缺氧缺血致脑室周围白质软化新生大鼠连接蛋白47表达及其对少突胶质细胞髓鞘化的影响

目的探讨连接蛋白(Cx)47在缺氧缺血(HI)致新生大鼠脑室周围白质软化(PVL)发生、发展中表达,阐明Cx47对少突胶质细胞(OLs)髓鞘化的影响。方法将120只出生3 d的新生大鼠随机分为HI组和对照组,每组各60只。采用右侧颈总动脉结扎后低氧2 h建立PVL动物模型,在手术后l、3、7、14 d分别留取脑组织标本,采用HE染色、透射电镜观察脑组织形态学改变,免疫组化、Western blotting和实时PCR方法检测2组Cx47蛋白和基因表达。结果光镜下可见对照组脑组织结构致密,神经胶质细胞形态完整,排列均匀,胞核大,染色清晰。HI组手术后1 d细胞间隙增宽,细胞肿胀、变形、细胞核固缩;手术后3 d可见侧脑室旁白质细胞大量坏死,神经纤维走行紊乱,脑组织结构疏松模糊呈囊性及筛网状坏死;手术后7 d脑室旁白质坏死区域更为广泛,呈簇状及点状坏死,水肿减轻,出现不同程度胶质增生;手术后14 d脑白质胼胝体变薄,纤维走向紊乱,呈网状或条索状,部分出现囊腔病变侧脑室扩大。透射电镜下对照组呈现完整的细胞形态,细胞间缝隙连接紧密;HI组可见OLs出现溶解碎裂,细胞之间缝隙连接开放。免疫组化可见Cx47与髓鞘碱性蛋白(MBP)表达定位于OLs,与对照组比较,HI组Cx47与MBP表达均减少(P<0.01)。2组Cx47蛋白及基因表达水平随大鼠日龄增加而增加;与对照组比较,HI组各时间Cx47表达均较降低(P<0.01)。结论在HI致PVL新生大鼠模型中存在OLs损伤、髓鞘化障碍、缝隙连接开放,在此过程中Cx47表达显著降低,提示Cx47可能参与髓鞘化障碍及缝隙连接开放。

新生儿低血糖症的诊疗策略

新生儿低血糖症的定义一直存在争议,目前国内多采用的诊断标准是,不论胎龄和日龄,全血葡萄糖水平低于2.2mmol/L即诊断为低血糖症,而低于2.6mmol/L为临床需要干预的界限值。新生儿低血糖症可能造成永久性脑损伤并导致不同程度的神经系统后遗症,因此对于存在高危因素的新生儿生后应常规监测血糖,避免长时间及反复低血糖发生。

隐性脊柱裂脊髓内NOS1、脂肪及尼氏体含量的组织学分析

目的检测隐性脊柱裂(SBO)胎鼠脊髓内一氧化氮合酶1(NOS1)、脂肪及神经元内尼氏体含量,探讨SBO发病机制。方法建立SBO胎鼠动物模型,通过免疫荧光染色方法测定脊髓内NOS1阳性细胞数量,油红O染色观察脊髓内脂肪含量,甲苯胺蓝染色观察脊髓神经元内尼氏体含量及神经元形态。结果SBO胎鼠脊髓中NOS1阳性神经元增多,神经元总数减少,细胸质内尼氏体减少或缺失,光密度值下降(P<0.01),脂肪含量无统计学差异(P>0.05)。结论SBO胎鼠腰骶段脊髓中NOS1分泌增多,尼氏体含量减少,可能是SBO出现临床症状的病理学基础之一。

CBL联合PBL教学法在留学生儿科实践教学中的应用

目的探讨CBL联合PBL教学法在留学生儿科实践教学中的应用效果。方法将2015年1月~2016年12月在中国医科大学附属盛京医院儿科实习的120名临床医学本科留学生随机分为试验组及对照组,每组60人,试验组采用CBL联合PBL教学法,对照组采用传统教学法。实习结束后分别进行理论知识、实践技能和病例分析三项专业素质测评,同时使用问卷调查评价对教学的满意度,并对两组结果进行比较。结果试验组三项专业成绩及总分均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。试验组对教学方法的满意度高于对照组(P<0.05)。结论 CBL联合PBL教学方法不仅可以充分调动留学生儿科实践学习的积极性,还可以提高临床思维能力等综合素质,是一种值得推广的教学方法。

基于微信平台的微课在儿科教学中的应用探讨

儿科学教学质量是我国医学教育水平的一个重要体现。近些年,面对中国社会对儿科医疗资源的巨大需求,儿科医学教育事业面临着新的挑战,因此我们应该改革教学方法,不断提高教学质量。对基于微信平台的微课在儿科教学中的应用进行探讨,旨在进一步完善儿科教学工作。

