仿刺参腐皮综合征病原灿烂弧菌RPA-Cas13a检测方法的建立

为预防和控制灿烂弧菌引发的仿刺参腐皮综合征,促进仿刺参养殖业的健康可持续发展,利用LwCas13a中特异性CRISPR RNA(crRNA)与靶RNA结合后可激活Cas13a蛋白对外源RNA分子附属切割活性的特征,结合重组酶介导的聚合酶扩增技术(RPA),建立1种针对灿烂弧菌gyrB基因的快速、灵敏、特异的定量检测方法——RPA-Cas13a。RPA-Cas13a可实现在37℃恒温下、60 min内对灿烂弧菌的快速实时检测。灵敏度测试结果显示,RPA-Cas13a检测限为550拷贝/μL(gyrB),与荧光定量PCR的检测灵敏度水平一致;特异性测试结果表明,RPA-Cas13a对创伤弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌等其他弧菌及产黑假交替单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌等常见水产动物病原菌均无交叉反应,特异性较强。RPA-Cas13a方法对仿刺参体表黏液(32份)、养殖池塘水体(15份)和表层沉积物(10份)等57份环境样本的阳性检出率为8.77%,与传统荧光定量PCR方法的检出一致性高(Kappa=1.00),无统计学差异(P>0.05)。试验结果表明,灿烂弧菌的RPA-Cas13a新型定量检测方法,快速简便、灵敏特异,可为预防和控制仿刺参腐皮综合征的发生提供有力的分子工具。

胶州湾海洋链霉菌的初步鉴定及抑菌活性的研究

对从胶州湾沿海泥样和水样中分离、纯化的297株海洋链霉菌进行了初步的生理生化鉴定,并采用牛津杯法检测了对大肠杆菌(Escherichia coli)、绿脓杆菌(Pseudomonas areugi-nosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、八叠球菌(Sarcinasp.)、隐球菌(Crypto-coccal meningitis)、白色念球菌(Candida albicans)、毛霉(Mucor miehei)和链霉菌Tu57(Streptomyces vividochromosenes)8株受试菌的抑制活性。结果表明,约有42.1%的菌株可抑制至少一种受试菌。结合16S rRNA鉴定,提示了部分活性菌株的分类地位,其中M165属于蓝色类群,M245属于白孢类群,M189属于青色类群,M239独立构成一个分支,有可能是新种。结果提示了胶州湾海洋链霉菌在抑菌活性物质研究开发方面的潜力。

胶州湾产蓝色素海洋链霉菌的初步研究

在胶州湾沿海采取泥样和水样，从中分离了300余株海洋链霉菌（marine Streptomyces），并对其生理生化性质作了初步研究，建立了胶州湾海洋链霉菌菌种库。在该菌种库中，约有3％的菌株可产生天然蓝色素。其中一株海洋链霉菌（marine Streptomyces sp．）M259能够高产天然蓝色素。M259对绿脓杆菌（Pseudomonas areuginosa）、隐球菌（Crytococcal meningitis）有较强的抑菌活性。对其生理生化性质进行了鉴定，结果表明它可以利用可溶性淀粉、甘油、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、D-半乳糖、果糖、阿拉伯糖、肌醇、木糖、D-甘露糖、核糖等碳源；能利用大部分氮源，尤其对酵母粉的利用很显著；最适生长pH为7．0～7．4；最适培养温度为28～30℃。结果提示它属于蓝色类群，并与天蓝色链霉菌（Streptomyces cyanogenus）和产蓝链霉菌（Streptomyces ceolicolor）亲缘关系最为密切。此外还优化了M259的发酵培养基和培养条件，使得蓝色素在摇瓶条件下，OD590达到7．74。通过对M259所产蓝色素性质的研究，发现此色素水溶性较强，耐热性较好，在酸性条件下呈红色，在碱性条件下呈蓝色。此外，毒性实验的结果表明所提纯的蓝色素没有毒性，为进一步开发和利用该色素提供了可能。

玉米鸡肉丸生产工艺关键因素的研究

将玉米添加到鸡肉丸中,使产品的弹性、口感以及营养都有所提高。通过单因素和正交实验对玉米鸡肉丸的配方进行了研究,确定了其最佳配方为:鸡大胸肉100.0g、猪肥膘65.0g、玉米45.0g、淀粉16.0g、丸子改良剂(复合磷酸盐)4.0g、食盐8.0g,同时确定玉米鸡肉丸的最佳斩拌时间为20min。

黄豆豉和黑豆豉在发酵过程中的抗氧化性

通过米曲霉发酵黄豆和黑豆,测定豆豉的抗氧化能力。选用米曲霉发酵产生黄豆豉和黑豆豉,在相同条件下以还原力、DPPH自由基清除率、羟自由基清除率和总酚含量为指标,研究了黄豆豉和黑豆豉抗氧化性的变化及相关性分析。结果表明:黑豆豉比黄豆豉抗氧化性高。黄豆豉和黑豆豉在发酵第24d时还原能力和总酚含量达到最高值,总酚含量分别为0.024mg/mL,0.026mg/mL。在发酵第27d时黑豆豉和黄豆豉对(·OH)自由基和DPPH自由基的清除率达到最大,对(·OH)自由基清除率分别为40.12%、36.07%,对DPPH自由基的清除率分别为59.78%和64.86%。相关性分析结果表明黄豆豉还原力和羟自由基清除率与总酚含量之间相关性很高,而黑豆豉还原力和DPPH自由基清除率与总酚含量之间相关性都很高。

