TB-DNA、IGRAs、TB-Ab在肺结核中的诊断价值

目的探究结核分枝杆菌核酸(TB-DNA)、γ-干扰素释放试验(IGRAs)和结核分歧杆菌抗体(TB-Ab)检测在肺结核中的诊断价值。方法收集2022年6月至2023年1月莆田学院附属医院收治的154例疑似肺结核患者,所有患者均接受TB-DNA、IGRAs和TB-Ab检测,评价不同检测方法的检测阳性率、诊断肺结核的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及诊断准确率;采用受试者工作特征曲线(ROC)评估不同检测方法对肺结核的诊断效能。结果154例疑似肺结核患者中,107例确诊为肺结核(肺结核组),47例确诊为非肺结核的其他肺部疾病(对照组)。肺结核组TB-DNA、IGRAs和TB-Ab阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。TB-DNA、IGRAs检测诊断肺结核的灵敏度和诊断准确率均高于TB-Ab检测,差异有统计学意义(P<0.05),TB-DNA检测诊断肺结核的阴性预测值高于TB-Ab检测,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,TB-DNA诊断肺结核的AUC为0.851(明显大于IGRAs诊断的0.770)、TB-Ab诊断的0.770,IGRAs诊断的AUC明显大于TB-Ab,差异均有统计学意义(P<0.05)。IGRAs+TB-DNA联合诊断的灵敏度、诊断准确率明显高于IGRAs单独检测(P<0.05);IGRAs+TB-Ab联合诊断的灵敏度明显高于IGRAs、TB-Ab单独检测,诊断准确率明显高于TB-Ab单独检测(P<0.05);TB-DNA+TB-Ab联合诊断的灵敏度、阴性预测值、诊断准确率明显高于TB-Ab单独检测(P<0.05)。TB-DNA、IGRAs、TB-Ab两两联合检测和三者联合检测诊断肺结核的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及诊断准确率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论相比TB-Ab和IGRAs检测,TB-DNA检测对肺结核的诊断价值更高;TB-DNA、IGRAs、TB-Ab两两联合检测对肺结核的诊断效能高于单一指标检测。

莆田市191例珠蛋白生成障碍性贫血基因型研究

目的了解莆田市珠蛋白生成障碍性贫血基因分布情况。方法采用PCR结合基因芯片技术检测405例珠蛋白生成障碍性贫血疑似携带者。结果在405例疑似珠蛋白生成障碍性贫血携带者中确诊191例,其中α珠蛋白生成障碍性贫血114例,β珠蛋白生成障碍性贫血74例,αβ复合珠蛋白生成障碍性贫血3例。3种常见的α珠蛋白生成障碍性贫血基因型是--SEA、-α3.7、-α4.2,突变频率分别是72.8%、15.8%、2.6%。最常见的β珠蛋白生成障碍性贫血基因型是IVS-Ⅱ-654/N、CD41-42/N和CD17/N,突变频率分别是54%、21.6%和13.5%。检测还发现了5种复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因。结论该次研究阐明莆田市珠蛋白生成障碍性贫血基因型和分布情况,为莆田市开展珠蛋白生成障碍性贫血遗传咨询和产前诊断提供依据。

膜孔蛋白基因表达与耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性关系的研究

目的通过检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因表达,分析膜孔蛋白基因与耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药相关性。方法采用菌株分离鉴定与改良Hodge、乙二胺四乙酸纸片协同试验药敏试验筛选33株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,利用DNA提取,聚合酶链反应扩增及产物电泳分析其膜孔蛋白基因序列,再利用荧光染料SYBR Green法进行实时定量膜孔蛋白基因表达高低。结果大部分耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌OMPK35、OMPK36表达有上升的趋势。通过基因序列比对分析35株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌膜孔蛋白OMPK35、OMPK36序列没有异常。结论膜孔蛋白OMPK35、OMPK36序列对敏感或多耐药的肺炎克雷伯菌无影响。膜孔蛋白OMPK35、OMPK36表达量水平与产KPC和IMP型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌对亚胺培南、厄他培南、美罗培南耐药性无相关性。

