miR-10a-5p基因甲基化对卵巢癌铂类耐药的影响

目的卵巢癌是死亡率最高的妇科肿瘤,较强的化疗耐药性是其预后差的主要原因之一,为了阐明卵巢癌对铂类药物的耐药机制,本研究探讨miRNA基因的甲基化水平对卵巢癌铂类耐药的影响。方法将卵巢癌组织分为敏感组和耐药组,每组各3例;采用基因芯片技术,对比分析了两组微RNA(microRNA,miRNA)的表达差异;采用实时荧光定量PCR,分别在6例敏感和3例耐药组织、铂类药物敏感(CoC1)和耐药的卵巢癌细胞系(CoC1/DDP),检测了候选miRNA的表达差异;应用Massarray技术,检测敏感组织(15例)与耐药组织(6例)中miRNA基因启动子的甲基化差异;应用生物信息学分析,鉴定目标miRNA的潜在靶基因。结果以铂类药物敏感的卵巢癌组织样本为对照,利用基因芯片筛选,鉴定了6条在耐药组织样本中出现表达上调的miRNA(miR-493-3p、miR-10a-5p、miR-16-2-3p、miR-1248、miR-451a、miR-628-3p)和6条表达下调的miRNA(miR-509-3p、miR-1197、miR-376a-3p、miR-1273a、miR-550a-3p、miR-19b-3p)。组织验证发现,miR-509-3p、miR-493-3p、miR-10a-5p、miR-16-2-3p和miR-451a,与芯片结果一致;培养细胞研究发现,4条miRNA的表达调控方式与组织芯片结果一致,miR-10a-5p、miR-16-2-3p、miR-1248和miR-628-3p在耐药细胞系中高表达。进一步研究发现,与敏感肿瘤组织相比,耐药组织中miR-10a-5p基因启动子的甲基化水平出现显著降低,P=0.04。结合生物信息学预测HOXA1和USF2为miR-10a-5p与耐药相关的靶基因。结论与敏感组相比,耐药组miR-10a-5p基因启动子甲基化水平显著降低,miR-10a-5p表达升高,通过抑制HOXA1和USF2,抑制细胞凋亡,导致铂类化疗药物耐受。

单核苷酸错配对于Cpf1特异性的影响（英文）

CRISPR/Cas系统从发现和应用以来,热度持续上升。在过去几年中,这种技术已经成为了基因编辑的标准方案。该技术用一条指导RNA(guideRNA)来引导Cas9或Cpf1等核酸酶在特定的位点实现双链打断。但是这种系统也有可能在非特异性的位置进行切割,这种现象成为"脱靶效应"。脱靶剪切现象可能会给基因功能研究或者临床治疗带来很多麻烦。为了深入研究Cpf1的特异性,本研究通过一套双荧光报告系统探索了单核苷酸错配的影响。结果表明,间隔区内的poly(T)结构会阻止Cpf1的靶向切割。而且rA的错配似乎是CRISPR/Cpf1容忍度最低的一类,这与CRISPR/Cas9的情况相同。这种相似性可能来源于两种酶在进化上的同源性。上述结果表明,在使用CRISPR/Cp1或者CRISPR/Cas9的时候应当更多注意其脱靶效应,因为这种效应是这套系统的一个内在特性。