RNA恒温扩增实时荧光检测技术在检测脑脊液中结核分枝杆菌的应用

目的评估用RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT-TB)快速检测脑脊液中结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值。方法采集来我院接受检查的高度疑似儿童结核性脑膜炎患儿96例(A组),非结核性脑膜炎儿童78例(B组),分别采用夹层杯离心集菌法、罗氏培养法、SAT-TB和MTB DNA荧光定量扩增法(TB DNA)同时检测,比较筛检指标及临床应用价值。结果 A组脑脊液检测中罗氏培养法、TB DNA和SAT-TB法检测阳性率分别为40.63%、39.58%、42.71%,三者差异无统计学意义(X^2=0.20,P>0.05);以罗氏培养法作为金标准,SAT-TB法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确指数、误诊率、漏诊率、诊断符合率分别为92.31%、91.23%、87.80%、94.55%、0.84%、8.77%、7.69%和91.67%;TB DNA法的各项指标分别为66.67%、78.95%、68.42%、77.59%、0.46%、21.05%、33.33%和73.96%。结论 SAT-TB检测脑脊液标本中的MTB,具有快速、敏感度和特异度较高等优点,可提高脑脊液标本中MTB的检出率,从而提高儿童结核性脑膜炎的诊断水平。

肺结核患者外周血免疫细胞水平与临床意义分析

目的探讨肺结核患者外周血免疫细胞的表达水平及其临床意义。方法回顾性分析2016年1月至2017年5月徐州市传染病医院收治的676例肺结核患者和体检中心的40例健康对照者。采用贝克曼库尔特公司FC500型流式细胞仪,以荧光微球为参照,分别检测外周血CD4^+、CD8^+、B和NK细胞的绝对数。结果肺结核患者免疫细胞CD4^+、CD8^+、B和NK细胞数量低于健康对照者(t=6.25,5.12,5.05,4.37;P值均为0.00);痰菌阳性的肺结核患者免疫细胞CD4^+、CD8^+、B、NK细胞数量低于痰菌阴性的肺结核患者(t=4.07,3.70,2.75,2.71;P=0.00,0.00,0.01,0.01);老年肺结核患者免疫细胞CD4^+、CD8^+、B细胞数量低于年轻患者(t=4.04,2.60,5.25;P=0.00,0.01,0.00),554例初治肺结核患者经过2个月化疗后,其中510例单纯采用标准化抗结核治疗方案的患者CD4^+、CD8^+、B和NK细胞数量增加无统计学意义(t=1.19,1.04,0.39,1.82;P=0.23,0.30,0.70,0.07),44例合并免疫治疗的肺结核患者除NK细胞数量增加无统计学意义(t=0.80;P=0.42),CD4^+、CD8^+、B数量增加(t=2.15,2.17,3.12;P=0.03,0.03,0.00)。结论肺结核患者免疫细胞的表达水平降低,痰菌阳性以及老年肺结核患者降低尤为明显,对于免疫细胞表达水平降低的肺结核患者,在化疗的基础上配合免疫治疗更有利于患者的康复。

夹层杯离心涂片集菌法快速检测抗酸杆菌临床应用的初步观察

目的研究夹层杯离心涂片集菌法快速检测抗酸杆菌的实用价值。方法夹层杯离心涂片集菌法和直接涂片法对结核门诊病人痰标本的阳性检出率进行比较;并对住院确诊肺结核病人的痰标本与罗氏培养法比较。结果结防门诊病人痰240份,直接涂片法阳性率25.8%,夹层杯涂片离心集菌法痰涂片阳性率40.8%,2者比较差异有统计学意义。以罗氏培养法为标准,夹层杯涂片离心集菌法的敏感性、特异性、阳性预期值、阴性预期值及准确性分别为:90.9%、93.8%、97.6%、78.9%和91.7%。结论夹层杯离心涂片集菌法是一种更利于标准化、简便化的抗酸杆菌检查方法,检出率优于直接涂片法,并与罗氏培养法相比有较满意的符合率。大大有利于检验工作人员的生物安全防护,提高检验水平。