氨基末端脑钠肽前体在早期诊断早产儿支气管肺发育不良及合并肺动脉高压中的研究进展

早产儿支气管肺发育不良(BPD)是影响早产儿预后的严重并发症之一,中重度BPD合并肺动脉高压(BPD-PH)的发生率较高,并会进一步增加BPD患儿的病死率。而BPD发展阶段较长,待纠正胎龄36周才能够明确诊断,BPD-PH临床表现也缺乏特异性,诊断的金标准心导管检查属于有创检查,常用的超声心动图检查也受操作者经验影响较大,因此早期识别BPD及BPD-PH受限。氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)由心室肌细胞在容量或压力超负荷刺激下分泌,既往在先天性心脏病中评估心脏负荷时应用较多。近期研究发现,BPD患儿在生后1周内及BPD发展阶段,血中NT-proBNP水平增高;且纠正胎龄28~36周,NT-proBNP水平显著升高预测BPD-PH的灵敏度及特异度均较高。因此,NT-proBNP有望成为早期预测BPD及BPD-PH的生物标志物。本文对NT-proBNP的生物学功能、代谢特点、在BPD及BPD-PH中的研究进展进行综述,以期借助NT-proBNP作为BPD及BPD-PH的早期预测指标,对具有高危因素的早产儿进行早期识别、及时干预、改善预后。

多模态磁共振在新生儿脑病中的临床应用

新生儿脑病有多种类型,如缺氧缺血性脑病、胆红素脑病、低血糖脑病、早产儿脑病、脓毒症相关脑病、遗传代谢性脑病及线粒体脑病等。磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)技术可以用于诊断及评估病情,是新生儿脑病较理想的影像检查方法。常规MRI虽应用最普遍,但往往难以达到早期诊断及精准识别的目的,也不能评估脑功能情况。目前多模态MRI技术,包括弥散加权成像、弥散张量成像、磁敏感加权成像、氢质子磁共振波谱成像、流体衰减反演恢复等,具有灵敏度高、特异性强、信号对比度高、反映脑组织代谢水平等优势,可以弥补常规MRI技术的不足,对早期诊断及鉴别新生儿脑病,以及评估脑功能和判断预后具有广泛的应用前景。

病例01(2023):以代谢病为主要表现的新生儿狼疮综合征1例

本文报道1例以代谢病为主要表现的新生儿狼疮综合征病例。患儿因反应差伴呕吐1 d就诊于苏州大学附属儿童医院,患儿表现为皮肤花纹、前囟饱满和血白细胞计数增多,提示新生儿败血症可能,遗传代谢病筛查显示赖氨酸尿性蛋白耐受不良不排除。患儿及其母亲和姐姐狼疮相关自身抗体与抗核抗体阳性,患儿赖氨酸尿性蛋白耐受不良相关基因SCL7A7无功能性变异,故确诊以代谢病为主要表现的新生儿狼疮综合征。予甲泼尼龙治疗,效果显著,复查血遗传代谢指标无特异性变化,出院后每月随访复查抗体滴度下降。

新生儿坏死性小肠结肠炎76例高危因素分析

目的探讨围生期因素、喂养方式、服用益生菌、发病前合并疾病及发病前接受机械通气等对新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)发病的影响,旨在提供NEC发生的高危因素。方法选取2011年1月至2016年1月于中国医科大学附属盛京医院第一新生儿病房住院治疗的76例NEC患儿为病例组,并随机选取同期住院的80例非NEC患儿为对照组。回顾性分析患儿的临床资料,包括新生儿一般情况、围生期情况、喂养方式、口服益生菌情况、发病前合并其他疾病情况及接受机械通气等19个项目,应用SPSS软件进行单因素及多因素分析。结果单因素分析结果显示,病例组合并窒息、败血症、低血糖以及接受机械通气的比例显著高于对照组,口服益生菌的比例显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Logistic多元回归分析结果显示,败血症(OR=6.531)、低血糖(OR=2.785)、机械通气(OR=3.448)为NEC发病的危险因素,口服益生菌为NEC的保护因素(OR=0.417)。结论败血症、低血糖及机械通气为NEC发病的危险因素,口服益生菌为NEC的保护因素。临床上应合理分析这些影响因素,早期预防及干预NEC,以改善患儿预后。

