用下产生一个九肽调节物,从而靶向性的作用于 缺血/损伤特异性诱导产生的B1受体,引起血管平滑肌舒张等效应。药效学研究显示尤瑞克林能选 择性扩张脑细小动脉,改善缺血脑组织血供和氧供,同时还能促进缺血区新生血管的生成。Ⅱ期和 Ⅲ期临床研究结果显示,凯力康用于急性脑梗死的治疗是安全有效的。

新型激素制剂FG600对后备母猪同期发情及繁殖性能的影响

以正常发情和PG600为对照，应用新型激素制剂FG600（细胞工程产品类FSH＋HCG）对8～9月龄后备母猪进行同期诱情试验，以进一步确定FG600最佳使用剂量和对后备母猪繁殖性能的影响。试验结果表明低剂量FG600（100 IU 类FSH＋400 IU HCG）能有效诱导后备母猪同期发情，与空白对照组差异极显著（P＜0.01），与PG600组差异不显著（P＞0.05），高剂量FG600（200 IU 类FSH＋400 IU HCG）的效果则略低于低剂量FG600和PG600，但差异不显著（P＞0.05）。虽然高剂量FG600在产仔性能方面显著高于PG600（P＜0.05），与低剂量FG600的差异不显著（P＞0.05），但其情期受胎率和总受胎率却显著低于低剂量FG600（P＜0.05），因此可以进一步确定低剂量FG600为最佳使用剂量。此外，经FG600处理的后备母猪表现正常的分娩率、产仔数及断奶-配种间隔等，没有出现激素依赖现象。

一种新型长效重组绒毛膜促性腺激素的表达、活性和药代动力学研究

目的 构建含有Fc片段的绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）新型长效重组hCG-Fc融合蛋白,可显著延长其在血液中的半衰期,有利于提高患者用药依从性.方法 首次将Fc DNA片段有序连接到hCG基因3＇端,构建hCG-Fc表达载体并将其稳定表达在哺乳动物细胞,通过无血清悬浮细胞培养和基于亲和层析的蛋白纯化,制备了新型重组hCG-Fc融合蛋白.检测其分子量、ELISA免疫活性和体内生物活性,并测定其在大鼠体内血循环半衰期.结果 重组融合蛋白分子量与理论推断值相当,ELISA活性为2 965 IU/mg,体内生物活性为2 288 IU/mg,消除半衰期为174 h.结论 hCG-Fc融合蛋白构建表达成功,且具有显著的体内外活性,药代动力学分析显示hCG-Fc重组融合蛋白半衰期是重组hCG的近6倍.这种新型长效融合蛋白在临床上可大大减少注射次数,提高患者用药依从性,具有显著的社会和经济效益.

大肠杆菌D-木糖异构酶基因的序列分析

大肠杆菌D-木糖异构酶基因由含D-木糖操纵子的质粒pXO100被克隆到pWR13质粒上。以Bal31核酸酶逐步缩短DNA片段的方法,获得了若干个含有不同大小DNA片段的亚克隆,并在质粒上直接测定序列,从中获得了1.6kbDNA片段的核苷酸全序列。其中包括长度为1320bp编码440个氨基酸的蛋白质。此外,在其5'端尚有209个核苷酸和3'端82个核苷酸,它们分别含有核糖体结合位点SD序列和D-木糖异构酶基因转录终止区。

信息技术助力高中语文研究性学习的实践初探

在科学技术迅猛发展的当下,信息技术对教育发展的引领作用已初见成效。语文作为一门综合性、实践性课程,应着力培养学生的语文实践能力。本文从语文研究性学习的困惑、解决途径、融合课例三个层面初步探讨信息技术与语文研究性学习的有效融合,并以高中语文人教版教材"阅读与鉴赏""梳理与探究"设计的研究性学习活动为例,探寻适应不同研究内容的新媒体技术,探索信息技术与研究性学习有效融合的基本模式,为提升语文学科核心素养提供有益的范式。