水产病原微生物学教学中的几点体会

水产病原微生物学是一门实践性很强且与水产养殖密切相关的基础学科,具有理论性强的特点,只有优化教学内容,创建教学情境,激发学习动机等方式方法,最终达到学习目的。

青岛地区水产养殖学专业教学实践改革初探

实践教学是巩固理论知识,加深对理论认识的有效途径,是培养具有创新意识的高素质大学生的重要环节,是理论联系实际,培养学生掌握科学方法和提高动手能力的重要平台。在总结青岛地区水产养殖专业实践教学的基础上,探索水产养殖专业的实践教学体系改革的几条有效途径,提出了对于实践教学改革的几点建议。

中草药对弧菌病治疗效果的初步研究

弧菌病是水产养殖动物,特别是水产鱼类的常见疾病,严重影响了水产养殖业的发展。目前,控制水产动物弧菌病的主要方式是应用抗生素,然而抗生素能够产生药物残留,其耐药性对生态环境造成污染并能影响食用者的身体健康,已逐步表现出了阻碍水产养殖业可持续发展的作用。中草药因其不易产生耐药性、天然环保、无残留等优点,日益被作为＂绿色药品＂广泛应用于水产动物养殖。

胶州湾海洋放线菌的分布及其抗微生物活性

目的研究青岛胶州湾海洋放线菌的资源与分布,考察其抗菌活性和应用潜力。方法梯度稀释与划线法分离菌株,并利用牛津杯法和纸片法测定其抗菌活性。结果从胶州湾沿岸分离海洋放线菌516株,两种方法确定的具有抗菌活性的菌株比例分别为22.3%和50.0%。结论青岛胶州湾河流入海口可能是海洋放线菌资源富集的区域;纸片法用于胶州湾海洋放线菌抗菌活性筛选效果较好;筛选结果显示胶州湾海洋放线菌具有良好的开发应用潜力。

中国蛤蜊消化系统的组织学与组织化学研究

为探讨中国蛤蜊的消化生理,用组织学和组织化学方法对其消化系统进行了研究.消化道粘膜上皮由纤毛柱状细胞和数量不等的粘液细胞组成.胃和肠纤毛柱状细胞呈现蛋白酶、脂酶、非特异性酯酶和碱性磷酸酶活性.消化腺腺上皮由嗜碱性细胞和消化细胞组成.嗜碱性细胞含丰富的RNA和蛋白质;消化细胞呈现蛋白酶、脂酶、非特异性酯酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性,表明该细胞能进行细胞内消化.

海洋链霉菌M259高产蓝色素理化性质研究

在青岛胶州湾沿海采集样品,对样品进行分离、纯化后获得300株海洋链霉菌,从中检测到一株高产蓝色素的海洋链霉菌M259。本文主要探讨该菌产生的蓝色素的理化性质,研究发现该蓝色素对八株受试菌无抑菌活性,在590nm处有最大吸收峰,水溶性好,光热稳定性强,而且具有耐糖、耐还原性,酸性条件下为红色,碱性条件下为蓝色,对大部分金属离子和食品添加剂稳定,经急性毒理实验证实为实际无毒物质。

缢蛏鳃的光镜与扫描电镜研究

用光镜和扫描电镜观察了缢蛏鳃的组织学和表面结构。鳃丝有主鳃丝和普通鳃丝之分，鳃丝表面有前纤毛和侧纤毛，分别与食物的运送和呼吸水流的产生有关。普通鳃丝的扁平细胞为呼吸上皮。相邻鳃丝通过含有血管的丝间连接连系，相邻的鳃小瓣通过隔膜状的瓣间连接连系。两根主鳃丝之间的12～22根鳃丝由簇内连接连接成簇。

胶州湾放线菌的分离及其抗病原微生物的活性检测(英文)

采用涂布法,从胶州湾海泥样品中分离到224株放线菌菌株,并且从海水样品中分离到32株放线菌菌株。根据形态学特性,菌株被分成了7个组。同时利用杯碟法测定了它们的抗菌活性,其中约7%对金黄色葡萄球菌有活性,11%对八叠球菌有效,10%对大肠杆菌有效,11%对绿脓杆菌有效,2%对白色念珠菌有效,5%对隐球菌有效,6%对绿色产色链霉菌有效和6%对米赫毛霉有效。分离到的22%放线菌对所测定的病原微生物有抗性作用。我们的结果表明胶州湾放线菌能够产生对病原微生物有抗性作用的不同代谢物,这些代谢物可以作为筛选新颖天然产物的独特和丰富的资源。

