LncRNA DLEU2对胃癌细胞增殖、凋亡和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)对胃癌细胞增殖、凋亡和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法通过GEPIA在线分析来自TCGA数据库和GTEx项目的胃癌组织DLEU2水平,采用实时定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞和胃癌BGC-823细胞的DLEU2水平;脂质体法将3条靶向DLEU2的小干扰RNA(si-DLEU2-1、si-DLEU2-2和si-DLEU2-3)转染至BGC-823细胞中,筛选最佳si-DLEU2干扰序列进行实验。体外常规培养BGC-823细胞并分为转染si-DLEU2的干扰组、转染无义siRNA序列的阴性对照(NC)组和未转染的空白对照(Blank)组,采用MTT比色法和AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的增殖活力和凋亡率,QPCR和Western blotting检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax和caspase-3的水平,Western blotting检测磷酸化的PI3K调节亚基p85(p-p85)和Akt(p-Akt)水平。结果GEPIA在线分析显示胃癌组织的DLEU2水平高于正常组织(P<0.05);QPCR结果显示BGC-823细胞的DLEU2水平高于GES-1细胞(P<0.05),且3条si-DLEU2序列转染后,BGC-823细胞的DLEU2水平均降低(P<0.05),其中si-DLEU2-3序列的效果最佳,故选取si-DLEU2-3序列进行后续实验;干扰组的DLEU2水平及转染24、48 h后的增殖活力均低于Blank组和NC组(P<0.05)。干扰组的凋亡率为(21.529±1.320)%,高于Blank组的(9.032±0.536)%和NC组的(8.641±0.365)%(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,干扰组的Bcl-2、p-p85和p-Akt水平降低,而Bax和caspase-3水平均升高(P<0.05)。Blank组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论DLEU2在胃癌组织和细胞中均升高且发挥促癌作用,可能通过激活PI3K/Akt信号通路来增强细胞增殖能力并抑制凋亡,有望成为胃癌治疗的新靶点。

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)m RNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白(β-catenin)蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin m RNA和蛋白水平表达(P<0.01,P<0.01),并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin m RNA和蛋白水平表达(P<0.01,P<0.01);尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01,P<0.01)。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。