福建省莆田地区地中海贫血的产前筛查和基因诊断研究

目的调查莆田地区孕妇地中海贫血基因类型及分布情况。方法对2014年1月至2015年12月在我院门诊产检的5 618例孕妇进行血常规筛查,经MCV、MCH初步筛查后,阳性指征者进行基因分析。结果 5 618例孕妇中,130例确诊为地中海贫血,比例为2.31%。α地中海贫血共检出5种基因型,最常见基因型为——SEA(62例),占比47.69%;—α3.7(13例),占比10.0%。β地中海贫血50例,比例为0.91%,共检出7种基因型,最常见的有IVS-II-654/N(28例)占比21.54%、CD41-42/N(10例)占比7.69%和CD17/N(5例)占比3.84%。结论明确莆田地区地中海贫血分布规律,加强产前筛查和诊断,预防重型地中海贫血患儿出生,提高人口素质。

高危型及低危型人乳头瘤病毒感染在宫颈病变的分布特征

目的研究我院高危型、低危型人乳头状瘤病毒(HPV)在宫颈病变中的感染情况,以探讨宫颈病变与HPV感染的关系。方法采用实时荧光定量PCR法和液基薄层细胞检测技术(LCT)143例女性患者,进行低危型人乳头状瘤病毒(LRHPV6、11)、高危型人乳头状瘤病毒(HRHPV16、18、31、33、45、52、56、58)和宫颈细胞学检测。结果 143例标本中高危型与低危型HPV检出的阳性率分别为30.8%和11.2%。HRHPV感染阳性率从NILM、ASCUS、LSIL、HSIL依次增高。ASCUS组与NILM组的阳性率差异有统计学意义(χ2=5.482,P=0.019);LSIL、HSIL组分别与ASCUS组阳性率比较,其差异也有统计学意义(χ2=14.56,10.725,P=0.01<0.05)。NILM组HRHPV感染病毒载量低于其它三组。结论我院宫颈病变患者中HRHPV感染的阳性率高于LRHPV感染,且随着宫颈病变程度的加重,HRHPV阳性率逐渐增高。HRHPV感染及所带的高病毒载量可导致宫颈病变,但与宫颈病变程度不相关。

肺炎克雷伯菌膜孔蛋白OmpK35、OmpK36基因分析及模型构建

对耐碳青霉烯类药肺炎克雷伯菌膜孔蛋白相关基因进行分析,构造膜孔蛋白结构模型,以了解膜孔蛋白在其耐药中的作用。采用聚合酶链技术(PCR)对确认为产KPC和IMP型碳青霉烯酶29株肺炎克雷伯菌的膜孔蛋白Omp K35和Omp K36基因进行检测、序列测定和生物信息学技术分析。结果,29株肺类克雷伯菌表现为对碳青霉烯类药物耐药、均检出膜孔蛋白Omp K35和Omp K36基因;通过序列比对和同源性分析发现,各菌株间存正突变、同源性高,构建了分子进化树和膜孔蛋白结构模拟图。结果表明,膜孔蛋白在碳青霉烯类药物耐药机制中不起主要作用,并初步了解膜孔蛋白分子进化情况和膜孔蛋白结构。

碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌筛选及临床分析

目的筛选碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)及现状分析。方法采用K-B法及配套GN卡上机鉴定、改良Hodge法试验、EDTA纸片协同试验筛选碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌。结果 2015年7月~2016年12月,本院临床科室送检标本分离碳青霉烯类肺炎克雷伯菌菌株36株。结果表明,碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌院内尤其是重症医学科病房感染严重,其多重耐药现象突出。结论建议开展其同源性分析及监测肺炎克雷伯菌流行情况,应引起医院高度重视。

人乳头状瘤病毒基因型与宫颈病变的关系

了解莆田地区女性感染人乳头状瘤病毒(HPV)基因型分布情况及其与宫颈病变的关系。采用核酸分子快速导流杂交基因分型芯片(HybriMax)和液基薄层细胞学(LCT)技术对345例女性宫颈脱落细胞进行HPV基因分型和细胞学检测;同时用基因序列测定检证HybrMax技术的可靠性;对LCT结果为HSIL及以上细胞学异常的患者161例在阴道镜下行组织病理学活检。结果表明,莆田地区女性患者感染HPV阳性率为40.6%,且HPV基因型具有一定的区域性特点;宫颈病变各组之间高危HPV感染率的差异具有显著性统计学意义(x2=16.040,P=0.003<0.01),且高危型HPV感染与宫颈病变程度呈正相关。

