维持血液透析患者血清铝负荷及其相关因素研究

背景铝在人体内的蓄积给维持血液透析患者带来了严重危害,然而目前国内对血液透析患者血清铝水平的大规模调查尚不多见。目的检测福建省慢性肾衰竭维持血液透析患者血清铝水平,探讨影响血清铝水平的因素。方法收集2012年1月—2013年12月福建省厦门市、漳州市、龙岩市、泉州市、三明市15所医院透析中心慢性肾衰竭维持血液透析患者和健康体检者血清标本,共收集慢性肾衰竭维持血液透析患者449例,健康体检者262例,采用AA800原子吸收光谱仪检测血清中铝水平。采用多重线性回归分析影响慢性肾衰竭患者血清铝水平的因素。结果慢性肾衰竭维持血液透析患者血清铝水平为(18.34±6.16)μg/L,高于健康对照者的(1.57±0.45)μg/L(t=2.324,P<0.05)。52例(11.6%)慢性肾衰竭维持血液透析患者血清铝水平超过了国际肾脏病组织推荐的慢性肾衰竭患者血清铝允许上限值(30μg/L)。男性慢性肾衰竭维持血液透析患者血清铝水平为(18.45±6.48)μg/L,女性为(18.22±5.64)μg/L,两者比较,差异无统计学意义(t=1.058,P>0.05)。各透析中心透析液及所在城市饮用水铝水平比较,差异有统计学意义(F=4.252、3.316,P<0.05)。服用磷结合剂、Vit D制剂、注射促红细胞生成素(EPO)及近期接受输血治疗的血液透析患者血清铝水平高于未接受上述治疗患者(P<0.05)。慢性肾衰竭维持血液透析患者中不同饮茶量、食加工面食比例者血清铝水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同食肉食比例患者血清铝水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。多重线性回归结果显示,饮茶量、面食饮食、饮用水铝含量、每日尿量、透析频率、透析液铝含量、服用磷结合剂、服用Vit D、注射EPO、输血为影响慢性肾衰竭患者血清铝水平的因素(P<0.05)。结论福建省慢性肾衰竭维持血液透析患者铝负荷较高,饮食习惯、治疗措施及透析情况影响患者血清铝水平。

慢性肾衰竭患者血清铝负荷及相关因素分析

目的探讨慢性肾衰竭患者血清铝水平的变化及其影响因素。方法收集530例慢性肾衰竭患者与262例健康体检者血清标本,采用石墨炉原子吸收光谱法测定血清中铝含量。对所得数据和资料进行统计学处理,多元线性回归筛选分析慢性肾衰竭患者血清铝的影响因素。结果慢性肾衰竭患者血清铝水平为17.33±3.15μg/L,显著高于正常人血清铝水平1.57±0.45μg/L(P<0.001);慢性肾衰竭患者血清铝水平与性别、体重、身高、血压、饮食中肉食所占的比例无显著相关,与尿量周透析次数成负相关,与年龄、使用维生素D(VitD)、红细胞生成素(EPO)和磷结合剂、近期接受输血、透析次数成正相关,与透析方式显著相关。结论慢性肾衰竭患者铝负荷较高,肾功能下降、饮食习惯、治疗措施及透析情况影响患者血清铝水平。

尿液蛋白质组学研究进展

在蛋白质组学广泛深入到医学界各个研究领域的同时,尿液蛋白质组学也取得了较大进展,在寻找各种泌尿系统及其它系统疾病早期诊断性标志物、探索疾病发生发展的机制方面取得了重要的研究成果。本文着重从蛋白质组学分析的角度,追踪尿液蛋白质组学研究的最新进展,对其研究方法和几种主要的实验技术及其对疾病诊断及临床应用中的研究进展做一概述。

单纯低钾饮食和低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙治疗维持性血液透析患者高钾血症的疗效比较

