猪坏死杆菌病的常见类型与防控措施

坏死杆菌病是猪养殖时常见的一类细菌性疾病,其类型较多,结合发病患病部位不同可分为坏死性皮炎、坏死性鼻炎、坏死性口炎、坏死性肠炎4种。坏死杆菌病的发生,会对猪的健康生长产生极大的影响,严重的甚至会导致死亡,造成巨大经济损失,因此做好防控工作具有重要的现实意义。文章着重对猪坏死杆菌病的类型及综合防治措施展开了深入研究。

流产嗜衣原体TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速、准确检测流产嗜衣原体(C.abortus)Taq Man-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据C.abortus主要外膜蛋白基因的特异保守序列设计引物及探针,并优化反应条件,建立了检测C.abortus的荧光定量PCR方法。结果表明,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.6×103拷贝/μL^1.6×107拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数为0.9999。该方法仅对C.abortus的靶基因扩增呈阳性,而对鹦鹉热嗜衣原体、家畜嗜衣原体、鼠衣原体、沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体、猪源衣原体核酸扩增结果均为阴性,特异性强;其最低检出限为1.6拷贝/μL;组内和组间重复性试验变异系数均小于3%,具有良好的重复性。利用建立的方法和普通PCR方法同时对225份临床样品进行检测,结果显示荧光定量PCR检出率比普通PCR高4.5%,表现较高的灵敏度和准确性。本研究建立的方法对C.abortus的临床鉴别检测和疾病诊断具有重要意义。

动物源性葡萄球菌多重耐药基因cfr研究进展

葡萄球菌是畜禽化脓性感染、败血症或脓毒败血症的主要病原体,常引起奶牛乳腺炎、禽类葡萄球菌病、羔蜱脓毒症等疾病。由于抗生素的滥用,出现了大量耐药性葡萄球菌,其中携带多重耐药基因cfr的葡萄球菌广泛存在于在畜牧生产中。该类葡萄球菌通过cfr的编码产物作用于核糖体23SrRNA腺苷2503的C8位点,对氯霉素类、林可酰胺类、恶唑烷酮类、截短侧耳素类和链阳菌素A类耐药,为动物疫病防控带来了巨大挑战。论文综述了动物源性葡萄球菌中cfr的分布情况、耐药机制、基因环境及检测技术等方面的研究进展,为深入研究其传播机制、研发新型抗葡萄球菌药物及建立切实有效的cfr多抗预测预警体系提供参考。

宿主miRNA调节沙门氏菌感染的研究进展

Micro RNAs（mi RNA）是由真核细胞表达的一类长约19 nt～25 nt的内源性非编码小RNA分子,在调控宿主转录后的基因表达起着关键作用,为免疫细胞中的关键分子。在动物、植物以及病毒中均能够检测到mi RNA的存在,通过mi RBase数据库查到目前为止发现的mi RNA共有28645种,其中已经确定的小鼠mi RNA有1 000多种,

重庆市部分地区肉兔肌肉组织中农药、兽药多残留检测分析

为了调查研究重庆市肉兔中农药、兽药残留情况,按照国家标准对采自重庆市9个区、县的30批肉兔肌肉组织进行了农药、兽药多残留检测分析.结果表明,在被检肉兔肌肉组织中农药六六六、DDT的最大残留量分别为17.160μg/kg,25.285μg/kg,兽药四环素、金霉素、土霉素、地克珠利的最大残留量分别为2.420μg/kg,5.120μg/kg,0.592μg/kg,10.900μg/kg,16种磺胺类药物的残留范围为0.002~8.140μg/kg,氯霉素和呋喃唑酮均未检出.被检兔肉中2种农药和22种兽药残留量合格率均达到100%.结论:抽检的重庆市兔肉中农药、兽药残留指标符合我国现行国家标准、农业部行业标准以及欧盟标准.

规模化猪场非洲猪瘟防控措施分析

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒感染家猪和各种野猪,从而引起的一种急性、出血性、烈性传染病。规模化猪场生产安全的关键是要保障猪群的安全、健康,这关系到养猪业的安全和畜产品的稳定供应。基于此,对非洲猪瘟的危害性及流行特点进行分析,并针对当前非洲猪瘟防控现状,提出了规模化猪场非洲猪瘟防控措施。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌LAMP方法的建立

为建立快速检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）的鉴别方法，衣研究根据APP ApxIVA基因的保守区设计6条环介导等温扩增（LAMP）引物，利用Loopamp Realtime Turbidimeter LA-320c实时浊度仪对反应体系和条件进行优化，建立了APP的LAMP方法。结果显示：该方法在64℃下反应15rainDNA即可出现扩增，扩增后2～3min内即可判定结果，最低检测限为0．307ng／L，具有良好的重复性及稳定性，与其他病原菌无交叉反应，同时，试验结果可实现肉眼可视化观察。采用建立的LAMP方法与SN／T14472011标准公布的方法同时对36份临床疑似APP样品进行检测分析，结果显示：APP阳性10份，阴性26份，两种方法的符合率为100％。本研究建立的方法为防止猪传染性胸膜肺炎的传播提供了有效的检测手段。

沙门菌夹心DNA杂交检测方法的建立

为建立简便快速、特异检测沙门菌的方法,根据沙门菌invA基因序列,分别设计特异的捕获探针和检测探针,通过探针与目标rRNA结合,优化反应条件,建立了检测沙门菌的夹心DNA杂交方法。该方法在1.5h内即可完成全过程检测,加入TMB显色液可直接肉眼观察结果或采用酶标仪测定D450nm值判定结果。该方法对其他相关病原菌均无特异性反应,最低检测限为1.2CFU/mL,具有良好的精确度。批内变异系数在16.53%~17.97%之间,批间变异系数在16.33%~22.10%之间。本方法的建立为沙门菌的大批量、快速检测和防控提供了新的技术手段。

猪六种重要病原寡核苷酸芯片检测方法的初步建立

为建立同时鉴别检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）、副猪嗜血杆菌（HPS）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪肺炎支原体（Mhp）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪瘟病毒（CSFV）这6种病原的寡核苷酸芯片方法,根据这6种病原的特异保守序列,设计了6对特异性引物和探针,建立多重PCR体系,优化杂交参数,进行方法评估。结果显示,该方法检测APP、HPS、Mhp、PCV2、PRRSV及CSFV的灵敏度分别为5.8×10^2copies/L、7.8×10^3copies/L、6.8×10^3copies/L、6.3×10^2copies/L、4.8×10^3copies/L、5.5×10^2copies/L,且与猪源伪狂犬病病毒、猪细小病毒、日本乙型脑炎病毒、猪水疱病病毒、水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、小反刍兽疫病毒及沙门菌等9种病原无交叉反应。用建立的多重PCR对186份临床样本的检测结果显示,单一感染率为18.3%（34/186）,混合感染率为5.9%（11/186）,与测序验证完全一致。该方法为多种病原的流行病学调查和临床诊断提供了一种快速、高通量的检测手段。

重庆市肉兔肌肉组织中重金属残留量检测分析

为了调查研究重庆市肉兔生产中重金属的污染情况，依据《无公害食品产品抽样规范》（NY／T5344．6—2006），采用原子吸收光谱法和原子荧光光谱法，对重庆市肉免生产、销售的9个主要区县市售肉兔肌肉组织进行了镉、汞、铅、砷的检测分析。结果显示：在抽检的30批肉免肌肉组织中重金属镉、汞、铅、砷残留范围分别为0．081～1．777μg／kg、0．000-0．006Ixg／kg、0．582-12．211Ixg／kg、0．931—3．185μg／kg，均为痕量残留，不但符合我国GB2762—2012和NY5129—2002所规定的重金属限量标准，以及国际食品法典委员会（CAC）和欧盟（EU）制定的重金属限量标准，而且远远低于其各重金属污染物最大残留限量要求；被检肉免重金属镉、汞、铅、砷残留量合格率均达到100％。表明重庆市肉兔生产中未受到镉、汞、铅、砷的污染，免肉产品质量安全。

家畜嗜衣原体TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

为快速检测家畜嗜衣原体,选取家畜嗜衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因的高度保守区域,设计特异性引物和探针,通过对反应条件的优化,建立家畜嗜衣原体TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法的最低检测限为2.8×10copies/μL,在2.8×102~2.8×106 copies/μL范围内具有良好的线性关系,其标准曲线方程为y=-3.281 5x+41.396,线性相关系数r2=0.999 4,扩增效率为101.7%;该方法可特异性检测家畜嗜衣原体,对肺炎嗜衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热嗜衣原体、流产嗜衣原体等6种动物衣原体无交叉反应,特异性好;其批间重复试验和批内重复试验的变异系数分别为0.170 2%~0.467 2%、0.331 4%~2.796%,重复性良好。采用本试验建立的方法与OIE推荐的方法进行比较,二者的结果表现出良好的符合率。该方法的建立为家畜嗜衣原体的早期检测和流行病学调查提供了有效的检测手段。