实验诊断课程中分子生物学实验建立及实践

随着分子生物学技术的迅速发展,分子诊断学己成为实验诊断学的一个重要组成部分,实验诊断学应适应新形势的要求,努力把学科发展中的新技术特别是分子生物学技术移植到教学实验。为此,我们对临床医学本科实验诊断学实验开设分子生物学实验教学,同时为今后开展《分子诊断学》这门学科的实验教学积累经验.

人乳头状瘤病毒58型L1基因序列测定及同源性分析

目的了解莆田地区人乳头状瘤病毒（HPV）58型L1基因结构特点和变异规律，为临床治疗和预防提供理论依据。方法采用核酸分子快速导流杂交基因分型芯片（HybriMax）进行HPV基因分型，随机选4例HPV58型阳性标本，进行基因克隆测序；进一步用DNAstar，clustalx2．0和Mega5．0软件对测序结果与GenBank中发布的其他国家及国内的32株HPV58型病毒株L1基因核苷酸和氨基酸序列建立同源性矩阵并分析，同时进行进化树构建。结果4株HPV58型病毒株之间的核苷酸同源性为96％～98％，氨基酸同源性为92％～98％；1986年法国株之间的核苷酸同源性为83％～86％，氨基酸同源性为84％～89％；1987年英国株之间的核苷酸同源性为53％～54％，氨基酸同源性为39％～42％；国内2010年香港分离株、2004年江苏分离株之间核苷酸的同源性为96％～100％，氨基酸同源性为92％～99％。从构建系统进化树图可以看出，4株本地区HPV58型病毒株分别与上海和香港EV999963、DQ057326、HM639611病毒株基因背景最紧密。结论本地区HPV58型L1基因具有一定的区域性特点。

基于PDANPs和T4 PNK、λexo生物传感技术建立

为找到一种快速灵敏检测miRNA-199的方法,分析纳米材料PDANPs表征,构建基于聚多巴胺纳米粒子(PDANPs)和T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)、λ核酸外切酶(λexo)的新型纳米生物传感技术检测miRNA-199平台,对影响生物传感技术主要因素进行优化,分析其线性范围和检测限;与茎环引物设计荧光定量PCR方法进行比对。结果显示:合成PDANPs直径300.0±31.7 nm,表面含有丰富的π电子;反应体系荧光强度与miRNA-199浓度的对数成线性关系,F=65.183 lg C+157.3、R 2=0.973;线性范围为10 pmol/mL^100 nmol/mL;检出限值为4.62 pmol/mL;与荧光定量PCR法比对结果偏倚为-0.22105 pmol/mL。结果表明,基于PDANPs和T4 PNK、λexo新型纳米生物传感技术可用于miRNA-199检测。

福建省莆田市11 924例女性人乳头瘤病毒感染的基因亚型分析

目的分析福建省莆田市女性人乳头瘤病毒(HPV)的感染状况、基因亚型及年龄分布特征,为宫颈癌的早筛和临床诊疗提供参考。方法收集2021年1月—2022年1月莆田学院附属医院11924例门诊、住院和体检女性的宫颈脱落细胞标本,应用聚合酶链式反应(PCR)和流式荧光杂交法检测样本HPV 27种基因亚型,分析不同年龄段HPV的感染状况、高危型和低危型分布情况、单一感染、双重感染和多重感染的情况。结果11924份标本中,2667份检查出感染HPV,感染率达22.37%。其中≤20岁患者的为51.95%,61~70岁患者的为29.38%。不同年龄段HPV感染率比较,差别有统计学意义(χ^(2)=60.85,P<0.01)。2667例感染者中,单一感染1993例,双重感染501例。此外,检出HPV感染基因3580次,其中高危型检出频数为2643次(73.81%),居前三位的高危型依次为HPV-52、HPV-53和HPV-58。结论福建省莆田市就诊女性HPV感染率达22.37%,且每个年龄段高危型的检出率均高于低危型。卫生部门和医疗机构应推广多价HPV疫苗,加强青年和中老年女性的HPV定期筛查和科普宣传,对于宫颈癌预防和早诊具有重要作用。

