BMP－3和5在不同组织、细胞中的检测及其在大肠杆菌中的表达

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测了ＢＭＰ－３及ＢＭＰ－５在不同组织中的表达，并将ＰＣＲ扩增出的ｂｍｐ－３和ｂｍｐ－５ｃＤＮＡ克隆入ｐＧＥＸ表达载体．在大肠杆菌中得到高效表达。

bax基因促进细胞编程死亡的机理研究

ｂａｘ基因促进细胞编程死亡的机理研究曾桂生，陈亚兵，温龙平，俞春东，蔡毓（厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室厦门３６１００５）１９８０年ＷｙｌｌｉｅＡ．Ｈ．等通过糖皮激素诱导胸腺细胞死亡的实验，提出了细胞编程死亡（ＰｒｏｇａｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ...

Bcl-2基因加强表达对SK细胞编程死亡的效应

TNF和OA诱发人神经母细胞瘤SK细胞编程死亡(PCD)。将编码Bcl-2完整蛋白质的cDNA植入pXJ 41neo载体中,由HCMV病毒启动子控制其表达。形成的正向(pBcl-2-S)及反向(pBcl-2-AS)表达质粒经转染导入SK细胞中获得稳定转染子。Western印迹表明正向转染子表达较大量的26kd Bcl-2蛋白,而反向转染子则不表达。增强表达的Bcl-2基因产物能抑制由TNF引发的PCD,但不影响由OA引发的PCD,从而证明Bcl-2基因产物抗细胞死亡效应的特异性。

CPP32 cDNA的克隆及其表达和活性检测

ＣＰＰ３２在细胞编程死亡调控中起重要的作用．利用ＣＰＰ３２专一性引物，用ＲＴＰＣＲ方法从人鼻咽癌ＣＮＥ细胞中扩增出约８３０ｂｐ的片段，经序列分析证明与已发表的ＣＰＰ３２序列完全一致．将扩增出的编码人全长ＣＰＰ３２的ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＧＥＸ２Ｔ中，转化大肠杆菌ＤＨ５α．转化菌经诱导表达出较高含量的ＧＳＴＣＰＰ３２融合蛋白．进一步研究显示，细菌中表达的ＣＰＰ３２蛋白能自我切割，而且能裂解体外翻译的ＰＡＲＰ，从而证明其具有生物活性．

重组人骨形成蛋白-3的克隆及其在大肠杆菌中的表达

重组人骨形成蛋白３的克隆及其在大肠杆菌中的表达陈亚兵俞春东温龙平曾定（厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室厦门３６１００５）骨形成蛋白（ＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ，ＢＭＰ）是一类能诱导异位骨及软骨形成，并在动物的发育和分化中起作...

下调TSPO表达不影响脂多糖诱导的小胶质细胞TNF-α和IL-1β以及IL-6的分泌

目的研究相对分子质量(Mr)18 000转运蛋白(TSPO)基因表达下调对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞分泌TNF-α,IL-1β和IL-6的影响。方法以RNA干扰技术建立TSPO基因表达下调的细胞模型,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测转染TSPO siRNA BV-2细胞TSPO mRNA及蛋白水平表达的效果;用qRT-PCR法检测TSPO基因下调后小胶质细胞BV-2在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平表达的情况;ELISA检测TSPO基因下调小胶质细胞BV-2在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白水平表达的变化。结果成功建立了TSPO基因下调的细胞模型,稳定表达TSPO siRNA细胞的TSPO mRNA和蛋白水平表达均明显下降,TSPO基因下调后BV-2细胞在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的量无变化。结论下调TSPO的表达对LPS刺激引起的小胶质细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌无明显影响。

Bc1-2 基因加强表达对 OA 诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞进行编程死亡．死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制．将编码Ｂｃ１－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制．形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达较大量的２６ｋｄＢｃ１－２蛋白，而反义转染子则不表达．增强表达的Ｂｃ１－２基因产物对ＯＡ引ＳＫ细胞编程死亡无抑制效应．

Bak基因的克隆、测序及表达

Ｂｃｌ－２蛋白家族在细胞编程死亡的调控中起重要的作用。本文报导了Ｂｃｌ－２家族新成员Ｂａｋ的克隆、测序及其在大肠杆菌中的表达过程，为研究细胞编程死亡以及Ｂａｋ在其中的作用机制提供了重要的依据。