背景高钾血症是维持性血液透析患者常见的并发症,血液透析间期血钾波动幅度过大易增加不良心血管事件的发生风险,因此如何维持血液透析间期的血钾水平稳定十分重要。目的比较单纯低钾饮食和低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙治疗维持性血液透析患者高钾血症的临床疗效。方法回顾性选取2015年12月—2016年1月在厦门大学附属第一医院血液透析室行维持性血液透析且符合纳入标准的患者52例,血液透析前血钾≥5.0 mmol/L,按照患者用药情况分为对照组21例和研究组31例。对照组患者给予单纯低钾饮食,研究组患者在对照组基础上给予小剂量聚苯乙烯磺酸钙口服治疗。两组患者均行连续治疗,治疗1个月行相关检查。记录两组患者治疗前后血液透析前后血钾水平及其差值和血液透析前血钙、清蛋白(Alb)水平。结果治疗后所有患者血液透析前后血钾水平及其差值均低于治疗前(P<0.05);治疗前后所有患者血液透析前血钙、Alb水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前血液透析前后血钾水平及其差值和血液透析前血钙、Alb水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);研究组患者治疗后血液透析前血钾水平、血液透析前后血钾差值低于对照组(P<0.05);两组患者治疗后血液透析后血钾、血液透析前血钙、Alb水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后对照组患者血液透析前血钾水平、血液透析前后血钾差值均低于治疗前(P<0.05);治疗前后对照组患者血液透析后血钾、血液透析前血钙、Alb水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后研究组患者血液透析前后血钾水平及其差值低于治疗前(P<0.05);治疗前后研究组患者血液透析前血钙、Alb水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论单纯低钾饮食或低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙均能降低持续性血液透析患者血液透析前血钾水平,并能缩小血液透析前后血钾波动幅度,且低钾饮食联合小剂量聚苯乙烯磺酸钙的降钾效果优于单纯低钾饮食,不增加患者的钙负荷。

MPV、PDW联合PAIg对急性原发免疫性血小板减少症患儿骨髓巨核细胞成熟障碍诊断价值的研究

厦门大学附属第一医院检验科;厦门大学附属第一医院肾内科;厦门大学附属第一医院输血科;厦门大学附属第一医院血液科;摘要:目的:探讨平均血小板体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、血小板相关抗体(PAIg)在急性原发免疫性血小板减少症(aITP)患儿中的变化及其联合检测对aITP骨髓巨核细胞成熟障碍的诊断价值。方法:用Sysmex XN血细胞自动分析仪分别检测36例aITP患儿和33例未累及巨核细胞系的获得性血小板减少症患儿(ATP)的血小板数量及其相关参数、骨髓巨核细胞数量及其分类;应用流式细胞术分别检测2组PAIg水平;SPSS软件处理数据,分析两组患者MPV、PDW、PAIg的分布,经多因素Logistic回归分析患儿骨髓巨核细胞成熟的影响因素后,绘制ROC曲线,计算MPV、PDW、PAIg及其联合检测对aITP患儿骨髓巨核细胞成熟障碍的诊断的ROC曲线面积(AUC)、灵敏度和特异度。结果:与ATP患儿组相比,aITP组MPV、PDW及PAIg升高,Plt和产板型巨核细胞降低,组间差异均有统计学意义(P<0.05),而两组间RBC、WBC、中性粒细胞、淋巴细胞、单位面积巨核细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,Plt、MPV、PDW及PAIg进入回归模型,其回归模型有统计学意义(χ^2=65.491,P=0.000,R^2=0.713)。MPV+PDW+PAIg联合检测的AUC为0.863,其灵敏度和特异度分别为79.167%和89.697%,均高于单独检测及MPV、PDW、PAIg两两联合检测。结论:MPV及PDW用于aITP骨髓巨核细胞成熟障碍的诊断存在不足,联合PAIg检测能够提高诊断效能。

不同种类促红细胞生成素治疗维持性血液透析患者肾性贫血的效果

目的:比较使用不同种类促红细胞生成素(EPO)治疗维持性血液透析患者肾性贫血的疗效情况。方法:回顾性选取2014年4-7月笔者所在医院血透室维持性血液透析患者作为观察对象,透析时间≥3个月,同种EPO治疗超过3个月,根据所用EPO种类,分为重组人红细胞生成素-α(EPO-α)组和重组人红细胞生成素-β(EPO-β)组,对两组患者的基本资料、贫血达标指标、EPO的使用情况、影响EPO使用疗效的指标进行横断面调查,并进行统计分析。结果:两组患者年龄、性别构成、原发病构成、干体重、每周透析次数等一般资料,以及治疗前后血红蛋白、血清铁、尿素氮下降率等指标差异无统计学意义(P>0.05)。EPO-β组注射次数明显高于EPO-α组,周平均EPO用量明显低于EPO-α组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:治疗维持性血液透析患者肾性贫血,达到相同的Hb靶目标,EPO-β的用量明显低于EPO-α。