地中海贫血防控试点项目实施效果分析

目的通过分析婚检夫妇地中海贫血(地贫)筛查与诊断相关临床资料与实验室数据,评价福建省莆田市实施地贫防控项目的成效。方法回顾性分析2017年4月至2021年12月在福建省莆田市参加婚检的62058对新婚夫妇和计划怀孕夫妇的血样结果,通过检测平均红细胞比容、平均红细胞血红蛋白浓度进行初筛,当夫妇一方初筛阳性时双方进行血红蛋白(Hb)电泳检测,夫妇双方Hb电泳阳性时双方进行地贫基因检测,统计分析福建省莆田市地贫基因突变类型、罕见地贫发生率、突变分布情况及遗传特点等,绘制福建省莆田地区地贫基因遗传图谱;分析同型基因携带与产前诊断情况,并随访妊娠结局。结果62058对夫妻经血常规筛查至少一方异常者8938对,初筛阳性率为14.40%。筛查阳性夫妻Hb电泳阳性5842例,阳性率为4.71%;夫妇双方Hb电泳均异常者413对。413对夫妻基因检测确诊为地贫316例,确诊率为38.26%,其中α地贫198例,所占比例较高的基因型为--^(SEA)/αα、-α^(3.7)/αα;β地贫114例,所占比例较高的基因型为β^(IVS-II-654)/β^(N)、β^(CD41-42)/β^(N);αβ复合地贫4例。检出地贫同型基因携带高风险夫妇26对,其中同型α地贫18对,同型β地贫8对,6对夫妻中女性接受了产前诊断,其中正常胎儿2例,--^(SEA)/αα1例,β^(IVS-II-654)/β^(N) 2例,--^(SEA)/--^(SEA) 1例,1例重度地贫孕妇选择终止妊娠。结论福建省莆田市地贫防控试点项目能有效减少重度地贫新生儿的出生,提高该地区出生人口素质,并为进一步制定地贫防控计划提供依据。

多色彩可视化半定量检测方法用于COVID-19患者治疗过程中抗体浓度变化的快速监测(英文)

现场快速定量检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗体对于监测新型冠状病毒感染的肺炎患者治疗过程具有重要作用.目前,大多数抗体检测采用基于金纳米粒子的免疫层析定性检测,但该方法仅表现出一种颜色变化,无法实现现场快速定量检测.本文采用特异性刻蚀金纳米棒(Au NRs)的方法,实现了SARS-CoV-2抗体多色彩可视化的现场快速定量检测.首先,将SARS-CoV-2重组抗原固定在96孔酶标板上;随后,将辣根过氧化物酶标记的酶标抗体与待测抗体结合,形成抗原-待测抗体-酶标抗体的复合三明治结构,且酶标抗体与待测抗体浓度呈正相关;由于酶标抗体可与3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)发生特异性反应,生成TMB^(2+),而TMB^(2+)可选择性刻蚀Au NRs,使得溶液产生丰富多彩的颜色,即可通过观察溶液颜色变化实现SARS-CoV-2抗体浓度半定量检测.在最佳条件下,该方法对SARS-CoV-2IgM抗体在5.00~200IU浓度范围内呈良好线性关系,检出限为1.29IU,并具有较高的灵敏度和特异性.上述方法成功用于COVID-19患者治疗过程中SARS-CoV-2IgM抗体浓度半定量快速检测.

