嗜热毛壳菌纤维素酶(CBHⅡ)cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达

嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilumCT2是一种土壤腐生菌,可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。RACEPCR获得嗜热毛壳菌纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)的编码基因(cbh2)。DNA序列分析表明cbh2的开放阅读框由1428个碱基组成,编码476个氨基酸。推断的氨基酸序列包含一个典型真菌纤维素酶的糖结合域(CBD)、催化域(CD)以及二者之间富含脯氨酸和羟基氨基酸的连接桥。根据氨基酸序列推算该酶分子量为53kD,属于糖苷水解酶第六家族,具有该家族催化保守区的典型特征。PCR扩增cbh2的成熟蛋白编码基因,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解酶蛋白的重组表达载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,小规模发酵量达1.2mgmL。经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fastflow阴离子层析等步骤纯化了该重组表达蛋白。SDSPAGE得到重组蛋白分子量为67kD,与从嗜热毛壳菌中纯化的该酶分子量一致。该重组纤维二糖水解酶作用的最适合温度50℃,最适pH4.0,在70℃的半衰期为30min,具有较好的热稳定性。

嗜热毛壳菌CT2纤维二糖水解酶Ⅰ在毕赤酵母中的高效表达

嗜热毛壳菌ChaetomiumthermophilumCT2可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。RT-PCR扩增cbh1成熟蛋白的编码基因,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解酶的重组表达载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,小规模发酵量达1.42mg/mL。表达蛋白分泌到培养基中,分子量约80kD;以脱脂棉为底物测得酶活为21U/mL。表达蛋白在60℃稳定,70℃保温60分钟仍保持90%的酶活力,具有较高的热稳定性。

日本进口食品检验检疫监管体系解析

为保障进口食品安全卫生质量,日本建立了严密的进口食品检验检疫监管体系,主要涉及食品安全法律法规体系、食品安全监管机构、进口食品监控指导计划和检查制度、对进口违规食品的处置措施等方面。企业更好地了解这些规则,对保障输日食品符合日本规定,促进贸易持续顺利开展具有重要作用。

如何办理进口食品境外生产企业注册

2021年4月12日,海关总署发布《中华人民共和国进口食品境外生产企业注册管理规定》(海关总署令第248号),自2022年1月1日起实施。本文将结合其内容,以"首次注册申请"为例,通过问答的形式详细梳理办理进口食品境外生产企业注册的要点。注册申请在哪里办理?境外生产企业进行进口食品境外生产企业的注册申请.