N端焦谷氨酸环化封闭类单克隆抗体药物的N端测序方法

目的:对于直接用N端测序仪无法进行测序的N端焦谷氨酸环化封闭的抗体类药物,去除焦谷氨酸后实现对其N端序列的从头测序。方法:对抗体的重轻链分别进行N端测序无果,再通过LC-MSMS对其重轻链N端的焦谷氨酸进行确认,证明其为焦谷氨酸封闭。对抗体蛋白进行焦谷氨酸氨肽酶酶解后,再通过N端测序仪进行Edman降解法N端测序,获得抗体药物重轻链的N端氨基酸序列。结论:抗体药物的重轻链N端经过N端测序仪测序和LC-MSMS分析,确定均为焦谷氨酸封闭。再经过焦谷氨酸氨肽酶处理后进行N端测序仪从头测序证实抗体药物的N端序列与理论序列一致。

大鼠颈7神经根切断后肱三头肌蛋白质组学研究

目的用荧光差异双向凝胶电泳技术（2-D DIGE）分析大鼠颈7（C7）神经根切断后肱三头肌蛋白质表达变化规律，初步探讨其功能代偿的分子机制。方法建立一侧C7神经根切断大鼠模型，对侧为对照组，分别在C7神经根切断后第1、2、3、6、12周取等量的肱三头肌，用荧光差异双向凝胶电泳技术分离、单因素方差分析（one-way ANOVA）筛选蛋白质表达量差异具有统计学意义的蛋白质点（P〈0．05），再对差异蛋白质点进行胶内酶解，并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）或串联质谱技术进行鉴定。结果在大鼠岛神经根切断前和切断后的不同时间点，肱三头肌有38个蛋白质点表达发生了明显变化，其中有27个蛋白质被确切地鉴定，有11个蛋白质与肌纤维的能量代谢相关。在C7切断后第1周，无氧代谢酶表达下调，第3周无氧代谢酶、氧化酶（有氧代谢酶）表达均上调，但在第6～12周发生代谢类型的转变，无氧酶上调、氧化酶下调，同时线粒体蛋白质翻译延长因子表达下调。结论C7神经根切断后肱三头肌功能代偿机制可能与肌纤维类型的转变有关，而这种转变的调节可能发生在能量代谢酶的翻译水平。