促甲状腺素受体抗体的临床意义和检测进展

TRAb与自身免疫性甲状腺疾病的发病有直接关系。TRAb的检测在GD的诊断、亚甲炎的鉴别诊断及判断GD疗效及预后等方面均有重要意义。TRAb的检测有多种方法，目前检测的方法主要是TBⅡ法和生物学测定法。生物技术的发展导致两种TRAb检测法均有很大的改进。

莆田市育龄夫妇地中海贫血基因分析及产前诊断

目的了解莆田市地中海贫血(地贫)基因分布特征和突变类型,为地贫防控工作提供参考。方法2017年1月至2023年5月,3590例在莆田学院附属医院婚前、孕前和产前地贫筛检者进行常规地贫基因检测,并对检测结果与临床表型不符的可疑患者进行基因高通量测序,对于同型地贫基因携带夫妇于孕中期进行介入性产前诊断。结果研究对象携带地贫基因检出率为48.1%(1633/3590),检出携带α地贫基因居多(62.5%,1064例),以--^(SEA)/αα(74.7%)携带为主;153例常规基因检测结果与临床表型不符的可疑患者中检出1例常见基因型、13例罕见地贫变异基因型(6种型别)和7例异常血红蛋白变异(5种型别);2例新发现变异型均为小细胞性贫血,罕见变异基因型别中α珠蛋白三联体αααanti4.2占比最高(30.0%);异常血红蛋白变异型别中Hb Q-Thailand占比最高(15.0%)。同型地贫携带夫妇中孕中期接受产前诊断的占75.2%(82/109),地贫携带胎儿51例,8例重度地贫胎儿有7例终止妊娠。结论莆田市育龄人群以α地贫基因居多,基因突变类型复杂多样,应用高通量测序技术进行育龄人群地贫筛查和产前诊断,可有效降低地贫漏筛风险。

莆田学院附属医院1917株多重耐药菌检测分析

为了解莆田学院附属医院多重耐药菌感染情况、分布及耐药特点,采用VITERK2COMPACT细菌分析系统和K-B法对2012年6月1日至2013年12月27日临床科室送检样本进行细菌鉴定和药敏试验,并对认定为多重耐药菌株进行病原菌耐药和分布情况分析。结果多重耐药菌株占所检出病原菌的19.99%(1 917/9 590),革兰阳性多重耐药菌株中凝固酶阴性溶血葡萄球菌检出最多,占73.28%(96/131)、革兰阴性菌则以大肠埃希菌检出率最高,为64.70%(603/932);多重耐药肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBLs)分别达到84.65%(215/254)和73.30%(442/603),耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌占多重耐药肺炎克雷伯菌的11.81%(30/254);多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类高达91.10%(133/146)、94.86%(166/175),表现为强的耐药性;多重耐药的屎肠球菌、粪球菌分别占多重耐药肠球菌的45.87%(50/109),25.69%(28/109),耐万古霉素肠球菌检出率相对低,为2.06%,对替加环素、利奈唑胺100%的敏感,但对其他抗生素具有较高的耐药性;金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林的检出率分别为30.65%(422/1 377)和64.60%(208/322),其中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(methicillin resistant coagulase-negative Staphylococci,MRCNS)较耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)诱导克林霉素耐药高(P<0.05),未发现替加环素、利奈唑胺、万古霉素、奎奴普汀/达福普汀耐药菌株;临床科室均检出多重耐药菌,其中检出最多前五位分别为重症ICU、呼吸科、神经外科、儿科、小儿外科。多重耐药菌在临床检出较为普遍,提示该院可能存在多重耐菌的播散,应建立有效的控制措施使多重耐药在医院内的感染得到遏制。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制的定量蛋白质组分析

为了寻找耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药相关蛋白,本研究通过提取2017年莆田学院附属医院分离的3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药株和2株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌敏感株的总蛋白,采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术合并液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS/MS)分析和鉴定蛋白表达图谱,筛选差异表达蛋白,并对显著性差异蛋白进行GO功能及KEGG通路富集分析。我们共鉴定出3117个蛋白,定量检测到的蛋白有2920个,其中538个蛋白有显著性差异。GO功能富集分析发现,与肺炎克雷伯菌耐药相关的蛋白有β-内酰胺酶、青霉素结合蛋白、修饰氨基糖苷类的钝化酶、金属肽酶及其它相关蛋白。对β-内酰胺相关蛋白KEGG通路富集分析,涉及β-内酰胺酶活性的KPC型和SHV型基因得到验证。本研究为耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制提供了理论依据。