液基夹层杯技术检测支气管肺泡灌洗液中抗酸杆菌对菌阴肺结核的诊断价值

目的评估利用液基夹层杯离心涂片集菌技术检测支气管肺泡灌洗液中抗酸杆菌对菌阴肺结核的临床诊断价值。方法选取我院收治的106例菌阴肺结核患者,所有患者均进行支气管肺泡灌洗液液基夹层杯离心涂片集菌法,荧光定量PCR（FQ-PCR）法,罗氏培养进行抗酸杆菌检测。并通过与罗氏培养法的比较分析液基夹层杯离心涂片集菌法的灵敏度、特异度及临床应用价值。结果罗氏培养法和液基夹层杯离心涂片集菌法对临床确诊的菌阴肺结核患者支气管肺泡灌洗液抗酸杆菌检出率分别为66.0%,70.7%,两者的阳性率比较,差异无统计学意义（χ^2=1.231,P=0.267,P〉0.05）。结论液基夹层杯离心涂片集菌法检测支气管肺泡灌洗液抗酸杆菌,具有快速、敏感度和特异度较高的优点,对肺结核具有较高的诊断价值,为痰涂片阴性及无痰患者提供良好的诊断依据。

结核分枝杆菌耐利福平基因变异株的体外最小抑菌浓度研究

目的研究结核分枝杆菌(MTB)耐利福平临床分离株基因突变对其体外最小抑菌浓度(MIC)测定结果的影响。方法用基因芯片对临床分离的对利福平耐药的175株MTB及对利福平敏感的48株MTB进行耐药基因检测;并对所有标本进行利福平的MIC测定,比较不同变异株的MIC测定结果。结果对利福平耐药的MTB临床分离株基因突变以531、526、516、533位点单突变为主;531位点单突变的利福平耐药变异株MIC高于526位点单突变的耐药变异株,差异有统计学意义(t′=2.2237,t′α=2.0449,P<0.05);526位点单突变的利福平耐药变异株MIC高于516位点单突变的耐药变异株,差异有统计学意义(t=2.2056,P=0.0329,P<0.05)。双突变者均有较高的MIC测定值。结论合理的基因芯片设计能检出95.0%以上的对利福平耐药MTB变异株;对利福平耐药的MTB变异株有不同的基因突变模式,且不同突变模式的MTB耐药程度不同,可以为临床用药提供参考。

徐州地区乙型肝炎病毒基因型分布及其意义

研究徐州地区乙型肝炎病毒的基因型分布及其与肝功能损伤、病毒复制水平的关系。采用PCR微板杂交-ELISA技术进行HBVDNA基因分型,并结合其HBVDNA定量值和丙氨酸转氨酶结果,分析乙肝病毒基因型的临床意义。徐州地区乙肝病毒基因型B、C和D型分别占26.7%、44.0%和17.3%,在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎和肝硬化中C基因型的HBVDNA定量值显著高于B型者(t=2.45,2.53和2.36,P=0.027,0.018和0.029)。D型和与D型相关的基因型发生重型肝炎的百分率为51.7%。C基因型是徐州地区的优势基因型,并与较重的肝损伤有关,而B型与较轻的肝损伤有关,D型可能与重型肝炎有关。

Mtb耐异烟肼基因变异株的体外最小抑菌浓度研究

目的研究Mtb耐INH临床分离株katG基因、inhA基因、ahpC基因突变对其体外最小抑菌浓度(MIC)的影响。方法对临床分离的耐INH的160株Mtb及对INH敏感的40株Mtb进行耐药基因芯片检测;并对所有标本进行INH MIC测定,比较不同变异株的MIC结果,其数据采用t检验进行比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果Mtb耐INH株katG315基因变异占68.8%(110/160),katG315基因变异株的MIC为(20.20±19.46μg/ml),高于inhA变异株(0.73±0.82μg/ml)(t′=10.9171,t′α=1.9807,P<0.05);低于katG315+inhA变异株(69.33±32.45μg/ml),(t′=7.164,t′α=2.0627,P<0.05)。结论 Mtb耐INH基因有不同的突变模式,各模式存在不同的耐药程度,此可以给临床用药进一步提供参考。

