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4种猪腹泻病毒恒温隔绝式荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
被引量:
1
1
作者
侯闻闻
余良政
+4 位作者
樊毛迪
朱振邦
林成贤
陈昌海
李向东
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023年第9期83-88,共6页
为鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)这4种猪主要腹泻病毒,本研究分别针对PEDV M基因、TGEV M基因、PoRV NSP5基因、PDCoV M基因设计特异性引物和探针,经过方阵法优化...
为鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)这4种猪主要腹泻病毒,本研究分别针对PEDV M基因、TGEV M基因、PoRV NSP5基因、PDCoV M基因设计特异性引物和探针,经过方阵法优化恒温隔绝式荧光RT-PCR(iiRT-PCR)反应条件,建立了检测这4种猪腹泻病毒iiRT-PCR方法。用建立的iiRT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本脑炎病毒(JEV),并对iiRT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果显示该方法特异性强,对PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV的检测下限分别为10^(2)、10^(2)、10^(3)、10^(3)TCID_(50)/mL,并具有良好的组内和组间重复性;而荧光定量PCR方法的检测下限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)、10^(2)TCID_(50)/mL,敏感性略高于iiRT-PCR。2种方法对22份临床样品的检测结果符合率为100%,PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV阳性率分别为40.91%、9.09%、45.45%、9.09%,其中PEDV与PoRV混合感染率为18.18%,PDCoV与PoRV混合感染率为4.55%。本研究建立的iiRT-PCR为临床现场检测4种猪腹泻病毒提供了一种简便快速的方法。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
猪传染性胃肠炎病毒
猪轮状病毒
猪德尔塔冠状病毒
恒温隔绝式荧光RT-PCR
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职称材料
题名
4种猪腹泻病毒恒温隔绝式荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
被引量:
1
1
作者
侯闻闻
余良政
樊毛迪
朱振邦
林成贤
陈昌海
李向东
机构
扬州大学兽医学院
江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室
金瑞鸿捷(厦门)生物科技有限公司
江苏省动物疫病预防控制中心
出处
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023年第9期83-88,共6页
基金
江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(21)2014]
江苏现代农业产业体系建设项目(JATS[2022]361)。
文摘
为鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)这4种猪主要腹泻病毒,本研究分别针对PEDV M基因、TGEV M基因、PoRV NSP5基因、PDCoV M基因设计特异性引物和探针,经过方阵法优化恒温隔绝式荧光RT-PCR(iiRT-PCR)反应条件,建立了检测这4种猪腹泻病毒iiRT-PCR方法。用建立的iiRT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本脑炎病毒(JEV),并对iiRT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果显示该方法特异性强,对PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV的检测下限分别为10^(2)、10^(2)、10^(3)、10^(3)TCID_(50)/mL,并具有良好的组内和组间重复性;而荧光定量PCR方法的检测下限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)、10^(2)TCID_(50)/mL,敏感性略高于iiRT-PCR。2种方法对22份临床样品的检测结果符合率为100%,PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV阳性率分别为40.91%、9.09%、45.45%、9.09%,其中PEDV与PoRV混合感染率为18.18%,PDCoV与PoRV混合感染率为4.55%。本研究建立的iiRT-PCR为临床现场检测4种猪腹泻病毒提供了一种简便快速的方法。
关键词
猪流行性腹泻病毒
猪传染性胃肠炎病毒
猪轮状病毒
猪德尔塔冠状病毒
恒温隔绝式荧光RT-PCR
Keywords
porcine epidemic diarrhea virus
porcine transmissible gastroenteritis virus
porcine rotavirus
porcine delta coronavirus
insulated isothermal RT-PCR
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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被引量
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1
4种猪腹泻病毒恒温隔绝式荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
侯闻闻
余良政
樊毛迪
朱振邦
林成贤
陈昌海
李向东
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023
1
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