LINC01410促进食管鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的作用及其机制研究

背景与目的:LINC01410是长度为647 bp的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),其异常表达参与多种肿瘤的发生、发展,但其对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的影响研究较少。本研究旨在探讨LINC01410促进ESCC细胞增殖和迁移的作用机制,以期为防治ESCC提供生物标志物及潜在治疗靶点。方法:应用基因表达谱交互分析2(Gene Expression Profiling Interactive Analysis 2,GEPIA2)在线分析LINC01410在肿瘤与癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)ESCC数据中的表达水平及与患者预后总生存期的关系;采用基因探针富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)LINC01410可能调控的信号转导通路。收集2020年1月—2021年12月在新乡医学院第一附属医院、平顶山市第一人民医院胸外科行根治性手术的ESCC患者新鲜肿瘤组织标本62例,并选取癌旁组织作为对照。本项目经医院伦理委员会批准(新乡医学院第一附属医院,编号:2018036;平顶山市第一人民医院,编号:2019-018)。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测LINC01410的表达水平并分析其与临床病理学参数的关系。应用LV-NC、LV-over/LINC01410转染EC109细胞并建立稳定过表达细胞株EC109/NC、EC109/OE,采用shRNA-NC、shRNA-LINC01410转染EC9706细胞并建立稳定敲降细胞株EC9706/NC、EC9706/KD;应用RTFQ-PCR检测LINC01410的相对表达量;采用噻唑蓝比色法[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]实验和克隆形成实验检测细胞增殖;采用transwell实验检测细胞迁移能力;采用双荧光素酶报告基因实验检测LINC01410对T细胞因子/淋巴增强因子1(T cell factor/lymphoid enhancer factor 1,TCF/LEF1)启动子活性的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号转导通路、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)信号转导通路相关蛋白表达水平。结果:GEPIA2分析显示,在ESCC组织中LINC01410表达水平显著高于食管正常组织,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析显示,高表达LINC01410的ESCC患者生存率显著低于低表达LINC01410的患者(P=0.042)。RTFQ-PCR检测结果显示,在ESCC组织中LINC01410表达水平显著高于配对癌旁组织;LINC01410高表达与肿瘤浸润程度、淋巴结转移及TNM分期显著相关(P<0.01);与食管正常上皮细胞HEEC相比,LINC01410在EC109、EC9706细胞中显著高表达(P<0.05);LINC01410在EC109/OE细胞中显著高表达(P<0.01),而在EC9706/KD细胞中显著下调(P<0.01)。MTT结果显示,EC109/OE细胞48 h时细胞活性显著高于EC109/NC细胞(P<0.01);EC9706/KD细胞48 h时细胞活性显著低于EC9706/NC(P<0.01)。细胞克隆形成实验结果显示,与EC109/NC细胞相比,EC109/OE细胞克隆数显著增多;与EC9706/NC细胞相比,EC9706/KD细胞克隆数明显减少(P<0.01)。Transwell迁移实验结果显示,EC109/OE细胞株迁移的细胞数显著多于EC109/NC细胞(P<0.01),而EC9706/KD细胞迁移的细胞数显著少于EC9706/NC细胞(P<0.01)。GSEA分析显示,Wnt/β-catenin、EMT等信号转导通路显著富集在高表达LINC01410的ESCC组织中。双荧光素酶报告基因实验结果示,EC109/OE细胞中TCF/LEF1启动子活性显著高于EC109/NC细胞,EC9706/KD细胞中TCF/LEF1启动子活性显著低于EC9706/NC细胞(P<0.01)。Western blot检测结果显示,与EC109/NC细胞相比,EC109/OE细胞中E-cadherin蛋白表达下调,而N-cadherin、β-cantenin、cyclin D1、c-Myc等蛋白显著上调;与EC9706/NC细胞相比,E-cadherin蛋白表达上调,而N-cadherin、β-cantenin、cyclin D1、c-Myc等蛋白显著下调。结论:LINC01410具有促进ESCC细胞增殖和迁移的作用,其机制可能与激活EMT、Wnt/β-catenin等信号转导通路有关。

LINC01410对肺癌细胞A549增殖、侵袭与迁移的影响

目的探究LINC01410对肺癌细胞A549增殖、侵袭与迁移的影响及其可能的分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测人肺癌细胞A549、H1975、HCC827、PC-9及人肺正常上皮细胞BEAS-2B中LINC01410表达;运用慢病毒LINC01410过表达载体(LV-LINC01410)与慢病毒空载对照(LV-NC)转染肺癌细胞A549,并筛选稳转株A549-NC和A549-LINC01410;应用qRT-PCR检测LINC01410 mRNA表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测A549-NC、A549-LINC01410细胞的增殖能力;采用Transwell检测A549-NC、A549-LINC01410细胞的侵袭和迁移能力;运用qRT-PCR法检测A549-NC、A549-LINC01410白细胞介素(IL)-6 mRNA表达;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测A549-NC、A549-LINC01410细胞培养上清液IL-6表达;采用Western印迹检测A549-NC、A549-LINC01410细胞p-信号转导及转录激活蛋白(STAT)3及STAT3蛋白。结果LINC01410在肺癌细胞的表达较正常肺上皮细胞显著上调(均P<0.05)。与A549-NC组比较,A549-LINC01410组细胞中LINC01410 mRNA、p-STAT3蛋白、IL-6 mRNA及蛋白表达、增殖、侵袭及迁移细胞数显著升高(P<0.05)。结论LINC01410过表达促进肺癌细胞A549的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与IL-6表达上调和STAT3磷酸化有关。

人工智能在农业领域的运用及思考

农业不仅是国民衣食之源,是社会长治久安的基础,更是国家重要的经济命脉。近些年来,由于信息技术的快速发展,人工智能推进了农业的发展。在人工智能时代背景下,农业获得了较大的发展,逐渐成为了互联网新时代的蓝海。然而,就现阶段国内人工智能技术在农业领域中的运用情况来分析,还是存在些许不足之处。所以,怎样应对存在的问题及调整,确定今后的发展趋势成为了研究重点。基于此,本文重点对人工智能在农业领域中的运用进行了探究。