HSP90反义RNA真核表达载体pcDNA-HSP90的构建与鉴定

在热诱导下生物体能合成一组高度保守的蛋白质,称为热休克蛋白(ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ),这一现象被称为热休克应答。热休克应答普遍存在于从细菌到高等真核生物的整个生物界,不仅能为热损伤所诱导,而且可为许多其他损伤因素及应激刺激,包括物理化学因素...

HSP90β蛋白低调肿瘤细胞系的建立

目的：通过转染ＨＳＰ９０β反义核酸重组子ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０于４株人消化系肿瘤细胞系，以建立ＨＳＰ９０β蛋白低调肿瘤细胞系，并研究ＨＳＰ９０β蛋白低调后细胞的生长情况。方法：用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导将ｐｅＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ７４０２及人食道癌细胞系Ｅｃ１０９，用Ｇ４１８进行筛选，用ＲＮＡ酶保护分析法鉴定ＨＳＰ９０β反义核酸的表达，用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＨＳＰ９０β蛋白的表达。用细胞生长曲线研究基因转染细胞的生长情况。结果：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１，ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９有ＨＳＰ９０β反义ＲＮＡ表达，这些细胞ＨＳＰ９０β蛋白表达低调。研究还发现这些细胞的生长受到不同程度的抑制，其中ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ及ＡＨ－Ｅｃ１０９细胞受抑程度更明显。结论：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１，ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９ ＨＳＰ９０β蛋白表达降低，细胞的生长受到不同程度的抑制。

HSP90β在细胞中的表达水平与化疗敏感性的相关研究

目的了解胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达，与化疗药物敏感性的关系及降低细胞ＨＳＰ９０β蛋白的表达是否影响化疗药物的敏感性。方法用免疫组化法检测胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达。ＭＴＴ法测定ＳＧＣ７９０１、ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞及其相应的ＨＳＰ９０β蛋白低表达细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１和ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ对化疗药物的敏感性，流式细胞仪测定细胞内药物含量。结果ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞ＨＳＰ９０β蛋白的表达高于ＳＧＣ７９０１细胞。ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞对ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＭＭＣ和ＣＴＸ的ＩＣ５０分别为０．３９８、１．２５、０．１９９和３ ９８１．０７μｇ／ｍｌ。ＳＧＣ７９０１对ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＭＭＣ及ＣＴＸ的ＩＣ５０分别为１．５８×１０－６、１．９９×１０－３、３．１×１０－２及６３０μｇ／ｍｌ。ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ相对于ＳＧＣ７９０１细胞对ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＭＭＣ和ＣＴＸ的耐药指数分别为２．５２×１０５、６．２８×１０２、６．４２和６．３２。

HSP90β反义核酸载体转染细胞HSP90β蛋白的表达

目的了解HSP90β 反义核酸转染细胞中HSP90β蛋白的表达。方法通过lipofectamine介导将HSP90β反义核酸重组子pcDNA HSP90转染人胃癌细胞系SGC7901、人胃癌多药耐药细胞系SGC7901/VCR、人肝癌细胞系HCC7402及人食管癌细胞系Ec109。经用G418进行筛选 ,对筛选出的阳性克隆用Westernblot检测HSP90β蛋白的表达。结果pcDNA HSP90转染人胃癌细胞系SGC7901 ,人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR ,人肝癌细胞系HCC7402及人食管癌细胞系Ec109后 ,用G418筛选出的阳性克隆 ,分别被命名为:AH SGC7901 ,AH SGC7901/VCR ,AH HCC7402及AH Ec109。Westernblot检测结果表明 ,AH SGC7901,AH SGC7901/VCR ,AH HCC7402及AH Ec109表达的HSP90β蛋白低于其亲本细胞。结论HSP90β反义核酸可封闭HSP90βmRNA ,使pcDNA HSP90转染的细胞AH SGC7901 ,AH SGC7901/VCR ,AH HCC7402及AH Ec109表达的HSP90β蛋白减少 ,为研究HSP90下调对肿瘤细胞生物学活性的影响提供了实验材料。