榄香烯对人晶状体上皮细胞增生及细胞周期的影响

目的探讨中药单体榄香烯(Ele)对人晶状体上皮细胞株(HLE-B3)增生及细胞周期的影响。方法利用重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导HLE-B3增生,将80mg/L的Ele作用在处于增生状态下的HLE-B324h后,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测Ele对HLE-B3增生的抑制作用;苏木精-伊红染色观察Ele作用后HLE-B3细胞形态的改变;流式细胞术(FCM)检测Ele对HLE-B3细胞周期的影响。结果MTT检测显示:rhbFGF组HLE-B3吸光度值(0.5990±0.0531)较正常组(0.4091±0.0422)显著升高,Ele组HLE-B3吸光度值(0.4500±0.0614)较rhbFGF组显著降低,抑制率达24.90%(P<0.01)。苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察到rhbFGF组较正常组细胞数量增多,细胞形态清晰,胞浆丰富,胞核清晰,交织呈网状结构;Ele组细胞数量明显减少,胞浆减少,轮廓不清,交织的网状结构减少,甚至有的细胞变圆,细胞核凝集,见核固缩现象,胞浆嗜酸性染色。FCM检测细胞周期变化时发现:G1期的细胞在rhbFGF组(42.062%±1.270%)较正常组(46.422%±3.765%)减少(P<0.05),Ele组(60.665%±2.069%)较rhbFGF组明显增加(P<0.01);S期的细胞在rhbFGF组(51.647%±1.123%)较正常组(31.842%±2.798%)明显增加(P<0.01),Ele组(30.222%±3.429%)较rhbFGF组明显减少(P<0.01);G2期的细胞在rhbFGF组(6.288%±0.966%)较正常组(21.735%±3.806%)明显减少(P<0.01),Ele组(9.112%±1.659%)较rhbFGF组明显增加(P<0.01)。结论Ele能通过改变HLE-B3细胞形态及细胞周期的进程而有效抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增生,有望成为防治后发性白内障的理想药物。

中药单体榄香烯体外对人晶状体上皮细胞内胶原蛋白合成的影响

目的:探讨中药单体榄香烯(effects of elemene,Ele)对人晶状体上皮细胞系(human lens epithelial cells B3,HLE-B3)内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白合成的影响。方法:利用10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)诱导HLE-B3增殖,将80mg/L的Ele作用在处于增殖状态下的HLE-B3,24h后采用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测Ele作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达。结果:rhbFGF作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白浓度为53.5±5.4μg/L,较正常组(38.5±2.3μg/L)明显升高,Ele作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白的浓度为29.5±2.9μg/L,较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。rhbFGF作用后HLE-B3内Ⅲ型胶原蛋白浓度为1.27±0.29μg/L,较正常组(0.83±0.12μg/L)明显升高,Ele作用后HLE-B3内Ⅲ型胶原蛋白的浓度为0.69±0.11μg/L,较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。结论:Ele抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增殖的同时也能抑制HLE-B3内Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白合成,干扰HLE-B3纤维化,可望成为防治后囊膜混浊的理想药物。

榄香烯对HLE-B3内PKC和PKG蛋白表达的影响

目的探讨中药单体榄香烯(Ele)对人晶状体上皮细胞系(HLE-B3)内蛋白激酶C(PKC)和蛋白激酶G(PKG)表达的影响,从而探讨Ele抑制HLE-B3增殖的信号转导机制。方法实验分为空白组、rhbFGF组及Ele组,采用流式细胞术检测各组HLE-B3内PKC和PKG蛋白的表达。结果 rhbFGF组HLE-B3内PKC表达为(50.652±2.068)%,较空白组的(35.575±1.937)%明显升高(P<0.01),Ele组为(28.012±2.789)%,较rhbFGF组明显降低(P<0.01);rhbFGF组HLE-B3内PKG表达为(86.562±1.325)%,较空白组的(63.838±0.486)%明显升高(P<0.01),Ele组为(55.125±2.126)%,较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。结论下调HLE-B3内PKC或PKG表达、干预细胞内PKC或PKG信号转导途经都可能是Ele抑制HLE-B3增殖的作用机制。