家族聚集性慢性乙型肝炎的病毒前C区和基本核心启动子变异与临床病理的关系

目的:分析家族聚集性慢性乙型肝炎的基因变异特征和肝组织病理学改变的关系.方法:选择家族聚集性慢性乙型肝炎112例作实验组和非家族聚集性慢性乙型肝炎110例作对照组;用基因芯片法检验前C1896和BCP1762、1764双突变;并肝组织活检进行肝组织炎症活动度计分和肝纤维化计分.结果:实验组BCPT1762/A1764双突变率显著高于对照组(χ2=4.5626,P=0.0044);实验组炎症评分显著高于对照组(u=6.3397,P=0.0000);家族聚集性慢性乙型肝炎者中单独BCPT1762/A1764双突变者炎症计分显著高于与无此类位点变异者和单独前C区1896变异者(t'=8.0111,7.958,t'α=2.1651,2.059,均P<0.05).结论:家族聚集慢性乙型肝炎肝组织炎症计分和纤维化计分较高,与BCP1762和1764的变异率较高有关.

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用

目的评估采用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)快速检测结核性胸膜炎患者胸腔积液中的结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值。方法收集90例确诊结核性胸膜炎患者胸腔积液标本和52例非结核性胸膜炎患者胸腔积液标本,分别采用罗氏培养法、SAT和DNA荧光定量扩增法检测MTB,并通过与罗氏培养法比较,分析SAT的灵敏度、特异度及临床应用价值。结果以罗氏培养法为标准,则SAT的灵敏度、特异度和约登指数分别为90.9%、72.1%、0.630。在临床确诊的结核性胸膜炎患者中,罗氏培养法和SAT检测胸腔积液标本的阳性检出率分别为24.4%、43.3%,差异有统计学意义(χ2=7.166 3,P=0.001 4)。结论 SAT检测胸腔积液标本中的MTB,具有快速、灵敏度和特异度较高的优点,可提高胸腔积液标本中MTB的检出率并减少误诊和漏诊的发生。

徐州地区乙型肝炎病毒基因型与肝组织学改变的关系

目的研究徐州地区HBV基因型与肝组织学改变的关系。方法采用DNA测序技术进行HBV基因分型,并结合其ALT、TBil、HBeAg和HBV DNA定量值及肝组织病理学检查结果,分析HBV基因型与肝损害的关系。结果检测222例慢性乙型肝炎(CHB)患者,徐州地区HBV基因型构成为B、C、BC混合型和D型分别占20.7%、73.0%、4.1%和2.3%。在CHB患者中B、C基因型在性别、年龄、肝功能和HBeAg的定量值及百分率均无显著差异(P>0.05),C型的HBV DNA定量值显著高于B型(P<0.05);C型基本核心启动子区(BCP)1762、1764变异率显著高于B型,P<0.01;C型的肝组织炎症评分和纤维化评分明显高于B型(P<0.05);B和C基因型中,单独1762、1764双突变者与无此类位点变异者和单独前C区1896变异者炎症评分相比较前者显著高于后两者(P<0.05)。结论不同HBV基因型变异位点不同,可能是造成不同的肝组织学改变的原因之一,C型可带来相对严重的肝组织学改变。HBV基因型及肝组织学检查有助于判断疾病的轻重及预后,可用于临床指导治疗。

梅毒患者243例相关抗体检测结果分析

目的 探讨梅毒患者抗体与年龄、性别、疗程以及不同临床分期的关系，为临床合理化治疗提供参考。方法 243例梅毒患者采用时间分辨荧光免疫法（TRFIA）检测梅毒螺旋体抗体含量，用快速血浆反应素试验（RPR）检测血清中反应素滴度，TRFIA阳性患者用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）确认。结果 梅毒螺旋体特异性抗体的含量各年龄组相互比较差异有统计学意义（P〈0．01），不同性别间其含量差异无统计学意义（P〉0．05），恢复期患者梅毒螺旋体特异性抗体的含量显著高于治疗初期（P〈0．01）：RPR≥1：8患者的数量在19—29岁的人群中所占比例最高（53．06％），其次是胎传梅毒占41．56％，治疗1个月RPR阴转率（6．52％）与三个月的阴转率（16．30％）相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 梅毒抗体在不同人群、不同治疗阶段以及不同临床分期中各不相同，在隐性梅毒患者中孕产妇数量较多，应加强对孕产妇梅毒患者的治疗和健康教育工作，减少胎传梅毒的发生率。