氯沙坦防治糖尿病肾病的比较研究

目的观察在微量白蛋白尿发生前后应用氯沙坦对糖尿病肾病(DN)的治疗作用及其机制。方法单侧肾切除的链脲霉素(STZ)糖尿病大鼠,随机分为正常对照组、DN组、早期治疗组和晚期治疗组。早期治疗和晚期治疗组分别于糖尿病模型建立后即刻或第9周起开始给予氯沙坦20 mg.kg-1.d-1灌胃,疗程均为8 w。第16周时,观测肾组织形态学及肾功能变化,并采用荧光实时定量RT-PCR检测肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、;纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)等细胞因子的表达情况。结果DN组大鼠尿微量白蛋白排泄率(UAER)持续上升;血肌酐(Scr)、肾脏肥大指数(KW/BW)、肾小球平均体积(MGV)、系膜面积比(FMA)以及肾脏TGF-β1、CTGF、PAI-1和纤维连接蛋白(FN)的mRNA表达均明显升高,而肌酐清除率(Ccr)已开始下降。早期治疗和晚期治疗组以上指标均明显改善,但两组之间无显著差异。结论氯沙坦可通过下调肾脏细胞因子基因表达,起到肾脏保护作用;但在微量白蛋白尿出现之前进行干预并不比在微量白蛋白尿出现之后进行治疗的效果更好。

肾淋巴循环障碍对大鼠肾功能和组织结构的影响

目的:观察肾淋巴循环障碍对大鼠肾脏功能及组织结构的影响。方法:雄性Wister大鼠48只,随机分为模型组和假手术对照组各24只。每组分别在术后1、2、4、8周各处死6只。测定24 h尿蛋白和血肌酐。PAS和Masson染色观察肾组织病理改变,并行半定量分析。透射电镜观察肾脏超微结构改变。结果:模型组大鼠尿蛋白显著增加,且随时间推移肾功能逐渐减退,并出现明显的组织病理改变,尤其小管损伤指数及小管间质纤维化指数明显高于对照组(分别为P<0.01和P<0.05)。电镜结果显示,肾小球内皮细胞中线粒体多出现低密度或空化,系膜插入,局部足突细胞融合。结论:肾淋巴循环障碍可致大鼠肾脏功能及小管间质损害,并随时间延长而加重,提示肾淋巴循环障碍为引起慢性肾损害的原因之一。

变异链球菌clpP基因启动子的克隆及活性测定

目的克隆变异链球菌clpP基因启动子,并进行初步验证。方法 PCR分别扩增变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列FclpP及其突变体FclpP-ΔRS,插入β-半乳糖苷酶(β-glucuronidase,gusA)报道基因表达载体pIB107 BamHI/XhoI酶切位点之间,构建clpP基因5′-侧翼序列及其突变体gusA报道基因表达载体pFclpP和pFclpP-ΔRS,PCR、酶切及测序鉴定;经Bgl II线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆,得到clpP基因5′-侧翼序列及其突变体gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS,经PCR及测序鉴定后,测定SClpP、SClpP-ΔRS、阳性对照SAmi和阴性对照SIB107的GusA活性。结果成功扩增出变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列及其突变体;变异链球菌clpP基因gusA报道基因表达载体经PCR、酶切及测序鉴定正确无误;PCR及测序结果表明成功构建clpP基因5′-侧翼序列及其突变体变异链球菌gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS;GusA活性测定证实变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列及其变体gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS的GusA活性分别是阴性对照pIB107的34.6和8.7倍,是阳性对照松鼠葡萄球菌ami基因启动子片段gusA报道基因表达株活性的5.2和1.3倍,提示插入片段FclpP和FclpP-ΔRS具有较强的启动子活性。结论成功定位并克隆变异链球菌clpP基因启动子,为今后研究clpP基因上游调控序列提供试验和理论依据。