支气管肺发育不良早产儿早期肺外合并症的临床分析

目的通过对支气管肺发育不良（bronchopulmonarydysplasia，BPD）早产儿生后早期脑室周围一脑室内出血（periventricularintraventricularhemorrhage，PVH-IVH）、脑白质损伤、胃肠外营养相关性胆汁淤积综合征（parenteralnutritionassociatedcholestasis，PNAC）及代谢性骨病发病情况的临床分析，以期对BPD患儿肺外并发症的预防和监测进行指导。方法回顾性分析2014年9月至2015年12月于中国医科大学附属盛京医院新生儿病房住院并明确诊断BPD的87例早产儿（BPD组），随机选择同期住院非BPD早产儿90例为对照组（非BPD组），分析两组PVH-1VH、脑白质损伤、PNAC及代谢性骨病等肺外并发症的发生率。结果BPD组早产儿PVH—IVH发病率[26．4％（23／87）]高于非BPD组[11．1％（10／90）]（P〈0．01），其中BPD组I-Ⅱ级PVH—IVH发病率也明显升高[24．1％（21／87）比11．1％（10／90）]（P〈0．05），而Ⅲ～Ⅳ级PVH—IVH发生率两组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。BPD组早产儿脑白质损伤发生率[33．3％（29／87）]明显高于非BPD组[16．7％（15／90）]（P〈0．05），其中的严重类型脑室周围白质软化的发生率BPD组也明显增高[13．7％（12／87）比2．2％（2／90）]（P〈0．05）。此外，BPD组早产儿PNAC[22．9％（20／87）比5．5％（5／90）]、代谢性骨病[17．2％（15／87）比3．3％（3／90）]及代谢性骨病中有影像学改变[6．9％（6／87）比0]的发生率均高于非BPD组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论BPD患儿较非BPD早产儿更易合并PVH—IVH、脑白质损伤、PNAC及代谢性骨病等早期肺外并发症，生后早期合理预防及定期监测肺外并发症的发生对提高BPD患儿生存质量至关重要。

支气管肺发育不良新生鼠模型肺泡上皮细胞标志物的表达变化及意义

目的研究高氧致支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）新生鼠模型中Ⅰ型肺泡上皮细胞（type Ⅰ alveolar epithelial cells，AECⅠ）和Ⅱ型肺泡上皮细胞（type Ⅱ alveolar epithelial cells，AECⅡ）特异性标志物表达变化及其意义。方法80只新生Wistar大鼠，于生后12h内随机分为模型组（吸入氧浓度为85％）和对照组（吸入空气），每组40只。于暴露第7、14、21天，分别进行肺组织HE染色观察病理学改变，免疫荧光双标染色观察AECI标志物水通道蛋白5（aquaporin 5，AQP5）及AECⅡ标志物表面活性蛋白C（surfactant protein C，SP—C）表达及定位，Western blot方法检测AQP5和SP—C的蛋白表达水平，real—time PCR方法检测AQP5和SP—C的mRNA表达水平。结果模型组大鼠肺组织表现出肺泡数目减少，体积增大，结构简单化，肺泡间隔增厚，次级分隔减少等肺泡化障碍表现。免疫荧光双标染色可见，模型组AQP5及SP-C表达明显增多，表达位置紊乱，且双染细胞／SP—C阳性细胞的比例明显增高（P〈0．001）。与对照组比较，模型组中AQP5及SP-C蛋白表达从高氧暴露7d开始增加，增高的趋势持续至21d。模型组中mRNA表达水平，AQP5从暴露7d开始，SP-C从14d开始较对照组明显升高（P〈0．05），且两组间差异随高氧暴露时间延长更加明显（P〈0．05）。结论暴露高氧中的新生鼠BPD模型肺组织中，AECⅠ标志物AQP5及AECⅡ标志物SP-C均表达上调，发生转分化的AECⅡ明显增多，表明在BPD肺损伤后的修复中存在AECⅡ过度转分化现象。