NGAL基因在原发性肝癌中的表达及其功能分析

NGAL基因是Lipocalin家族成员,与MMP9的功能密切相关,在乳腺癌、食管癌等多种恶性肿瘤中异常表达,为了研究其在原发性肝癌中的表达及功能,通过荧光实时定量PCR法检测了NGAL基因在23对肝癌组织标本中的表达情况.结果显示:在12例肝癌组织中NGAL显著上调表达,占总样本数的52.17%(P<0.05),提示了NGAL基因的表达水平可能与肝癌的发生发展过程有关.通过构建绿色荧光蛋白融合表达载体,用脂质体法转化肝癌细胞株SMMC-7721进行瞬时表达.细胞周期实验显示NGAL的表达可促使SMCC-7721细胞从G1期向S期转化,转化NGAL的细胞中S期细胞显著增多(P<0.05),提示其可能具有促进肝癌细胞生长的功能;细胞凋亡实验发现NGAL的表达可显著抑制低血清诱导下的细胞凋亡率(P<0.05),提示其可能参与抑制肝癌细胞的凋亡.

hK-Fc融合蛋白的改良、表达及其生物活性的分析

为了延长人激肽释放酶(hK)的血清半衰期,提高分泌蛋白的产率,制备了重组激肽释放酶-IgG1 Fc融合蛋白(hK'-Fc)。采用PCR扩增hK基因和IgG1的Fc序列,用鼠源信号肽序列替换hK基因原有的信号肽序列,构建改良型融合蛋白hK'-Fc以及天然型融合蛋白hK-Fc的表达载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞,筛选稳定分泌融合蛋白的细胞株,通过Western blotting鉴定信号肽改造效果,利用Protein A+G亲合层析柱纯化融合蛋白,酶学实验检测融合蛋白的体外活性。结果表明:成功构建了pcDNA-hK'-Fc以及pcDNA-hK-Fc重组表达载体;获得了稳定表达融合蛋白的细胞株,产量达11mg/L以上;信号肽改造后融合蛋白的分泌效率提高约5～10倍;融合蛋白能水解其特异性的底物S-2266,具有生物学活性。本研究为进一步探讨融合蛋白的体内半衰期打下了坚实基础,也为研制治疗脑梗塞疗效更好的第二代hK蛋白和其他药用蛋白的改良提供新的线索。

论税务筹划在企业会计处理中的应用

税务筹划有利于减轻企业的税收负担、资金压力,提高企业的纳税意识和规避风险的能力,如处理不当则会使企业的税负增加。在企业的会计处理中税务筹划应遵循什么原则,如何科学有效地解决其中蕴藏的问题,使其在企业中得到良好应用,提高企业的整体管理水平,是本文研究的主要内容。

新型长效重组促卵泡素的纯化和性质及药代动力学研究

促卵泡素(Follicle-stimulating hormone,FSH)用于治疗男女不孕不育症,由于FSH的半衰期较短,需要频繁注射给药,因此制备长效FSH制剂一直是该类药物的研发方向。首次将来自绒促性素(human chorionic gonadotropin,HCG)中的羧基端肽(carboxy-terminal peptide,CTP)和人免疫球蛋白G2(immunoglobulin G2,IgG2)Fc片段变体(vFc)与单链FSH有序连接,通过基因工程和哺乳动物细胞培养技术实现了其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达,然后利用Protein A柱层析手段进行纯化,制备了新型重组FSH-CTP-vFc融合蛋白,同时分析了不同细胞培养时间表达的重组融合蛋白的理化性质和体内外活性。动物试验结果表明,纯化的FSH-CTP-vFc融合蛋白具有显著的体内生物活性,药代动力学分析显示该重组融合蛋白的半衰期是重组FSH的近10倍。这种新型长效重组FSH-CTP-vFc融合蛋白在临床上可大大减少注射次数和患者痛苦,提高患者用药依从性。

hK1-L-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达及其活性研究

为进一步改造重组人激肽释放酶1(hK1),以期提高其生物活性,制备了通过柔性接头相连接的重组人激肽释放酶1-L-IgG1 Fc融合蛋白(hK1-L-Fc)。采用重叠延伸PCR技术构建hK1-L-Fc融合基因,克隆至表达载体pcDNA3.1,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-S)中表达。利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、Western blotting、飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、HPLC检测表达产物,底物法检测融合蛋白的体外活性。结果显示:成功构建pcDNA3.1-hK1-L-Fc重组表达载体;获得稳定表达融合蛋白的细胞株;无血清悬浮批式培养的表达量在0.7 mg/L以上;纯化的蛋白其纯度在95%以上,分子量约60 kDa;活性检测显示其比活性在9.2 U/mg以上,较hK1-Fc蛋白提高了18%以上。