弓形虫乳酸脱氢酶LDH2基因启动子的克隆及鉴定

目的克隆弓形虫乳酸脱氢酶LDH2基因启动子并进行初步鉴定。方法 PCR扩增出LDH2基因5′侧翼序列系列截短突变体,定向插入载体pTX3–basic的Kpn I/Xhol I酶切位点之间,转化大肠埃希菌Top 10,氨苄西林筛选,建立重组LDH2基因5′侧翼序列系列截短突变体荧光素酶表达载体。转染刚地弓形虫速殖子,利用荧光素酶检测试剂盒测定所克隆片段的启动转录活性。结果成功扩增出LDH2基因5′侧翼序列系列突变体;系列重组荧光素酶表达质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确无误;系列重组荧光素酶表达质粒在弓形虫速殖子中的相对活性与阴性对照pTX3-basic基本相同,而在弓形虫缓殖子中,除pTX3-293和pTX3-193外,其他重组荧光素酶活性均是阴性对照pTX3-basic的40～50倍之多,是阳性对照pTX3-control的1.2～1.5倍,说明插入片段具有较强的启动子活性。结论成功定位并克隆弓形虫LDH2基因启动子,为今后研究LDH2基因上游调控序列提供试验和理论依据。

TRB3与胰岛素抵抗

Tribbles是最近几年新发现的一个假性蛋白激酶家族，其特有的生物学特性及其在癌症和糖尿病发生发展过程中对细胞信号传导通路和生化过程的调控作用，引起了研究人员的广泛关注。其中，TRB3与胰岛素抵抗的关系尤为引人注目。现就Tribbles家族、TRB3及其与胰岛素抵抗关系的研究做一简要概述。

缬沙坦联合霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾脏TRAIL及NF-KB的影响

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）及其核因子-kB（NF-kB）在糖尿病大鼠肾组织的表达及其联合应用缬沙坦（valsartan）和霉酚酸酯（MMF）对糖尿病大鼠肾组织TRAIL及其NF-kB的影响。方法采用一侧肾切除腹腔注射STZ（55mg／kg）建立糖尿病大鼠模型，将80只Wistar大鼠随机分为：对照组（NC）、糖尿病组（DM）、缬沙坦治疗组（DM＋V）、霉酚酸酯治疗组（DM＋M）、联合治疗组（DM＋V＋M）。取材，检测各项生化指标，并采用荧光实时定量RQ—PCR方法检测肾皮质TRAIL及其NF-kB的mRNA的表达。免疫组织化学测定肾组织TRAIL及其NF-kB蛋白的表达。结果①DM组24h尿蛋白和肾重／体重比均高于NC组（均P〈0．05），并随糖尿病时程延长逐渐增高，于DM12周时达到最大值；血白蛋白在DM8周组开始下降（P〈0，01），并逐渐降低；血肌酐、尿素氮于DM16周组开始下降（P〈0．01）。各治疗组与DM8周组相比较，肾重／体重比变小（P〈0.05），24h尿蛋白总量降低（均P〈0．05），血白蛋白回升（P〈0．05）。以联合组最为明显。②荧光定量PCR显示TRAIL在12周前表达降低（均P〈0．01），16周时其表达量明显升高（P〈0．01）。各治疗组与DM8周组比较表达增加（P〈0．05），以霉酚酸酯组和联合组最为明显（P〈0．01）。DM组NF-kB的mRNA表达随时间延长逐渐增强（P〈0．01），各治疗组与DM8周组比较表达均降低（均P〈0．05），以联合组最为明显。③免疫组化显示TRAIL主要在肾曲小管表达，肾小球和脉管系统没有表达。DM各组在12周前表达均降低（均P〈0．05），差异有统计学意义；16周后表达明显增强（均P〈0．01）。各治疗组阳性细胞数明显增加（均P〈0．05）。NF-kB在肾小球和肾小管均有表达，DM各组NF-kB表达量随时间逐渐增高，各治疗组可显著降低NF-kB表达。结论TRAIL作为自身免疫系统的一个重要监控因子，其在糖尿病大鼠肾脏中的表达说明其密切参与了糖尿病肾病的发生发展，机制可能由NF-kB调节。早期缬沙坦和霉酚酸酯联合干预治疗可通过来增强TRAIL的表达，对肾脏产生保护作用。