乙型肝炎病毒家族聚集性感染者的基因型和基因变异特征分析

目的:研究HBV家族聚集性感染者的基因型和基因变异特征．方法:选择HBV聚集性感染家族成员内部基因型完全相同的共27个家族84人,其中HBV 携带者(ASC)29例;慢性活动性肝炎(CAH)23 例;肝硬化(LC)21例;肝细胞癌(HCC)11例;用基因芯片法检验前C1896和BCP1762,1764双突变;用测序法检验HBV基因型,并设相应基因型的HBV感染对照组．结果:B型HBV家族聚集感染者ASC率显著大于C型家族(X2=5．0734,P=0．0243,P<0．05); 其BCP1762．1764双突变的发生率也显著低于 C基因型(X2=22．4000,P=0．0000,P<0．001)．两种基因型的家族聚集感染者组与相应的对照组相比在疾病临床类型方面均无显著差异．结论:检验HBV家族聚集感染者的基因型和／或BCP区1762、1764基因的双突变可以协助疾病的预测分析．

γ-干扰素体外释放试验在结核诊断中的应用评价

目的探寻γ-干扰素体外释放试验在结核诊断中的应用价值方法 34例菌阳肺结核患者,238例菌阴肺核患者,33例非结核患者,30例健康体检者,分别进行血清结核杆菌抗体检测、结核菌素试验(TST)以及结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放酶联免疫试验(TB-IGRA),对其检测结果进行统计分析。结果TB-IGRA、血清结核杆菌抗体试验以及TST的诊断敏感性分别为87.13%、76.10%和64.71%;诊断特异性分别为90.48%、66.67%和71.43%;阳性预测值分别为97.53%、90.79%和90.72%;阴性预测值分别为61.96%、39.25%和31.91%;诊断效率分别为87.77%、74.33%和65.97%。TB-IGRA的诊断敏感性和诊断特异性均显著高于血清结核杆菌抗体试验以及TST(P<0.01)。结论 TB-IGRA对结核的诊断具有较高敏感性和特异性,对于菌阴肺结核的辅助诊断和疑似结核感染患者的排除优于其它两种方法。

乙型肝炎病毒前C区和BCP区突变及基因型对HBeAg表达的影响

研究乙型肝炎病毒前C区和BCP区突变及基因型对HBeAg表达的影响。分别用基因芯片和基因测序的方法检验HBV DNA阳性的乙型肝炎病毒前C区和BCP区突变及基因型,应用时间分辨免疫荧光法检测HBeAg含量,按照有无HBV前C区1896、BCP区1762、1764双突变、基因型等指标进行分组分析。无前C区1896和BCP区1762/1764双突变组、单纯1762、1764双突变和1896突变组以及1896、1762、1764联合突变组之间相互比较,HBeAg含量相差显著,F=6.47,P<0.01;B、C基因型间HBeAg含量相比,相差无显著性,t=0.1394,P>0.05。乙型肝炎病毒前C区和BCP区突变能显著影响HBeAg量的表达,从而导致乙型肝炎病毒致病能力的变化。

乙型肝炎病毒基因型与干扰素-α2b疗效的关系

目的研究乙型肝炎病毒基因型与干扰素-α2b治疗疗效的关系。方法采用DNA测序法对222例慢性乙型肝炎患者进行HBV基因分型。其中106例接受干扰素-α2b治疗6个月,观察治疗后应答率与基因型的关系。结果在106例接受干扰素-α2b治疗的患者,C基因型患者肝组织学改变明显重于B基因型。在6个月治疗结束时,B型感染者HBVDNA阴转、HBeAg血清转换和ALT复常率分别为41.9%,38.7%和58.1%,均显著高于C型患者(P<0.05)。结论HBV基因型与肝损害程度及对干扰素-α2b的应答率有一定的关系。