水生生物免疫学教学改革初探

《水生生物免疫学》作为一门水产养殖学的基础课程,内容抽象,逻辑性强,教学难度大。为了适应学校水产养殖学科建设的需要,提高课堂教学质量,作者在教材的指定、授课内容的组织、教学方式的探索等方面交流了一些改革经验及体会,旨在提高学生的学习兴趣和教学质量,为教学研究提供借鉴和参考。

鸡γ-干扰素基因重组质粒在工程菌株中的稳定性研究

本文通过传代的方法研究了鸡γ-干扰素基因的重组质粒pET-ChIFN-γ在工程菌CH1中的遗传稳定性。结果表明重组质粒在没有筛选压力下存在质粒不稳定性,100代时质粒稳定性只有69%。适当的筛选压力可以显著降低质粒的遗传不稳定性,100代时稳定性提高到95%。各代重组菌株在生长性能、质粒酶切图谱、蛋白表达等方面均保持一致,未见明显差异。生物活性检测原代和100代均达到1.0×105IU/mL以上。以上结果表明重组质粒pET-ChIFN-γ在工程菌株CH1中具有良好的遗传稳定性,其质粒遗传不稳定性可由适当的筛选压力来控制。

病毒性出血性败血症病毒单链抗体的原核表达及其功能鉴定

为制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)单链抗体(single chain variable fragment antibody,ScFv)并鉴定其生物学功能,本研究提取抗VHSV单抗1G5的杂交瘤细胞株总RNA并反转录获得cDNA模板,通过PCR扩增VHSV抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)编码序列,将其拼接成单链抗体Sc Fv基因后插入载体pET28a中,构建原核表达重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达。结果表明,单链抗体主要以可溶性形式表达,分子量约28 ku,能特异性识别VHSV病毒的G蛋白并对VHSV病毒具有体外中和活性,其对VHSV病毒的G蛋白亲和力(KD)达到1.4×10^(–8) M。单链抗体ScFv的制备为进一步研究VHSV的治疗性抗体、快速诊断试剂奠定了基础。

海带内生真菌的分离鉴定及其抑制乙酰胆碱酯酶活性的发酵工艺优化

本文以青岛海域的海带为原料,对其进行内生真菌的分离纯化,共得到7株内生真菌,采用改良Ellman法对其乙酰胆碱酯酶(ACh E)抑制活性进行筛选,并对其中一株活性最高内生真菌ML-X进行形态学和18S rDNA分子生物学鉴定,通过单因素实验和正交实验筛选出最适合该菌进行液体生长发酵的培养条件。结果表明,分离获得的菌株ML-X为白地霉属,序列号为KY977411,与遗传距离最近的Galactomyces geotrichum strain LMA-21株(JQ668739)同源性达99%。最佳发酵条件为:PS培养基,培养基的初始p H6.0,接种量5%,装瓶量150 m L/500 m L,培养温度31℃,发酵8 d,当发酵液粗浸膏为5 mg/m L时,对乙酰胆碱酯酶的抑制率可达28.91%±0.25%。

副溶血弧菌CHY5-M1M噬菌体的分离鉴定及生物学特性分析

副溶血弧菌引起的疾病给水产养殖行业带来巨大损失,而随着抗生素的禁用,人们开始探索治疗水产动物病菌的新型方法,如噬菌体治疗法。从青岛市城阳水产品批发市场采集了15份海产品养殖水及下水道污水样品,以副溶血弧菌作为宿主菌,采用点滴法分离纯化获得12株副溶血弧菌噬菌体,通过双层平板法研究副溶血弧菌噬菌体CHY5-M1M的最佳感染复数、一步生长曲线、温度和pH的稳定性以及对紫外线的敏感度等生物学特性。结果显示,CHY5-M1M噬菌体效价为8.65×10^(13)CFU·mL^(-1),且在100感染复数时效价最高;一步生长曲线的潜伏期为20 min,裂解时长100 min,140 min后达到平稳期;噬菌体在温度为40℃时效价最高,高于60℃时活性开始下降;噬菌体pH适应范围为5~11;噬菌体浓度随紫外照射时间增加明显下降;噬菌体基因组共43193 bp,包含44个基因,无毒力因子基因和抗生素耐药基因。研究结果表明,噬菌体CHY5-M1M在开发新型抗弧菌药物、预防治疗严重海水动物弧菌病等方面具有良好的应用前景,有望作为未来的抗生素替代产品。

microRNAs调控哺乳动物卵巢发育的研究进展

miRNAs是近年来发现的一类小的非编码RNA,它对动物的生长、发育,组织细胞的增殖和分化都起到非常重要的作用。与其它组织相比,人们对非编码RNAs在卵巢中的作用机制了解的还很有限,miRNAs作为一种调控因子在卵巢生理学和病理学上都发挥着重要作用。近年来,有关miRNAs调节卵巢发育的研究逐渐得到人们的重视,本文综合了近期的文献,主要阐述了miRNAs在卵巢发育过程中的作用,包括miR-224、miR-383和miR-378在颗粒细胞的增殖和激素的分泌当中所起到的作用,在黄体退化过程中miR-378的作用机制以及miR-21对排卵等方面的影响,除此之外,miRNAs可能与卵巢疾病存在着某种关系。旨在为人们全面了解miRNA对卵巢功能的调控及其机制提供理论依据。