榄香烯对HLE-B3内蛋白激酶A及其mRNA表达的影响

目的探讨中药单体榄香烯(Ele)对人晶状体上皮细胞系(HLE-B3)内蛋白激酶A(PKA)及mRNA表达的影响。方法利用碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导HLE-B3增殖,将80mg/L的Ele作用在处于增殖状态下的HLE-B3 24 h,流式细胞术检测HLE-B3内PKA的表达,RT-PCR法检测HLE-B3内PKA mRNA表达。结果 rhbFGF组HLE-B3内PKA表达(33.250±2.242)较空白组(46.847±1.673)明显下降(P<0.01),Ele组(64.110±2.933)较rhbFGF组明显升高(P<0.01)。rhbFGF组HLE-B3内PKA mRNA表达(0.734±0.041)较空白组(0.927±0.040)明显下降(P<0.01),Ele组(1.196±0.066)较rhbFGF组明显升高(P<0.01)。结论上调HLE-B3内PKA表达、激活细胞内PKA信号转导途径可能是Ele抑制HLE-B3增殖的作用机制。

榄香烯抑制人晶状体上皮细胞增殖的蛋白质组研究

目的探讨中药单体榄香烯对碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）诱导的人晶状体上皮细胞（HLE-B3）增殖的抑制作用及其蛋白质组学规律。方法实验研究。共分为3组：正常组、rhbFGF组及榄香烯组。正常组为培养的HLE-B3，rhbFGF组加入终浓度为10μg／LrhbFGF，榄香烯组加入终浓度为10μg/L rhbFGF和80mg／L榄香烯。24h后四甲基偶氮唑蓝法检测榄香烯对HLE-B3增殖的抑制作用；蛋白质芯片联合表面增强激光解析离子化飞行时问质谱技术检测分析榄香烯作用于HLE-B3后蛋白质表达谱的改变、寻求差异蛋白。采用单因素方差分析，并通过Dunnett-t检验进行正常组、rhbFGF组、榄香烯组吸光度值的两两比较；对每个质荷比峰值做Kruskal-Wallis秩和检验，采用Nemenyi检验对正常组、rhbFGF组、榄香烯组中每个特定质荷比的蛋白质峰值进行两两比较。结果（1）四甲基偶氮唑蓝法检测显示：rhbFGF组HLE—B3吸光度A值（0．599±0．053）比正常组（0．409±0．042）显著升高，榄香烯组HLE—B3吸光度A值（0．450±0．061）比rhbFGF组显著降低，抑制率达24．90％，差异有统计学意义（F=28．886，P=0．000）。（2）用rhbFGF诱导HLE-B3增殖后，出现了5个差异表达的蛋白点，其中质荷比为8093和9516的2个蛋白点表达上调，质荷比为5361、9666及13767的3个蛋白点表达下调；榄香烯作用于增殖的HLE-B3后，出现10个差异表达的蛋白点，其中质荷比为2487、4392、8566及11600的4个蛋白点表达上调，质荷比为3679、4826、6861、9516、9557和9672的6个蛋白点表达下调。结论榄香烯能有效抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增殖，质荷比为9516的蛋白点可能是榄香烯抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增殖的作用靶点。

姜黄素抑制人晶状体上皮细胞增殖与胶原蛋白合成的研究

目的:探讨中药单体姜黄素(Cur)对人晶状体上皮细胞系(HLE-B3)增殖及细胞内Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白合成的影响。方法:20mg/L的Cur作用于HLE-B3 24h后MTT法检测吸光度值(OD值),苏木精-伊红染色观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期变化,ELISA法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达。结果:rhbFGF组OD值较正常组升高,Cur组OD值较rhbFGF组降低,抑制率达53.70%;Cur组细胞数目明显减少,胞浆减少,轮廓不清,交织的网状结构减少,甚至有的细胞变圆,细胞核凝集,见核固缩现象,胞浆嗜酸性染色;G1期的细胞Cur组较rhbFGF组明显增加,S期的细胞Cur组较rhbFGF组明显减少,G2期的细胞Cur组较rhbFGF组无明显变化;Ⅰ型胶原蛋白浓度为Cur组较rhbFGF组明显下降,Ⅲ型胶原蛋白浓度Cur组较rhbFGF组也明显下降。结论:Cur抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增殖的同时也能抑制HLE-B3内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成,干扰HLE-B3纤维化,可望成为防治后囊膜混浊的理想药物。