肺结核下呼吸道感染及抗菌药物合理应用研究

目的研究肺结核患者继发肺部感染时的常见病原体种类及其敏感药物,为临床抗菌药物合理应用提供依据。方法对我院住院肺结核患者下呼吸道标本分离出致病菌者752例按G+球菌、G-杆菌和真菌分组分析,并按种类进行药敏试验,分析感染菌谱和耐药状况。结果分离出的病原体中,以G-杆菌为主,占50.0%,其次是真菌和G+球菌,分别占25.0%和21.7%;白色念珠菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯杆菌占前3位;药敏结果显示,G-杆菌对亚胺培南、阿米卡星敏感性较高;G+菌对万古霉素敏感性较高;白色念珠菌对5-氟胞嘧啶最为敏感。结论明确肺结核患者下呼吸道感染的病原体种类和药物敏感试验结果,选择合理有效的抗菌药物,是及时治疗、挽救患者生命的关键。

提高痰标本采集合格率加强抗生素应用的监测

目的:提高痰标本采集的合格率,加强肺部感染病人抗生素应用的监测。方法:观察组采用规范的痰标本采集和质量控制方法,考察其痰标本采集合格率和细菌培养阳性率,并与对照组比较。结果:痰标本的规范采集和质量控制后,其合格率和培养阳性率与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:强化护理宣教,加强对患者采集痰标本的正确指导和规范操作,同时加强与微生物实验室的沟通,并建立责任追究制度,可提高痰标本的合格率和痰培养的阳性率。

徐州市92株非结核分枝杆菌菌种鉴定及药敏结果分析

目的分析徐州市非结核分枝杆菌的菌种类型及耐药情况,为临床诊断和治疗提供科学依据。方法回顾性分析2016.01-2018.12徐州市传染病医院采用PCR-反向点杂交酶显色法鉴定出的92株非结核分枝杆菌的菌种类型以及比例法检测出的药敏结果。结果92株非结核分枝杆菌检出胞内分枝杆菌59株,堪萨斯分枝杆菌17株,脓肿分枝杆菌5株,龟分枝杆菌4株,戈登分枝杆菌3株,鸟分枝杆菌3株,浅黄分枝杆菌1株,对利福平的耐药率为89.13%(82/92)、异烟肼为97.82%(90/92)、氧氟沙星为84.78%(78/92)、乙胺丁醇为90.22%(83/92)、丙硫异烟胺84.78%(78/92)、卡那霉素77.17%(71/92)、阿米卡星为60.87%(56/92)、环丝氨酸为79.34%(73/92)。结论徐州市非结核分枝杆菌的感染以胞内分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌为主,8种治疗药物中以异烟肼的耐药率最高,阿米卡星最低。

国产试剂检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平耐药基因临床价值的探讨

目的比较进口试剂和国产试剂在检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药基因差异,探讨国产试剂的临床使用价值方法 152株经罗氏培养阳性的菌株,分别用德国Hain life science Gmb H生产的Geno TypeMTBDRplus、亚能生物技术(深圳)有限公司生产的基因探针试剂检测利福平、异烟肼耐药基因,并与传统的药敏结果作比较。结果 152例菌株中有148株纳入比较,其中进口试剂、国产试剂和罗氏培养法对利福平、异烟肼耐药的检出率分别为47.30%(70/148),43.24%(64/148);50%(74/148),41.89(62/148);48.65%(72/148),47.30%(70/148),国产试剂与进口试剂、罗氏培养法相比,对利福平、异烟肼耐药检出率均无统计学差异(P>0.05).以罗氏培养的药敏结果为金标准,国产试剂和进口试剂对利福平、异烟肼耐药的检出敏感性和特异性均无统计学差异(P>0.05)。结论国产试剂检测异烟肼和利福平耐药的敏感性与特异性与进口试剂相接近,且操作简便,价格便宜,适合基层医院对结核分枝杆菌耐药性的快速检测。