经外周静脉置入中心静脉导管导致极低出生体重儿心包积液及心包填塞一例并文献复习

目的总结经外周静脉置入中心静脉导管(peripherally inserted central venous catheter,PICC)引起心包积液/心包填塞的流行病学特征和临床特征,以提高临床医生对本病的认识及治疗水平。方法对2018年12月中国医科大学附属盛京医院新生儿科收治的1例极低出生体重儿发生PICC导致新生儿心包积液/心包填塞病例的临床资料及诊疗经过进行总结,并结合文献报道对PICC导致心包积液/心包填塞病例流行病学特征和临床特征进行分析。结果患儿,女,胎龄30周+1,出生体重1370 g。生后Apgar评分1 min为5分,5 min为9分。于生后第2天经右上肢贵要静脉置入PICC并持续静脉输液。生后第8天突然出现心率增快及代谢性酸中毒,实验室检查感染指标无异常,听诊心音遥远,心脏超声提示大量胸腔积液。立即拔除PICC,并行心包穿刺术,放出35 mL乳白色心包积液,患儿状态迅速好转,心音有力,代谢性酸中毒纠正。文献检索共有14篇报道24例PICC导致新生儿心包积液病例,并本例资料共25例。25例患儿中,胎龄<28周的超早产儿15例(60.0%),28~34周的早产儿9例(36.0%),足月儿1例(4.0%)。平均出生体重(1080.6±585.5)g。置管时间中位数为3 d,发生心包积液的PICC使用时长中位数为7 d。导管置入部位以右肘前静脉及右贵要静脉为主,其余经大隐静脉等部位置入。导管尖端位置以直接位于右心房所占比例最高[13例(52.0%)],其次为由上腔静脉漂移至右心房[7例(28.0%)]。2例患儿以心搏骤停为主要表现,1例患儿表现为心率增快,1例患儿表现为代谢性酸中毒,1例患儿表现为原有疾病恶化,其余患儿均表现为心动过缓、呼吸暂停及低血压。9例死亡,病死率36.0%,16例(64.0%)好转。进行心包穿刺患儿中,仅1例死亡。结论在任何置入PICC的极低出生体重儿中,当临床出现难以解释的呼吸循环系统不稳定状态,包括心动过速、心动过缓、呼吸暂停、低血压、代谢性酸中毒等情况时,均应考虑到PICC导致的心包积液/心包填塞,及早诊断并进行心包穿刺对挽救生命至关重要。

高氧暴露对新生鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化水平的调节作用

目的研究体内及体外高氧暴露对Ⅱ型肺泡上皮细胞（typeⅡ alveolar epithelial cells，AECⅡ）转分化水平的影响，旨在阐明支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）肺上皮损伤的发生机制。方法新生Wistar大鼠生后随机分为对照组（吸入空气）和模型组（吸入氧浓度为85％），于7d、14d、21d进行动物模型肺组织取材并分离AECⅡ。细胞标本检测Ⅰ型肺泡上皮细胞（type Ⅰalveolar epithelial cells，AECI）特异性标志物水通道蛋白5（aquaporin5，AQP5）及AECⅡ标志物表面活性蛋白C（surfactant proteinC，SP-C）表达。从正常新生鼠肺分离的AECⅡ在体外原代培养24h后随机分为常氧组（21％O2）和高氧组（85％O2），培养48h后收集细胞，应用免疫荧光双标染色观察AQP5和SP-C表达及定位，Western blot方法检测AQP5和SP—C蛋白表达水平，荧光实时定量PCR方法检测AQP5和SP-C mRNA表达水平。结果BPD模型组大鼠AECⅡ中AQP5蛋白表达从7d开始较对照组增多，SP-C蛋白表达从14d开始较对照组减少。模型组中AQP5mRNA从7d开始表达增多，SP-C mRNA从7d开始表达减少（P〈0．05），且随高氧暴露时间延长两组间差异更加显著。由正常新生鼠肺分离的AECII进行体外原代培养后，免疫荧光双染可见高氧组较常氧组AQP5表达增多，SP-C表达减少，双染细胞明显增多。蛋白和mRNA定量检测结果均提示高氧组较常氧组AQP5表达增多，SP-C表达减少（P〈0．01）。结论无论体内还是体外高氧暴露下，AECⅡ特异性标志物SP—C表达下调，而AECⅠ特异性标志物AQP-5表达上调，提示AECⅡ过度转分化参与高氧肺损伤后的修复过程。

新生儿线粒体病

线粒体病(MD)是指由于线粒体DNA或核DNA突变导致的氧化磷酸化系统或丙酮酸脱氢酶复合物功能障碍而出现的能量代谢障碍性疾病,可发生于从新生儿期到成人期的任何年龄,并常以综合征发病。新生儿期主要临床表现包括早产、宫内生长受限、肌张力低下、呼吸困难、惊厥、喂养困难、高乳酸血症等,缺乏特异性。新生儿期发病的综合征包括Leigh综合征、线粒体脑肌病-乳酸酸中毒-卒中样发作综合征、Alpers综合征、儿童肌脑肝病谱系障碍、Barth综合征及Pearson综合征等。目前MD需依赖临床症状、生化检测、神经影像学、组织学检测和基因检测等技术进行诊断,其治疗尚缺乏特效药物,探索新的治疗途径,如基因治疗和外源性线粒体移植,是未来研究的方向。

