肺炎克雷伯菌外膜磷酸孔蛋白PhoE的生物信息学和免疫原性分析

为了探究肺炎克雷伯菌外膜磷酸孔蛋白(PhoE)的生物信息学特征和免疫原性,本试验通过在线服务器MultAlin分析不同肺炎克雷伯菌参考株的PhoE氨基酸序列保守性;通过ProtParam和SOMPA分析该蛋白的理化性质和二级结构;通过SWISS-MODEL进行PhoE同源建模;利用IEDB、DNASTAR软件预测该蛋白的优势B细胞抗原表位;通过质粒构建、重组蛋白表达和纯化获得PhoE重组蛋白,免疫接种小鼠后,应用Western blot和ELISA评价其免疫原性。氨基酸序列分析结果显示,PhoE是一种保守性较强的稳定亲水性蛋白质,其主要位于菌体外膜中;PhoE包含的α-螺旋、β-折叠和无规卷曲构成占比较大;并且其可形成三聚体的稳定桶形结构。经软件预测和筛选,PhoE具有7个优势性B细胞抗原表位,分别是Y^(43)FSDYDSKDGDQT^(55)、F^(81)SGNKTESDSSQK^(93)、Q^(172)GKNEGREAKKQNGD^(186)、S^(210)DRTNDQNLLARGQGSKAE^(228)、E^(249)TRKMTPISGGFANKA^(264)、K^(289)GKDIEGVGSEDL^(301)和I^(325)NQLKSDNKLGINDD^(339)。经PCR扩增获得了肺炎克雷伯菌CVCC4080株的phoE基因,与GenBank中其他肺炎克雷伯菌参考株的序列同源性均高于99.8%,PhoE经大肠杆菌表达后主要以包涵体的形式存在。ELISA和Western blot结果显示,PhoE具备良好的免疫原性。本试验通过生物信息学方法分析了肺炎克雷伯菌PhoE的理化特性,并通过试验证实了其具有良好的免疫原性,为PhoE的生物学功能研究、血清学检测方法的建立提供了数据支持,并为亚单位和表位疫苗的研制提供参考依据。