人的Bcl－X_L和Bcl－X_ScDNA的克隆及表达研究

利用一对带有Ｔａｔ在序列的Ｂｃｌ－ｘ专一性引物从ＢＥＡＳ－２Ｂ细胞中扩增出比ｂｃｌ－ＸＬ和ｂｃｌ－ＸｓｃＤＮＡ，并将它们克隆入ｐＧＥＸ－５Ｘ－３载体进行表达。用ＩＰＴＧ诱导表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的３０％，经谷胱甘肽－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析，蛋白纯度达９０％。这些结果为进一步研究Ｂｃｌ－ｘ在编程性细胞死亡中的作用奠定了基础。

Bax基因cDNA的分子克隆研究

细胞编程死亡（ｐｒｏｇｒａｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ）是细胞生理性死亡的一种主要形式。Ｂａｘ具有抑制细胞编程死亡的作用。本研究采用ＰＣＲ方法，从人肿瘤细胞ＨＬ—６０ｃＤＮＡ文库中扩增出若干个ｂａｘｃＤＮＡ片段，然后将它们分别与ＰＧＥＭ—Ｔ测序质粒载体连接，并转化到大肠杆菌ＪＭ１０９中去。用蓝／白法筛选重组菌落，经酶切分析及ＰＣＲ鉴定，获得了插入片段大小约为０．４ｋｂ及１．１ｋｂ的ＢａｘｃＤＮＡ重组质粒ＰＢａｘｌ和ｐＢａｘ２。这些片段的测序及表达工作正在进行之中。

人肿瘤坏死因子cDNA衍生物在大肠杆菌中的表达及活性测定

应用基因工程方法构建了含人肿瘤坏死因子ＣＤＮＡ衍生物的重组体．转化大肠杆菌后酶切鉴定．转化菌经摇瓶培养及温度调控，获得高效表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，表达的ＴＮＦ分子量约为１７ｋＤ，蛋白量约为菌体可溶性蛋白的２０％．用Ｌ９２９细胞毒性测定法测得菌液ＴＮＦ的表达为２×１０８ｕ／ｍＬ．抗ＴＮＦ的单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的ＴＮＦ对Ｌ９２９细胞的细胞毒性．

BMP－3及BMP－5在不同组织和细胞中的表达

报道ＢＭＰ－３及ＢＭＰ－５在不同组织细胞中的表达．将人的神经母细胞瘤ＳＫ细胞的总ＲＮＡ及人的脑、肝、胸腺、脾、胎盘及睾丸的总ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ作为模板，利用设计的编码ＢＭＰ－３和ＢＭＰ－５成熟蛋白的专一性引物分别扩增出相应的片段．ＰＣＲ产物的琼脂糖凝胶电泳结果表明，ＢＭＰ－３及ＢＭＰ－５在不同组织细胞中表达类型不同．

TNF和OA诱发人神经母细胞瘤SK细胞程序死亡

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ（ＯＡ）能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞死亡，死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ断裂形成以２００ｂＰ左右为单位的梯形分布，且上述过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制，显示ＴＮＦ和ＯＡ诱发的ＳＫ细胞死亡为细胞程序死亡．

Bax基因在不同组织细胞中的表达

Ｂａｘ基因在不同组织细胞中的表达陈亚兵，曾桂生，蔡毓，俞春东，陈华，温龙平（肿瘤细胞工程国家专业实验室）近年来，细胞编程死亡已成为细胞生物学研究的热点．细胞编程死亡是在组织、器官、系统发育成熟过程中发生的一种自杀性细胞死亡现象，无功能或老化细胞通过此...

FGFR4对胆汁酸代谢的调控作用

成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor4,FGFR4)是一种能够介导成纤维细胞生长因子(FGF)信号传导的细胞表面跨膜酪氨酸激酶受体。在成熟肝实质细胞中,FGFR4在其配体FGF15或FGF19的刺激下通过激活JNK信号通路来抑制胆汁酸合成限速酶胆固醇7α-羟化酶的表达,进而抑制胆汁酸的合成。本文介绍FGFR4及其配体在胆汁酸代谢过程中的作用及其相关机制方面的研究进展。