霉酚酸酯对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

霉酚酸酯（MMF）是一种新型的免疫抑制剂。本研究旨在探讨MMF对不同浓度葡萄糖所致的系膜细胞增殖及细胞外基质增多是否有抑制作用。

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体系统和核因子KB在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）系统在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法观察TRAIL及其死亡受体4（DR4）、诱骗受体2（DcR2）和核因子KB（NF-KB）在糖尿病大鼠不同时期肾脏中的表达及分析其与肾功能的关系。将80只Wistar大鼠随机分为对照组（NC组）和糖尿病组（DM组），一侧肾切除后，腹腔注射链脲佐菌素（STZ，55mg／kg）建立糖尿病大鼠模型。在第4、8、12、16周末，随机处死各组8只大鼠，收集血液、尿液和肾组织，检测血生化指标、尿蛋白量（24h）和肥大指数等。应用荧光实时定量RT-PCR和免疫组织化学的方法检测肾皮质TRAIL及其受体DR4、DcR2和NF-KB的mRNA和蛋白的表达情况。结果各时间点DM组大鼠尿蛋白量（24h）和肥大指数（肾质量，体质量）均显著高于NC组（P〈0．05）；血白蛋白在第8周末开始显著低于NC组（P〈0．01）；Scr、BUN于第16周末显著高于NC组（P〈0．01）。DM组大鼠TRAIL及其受体DR4mRNA在第4、8及12周末时表达均显著低于NC组（P〈0．01）；第16周末时表达显著高于NC组（P〈0．01）。DM组大鼠DcR2mRNA在第4、8及12周末时表达均显著高于NC组（P〈0．01）；NF-KB的基因表达均显著高于NC组（P〈0．05）。免疫组化结果显示TRAIL及其受体DR4、DcR2主要在肾小管表达，而在肾小球和脉管系统未见表达；NF-KB在肾小球和肾小管均有表达；TRAIL及其受体和NF-KB在各组表达趋势与PCR结果一致。结论TRAIL系统作为调节细胞凋亡的一组重要因子，参与了糖尿病肾病的发生发展。

肾淋巴循环障碍致肾小管间质纤维化及对转化生长因子β1和Smad2／3表达的影响

目的探讨肾淋巴循环障碍对大鼠肾小管间质纤维化的作用及其与TGF-β1、Smad2/3表达变化的关系。方法雄性Wistar大鼠48只,随机分为淋巴循环障碍模型组和假手术对照组各24只。分别在术后1、2、4、8周每组各处死6只。测定尿蛋白量（24h）和Scr。PAS和Masson染色观察肾组织病理改变。用实时PCR检测TGF-β1、Smad2/3、Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA的表达量。用免疫组化和（或）Western印迹方法检测肾组织ColⅠ、TGF-β1、Smad2/3和磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）的蛋白表达量及主要表达部位。结果模型组大鼠尿蛋白显著增加,随着时间推移肾功能逐渐减退,并出现明显的组织病理改变,小管间质损伤指数明显高于对照组（P＜0．05或P＜0．01）,并随时间延长而逐渐加重。肾组织中ColⅠ、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白和（或）基因表达水平也明显增高（P＜0．01）,且主要表达在肾小管上皮细胞及肾间质。结论肾淋巴循环障碍可导致大鼠肾脏功能及小管间质的损害,并随着时间的延长而加重。其作用机制可能与激活TGF-β-Smad途径,导致肾小管间质纤维化有关。

变异链球菌腺苷磷酸硫酸酶的原核表达及功能研究

目的构建变异链球菌aps基因原核表达载体,表达纯化目的蛋白,继而对其生物学功能进行初步鉴定。方法以变异链球菌UA159株基因组DNA为模板PCR扩增变异链球菌aps基因编码区,插入原核表达载体pASK-IBA43plus,转化E.coli Top 10,无水四环素诱导His-APS蛋白表达,经Ni-NTA纯化后,检测His-APS蛋白腺苷磷酸硫酸酶活性及核糖核酸酶活性。结果 PCR扩增出933bp的aps基因开放读码框,成功构建aps基因原核表达载体pASK-aps,并在E.coli Top 10中诱导表达,SDS-PAGE检测重组His-APS蛋白分子质量单位为38ku,该蛋白在Mg2+及Mn2+存在条件下能水解pAp,且呈时间及浓度依赖性,但不能降解Cy5标记的随机6nt寡核苷酸探针。结论重组His-APS蛋白具有腺苷磷酸硫酸酶活性,呈时间及浓度依赖性,但不具有核糖核酸酶活性。