缺血缺氧致新生鼠脑白质损伤模型中骨形态生成蛋白4表达及作用的研究

目的研究在缺血缺氧致新生鼠脑白质发生、发展中，脑白质损伤超微结构变化，以及骨形态生成蛋白（bone morphogenefic protein，BMP）4基因及蛋白表达动态变化和对髓鞘化的影响。方法3日龄Sprague—Dawley新生大鼠共152只，按随机数字表法随机分为脑白质损伤组（n=76）和对照组（n=76）。采用结扎右侧颈总动脉伴低氧（8％O292％N2）方法制备脑白质损伤模型，分别于手术后3d、7d、14d及21d采集标本。光镜下观察脑组织形态学改变，透射电镜下观察髓鞘形成情况，免疫组织化学观察BMP4和髓鞘化标志物髓磷脂碱性蛋白（myelin basic protein，MBP）的表达和定位，Western blot方法测定BMP4和MBP的蛋白表达水平，real—timePCR方法分析BMP4mRNA的表达情况。结果对照组大鼠的脑白质中细胞结构清晰，纤维走行紧密有序，脑白质损伤组大鼠脑白质细胞稀疏，自质疏松呈筛网状，纤维走向紊乱。电镜下可见对照组髓鞘形态规则，密度均匀，厚度一致，而脑白质损伤组髓鞘疏松、变薄，板层分离，边界不清。免疫组织化学、Western blot及real—timePCR结果均提示，对照组内BMP4蛋白及mRNA表达水平随日龄增大无明显变化，脑白质损伤组内随缺血时间延长BMP4表达迅速增加。两组间比较，从手术后3d起，脑白质损伤组较对照组表达增多（P〈0．05），随缺血时间延长两组间差异更加明显。免疫组织化学及Western blot方法分析MBP蛋白表达，发现两组内MBP蛋白表达均随日龄增长而逐渐增加，但两组间比较，14d和21d时脑白质损伤组MBP蛋白表达明显较对照组减少，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论缺血缺氧致新生鼠脑白质损伤发生时存在髓鞘化障碍，而此过程中BMP4基因及蛋白表达均显著增加，提示BMP4可能参与脑白质损伤时髓鞘化障碍的发生。

新生鼠高氧性肺损伤模型中肺泡上皮细胞表达密闭小带蛋白-1及密闭小带蛋白-1相关核酸结合蛋白的研究

目的 以往研究已发现高氧性肺损伤时肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell,AECs)存在增殖及转分化异常,本研究旨在明确高氧性肺损伤模型中AECs表达密闭小带蛋白-1( zonula occludens 1,ZO-1)、ZO-1相关核酸结合蛋白(ZO-1-related nucleic acid binding proteins,ZONAB)的情况,探讨其对肺损伤时肺组织中AECs增殖及转分化的影响.方法 足月新生Wistar大鼠于生后12 h内随机分为2组:模型组(吸入氧浓度为85%)和对照组(吸入空气).于暴露7、14、21 d留取肺组织标本,采用组织免疫荧光双标染色观察Ⅱ型肺泡上皮细胞( type Ⅱ alveolar epithelial cells,AECⅡ)表达ZONAB情况.同时,于各时间点分离动物模型肺组织中AECⅡ,通过Western blot和Real-Time PCR等方法检测两组肺组织中及AECⅡ中ZO-1、ZONAB蛋白和mRNA表达水平.另外,从正常新生鼠肺组织分离AECⅡ,分为模型组(氧浓度85%)和对照组(氧浓度21%),在体外培养48 h后检测ZO-1、ZONAB蛋白和基因表达水平,并进行细胞免疫荧光染色观察ZONAB的表达量及表达部位.结果 肺组织免疫荧光双标染色可见模型组AECⅡ表达ZONAB较对照组显著减少.从动物模型肺组织分离的AECⅡ标本中, ZO-1、ZONAB的蛋白及mRNA表达水平从高氧暴露7 d开始较对照组明显减少.从正常新生鼠肺组织分离AECⅡ,在体外高氧条件下培养48 h后,ZO-1、ZONAB的蛋白及mRNA表达水平均较对照组显著降低.细胞免疫荧光染色结果发现,对照组中ZONAB表达较多,且表达部位多位于细胞连接处及细胞核内,而模型组ZONAB表达量较对照组明显减少,且表达部位聚集于胞浆,细胞连接处及核内均表达很少.结论 ZO-1作为紧密连接相关蛋白,其在高氧性肺损伤模型中表达下调,除了破坏肺上皮屏障介导肺水肿发生外,还通过调节转录因子ZONAB表达从而参与AECs增殖及分化的调节,提示这可能是导致高氧性肺损伤发生的又一途径.