内毒素耐受树突状细胞免疫功能变化及其对脓毒症模型小鼠的作用

目的探讨内毒素耐受树突状细胞(endotoxin tolerant dendritic cell,ETDC)免疫功能的改变,观察其对脓毒症模型小鼠的作用。方法以脂多糖刺激小鼠来源骨髓树突状细胞制备ETDC,流式细胞仪检测ETDC表面标志物主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ、CD86和CD11c表达水平,细胞计数试剂盒检测T淋巴细胞增殖率,ELISA检测细胞上清液中细胞因子水平。将36只BALB/c小鼠分为4组,空白对照组不做任何处理,假手术组行单纯切开缝合术,脓毒症组和ETDC回输治疗组行盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型前,分别尾静脉回输0.9%氯化钠溶液和ETDC与0.9%氯化钠混悬液。检测各组小鼠血丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspatate,AST)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factro,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10水平和脾脏辅助性T-淋巴细胞(help T cells,Th)17/调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Treg)比例,观察小鼠肝脏、肾脏和回肠病理学表现。组间比较采用t检验或χ^2检验。结果ETDC表面MHCⅡ、CD86和CD11c表达分别为70.4%、43.1%、73.1%,较成熟树突状细胞(mature dendritic cell,mDC)的96.1%、89.5%和84.6%显著下降(χ^2值分别为56.47、83.78和23.29,均P<0.01)。ETDC细胞上清液中IL-10、TNF-α和IL-6分别为(978.04±56.70)、(980.34±111.96)和(12 743.03±865.81)ng/L,mDC分别为(741.35±99.23)、(1 703.11±117.00)和(19 052.28±1 145.84)ng/L,差异均有统计学意义(t值分别为5.073、10.93和10.76,均P<0.01)。ETDC和T淋巴细胞1∶5、1∶10共培养的增殖率分别为(676.95±85.99)%和(514.00±106.39)%,mDC为(956.25±127.12)%和(772.07±214.08)%。ETDC回输治疗组小鼠肝脏、肾脏和回肠病理学改变明显轻于脓毒症组。ETDC回输治疗组小鼠血清ALT和AST为(299.71±36.91)和(690.39±154.92)U/L,TNF-α、IL-6和IL-10分别为(0.067±0.005)、(0.428±0.051)和(0.058±0.005)ng/L,脓毒症组ALT和AST为(620.67±69.27)和(1 430.17±134.05)U/L,TNF-α、IL-6和IL-10分别为(0.085±0.007)、(0.774±0.088)和(0.036±0.005)ng/L,差异均有统计学意义(t值分别为11.60、10.96、5.991、8.657和8.042,均P<0.01)。ETDC回输治疗组小鼠Treg/Th17比例为23.4%,脓毒症组为60.8%(χ^2=28.69,P<0.01)。结论ETDC回输对脓毒症模型小鼠具有保护作用,可能是通过调节T淋巴细胞分化发挥了负向免疫调控作用。