目的探讨LED光源照射对人视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬和凋亡的影响,以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002在光照下对RPE细胞自噬和凋亡的影响。方法体外培养人ARPE-19细胞,随机分为6 h对照组、6 h模型组、6 h LY294002组,12 h对照...目的探讨LED光源照射对人视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬和凋亡的影响,以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002在光照下对RPE细胞自噬和凋亡的影响。方法体外培养人ARPE-19细胞,随机分为6 h对照组、6 h模型组、6 h LY294002组,12 h对照组、12 h模型组、12 h LY294002组,24 h对照组、24 h模型组、24 h LY294002组,分别给于设定时间的LED冷光照射或加入LY294002后的光照。采用噻唑蓝法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;透射电子显微镜观察各组细胞超微结构;构建稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(LC3)的RPE细胞株,激光共聚焦合倒置荧光显微镜分析细胞自噬流变化;Western blot法检测苄氯素1(Beclin 1)、LC3和p62自噬相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,6、12、24 h模型组细胞存活率均下降(均P<0.05),12、24 h LY294002组细胞存活率均下降(均P<0.01);与模型组比较,12、24 h LY294002组细胞存活率均升高(均P<0.05)。与对照组比较,6、12、24 h模型组和LY294002组细胞凋亡率均升高(均P<0.05);与模型组比较,6、12 h LY294002组细胞凋亡率均下降(均P<0.05)。模型组RPE细胞在光照24 h后,胞内可见较多的自噬泡,LY294002干预后也可见聚集性分布的自噬囊泡。观察自噬流发现,对照组少见红色亮点,模型组红色亮点荧光随光照时间延长数量逐渐增多,Merge图中黄色亮点数量增多明显,LY294002干预后,红色亮点与黄色亮点呈增多趋势。与对照组比较,6、12、24 h模型组和LY294002组细胞中Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平均升高,p62蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,6、12、24 h LY294002组细胞中Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达均升高,12、24 h LY294002组细胞中p62蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论LED光源照射可刺激ARPE-19细胞发生自噬,增加细胞凋亡率;PI3K抑制剂LY294002能上调细胞的自噬活性,减缓凋亡。展开更多
目的观察阶梯式微创疗法联合大黄牡丹汤保留灌肠治疗瘀毒互结型急性重症胰腺炎(SAP)的临床效果。方法采用回顾性分析研究方法,选择2018年1月—2020年9月上海中医药大学附属曙光医院收治的96例瘀毒互结型SAP患者为研究对象,根据治疗方案...目的观察阶梯式微创疗法联合大黄牡丹汤保留灌肠治疗瘀毒互结型急性重症胰腺炎(SAP)的临床效果。方法采用回顾性分析研究方法,选择2018年1月—2020年9月上海中医药大学附属曙光医院收治的96例瘀毒互结型SAP患者为研究对象,根据治疗方案不同分为微创组和开腹组,微创组48例予阶梯式微创治疗联合大黄牡丹汤保留灌肠14 d,开腹组48例予单纯开腹清创引流术治疗。观察2组手术情况、生存结局、术后恢复情况、住院费用、并发症发生情况及入院期间急性生理与慢性健康量表(APACHEⅡ)评分、器官衰竭量表(SOFA)评分变化。结果开腹组所有患者均顺利完成手术,死亡2例;微创组2例患者因出血中转开腹,剩余46例均成功完成CT引导下穿刺置管术,其中43例根据病情施行腹腔镜(肾镜)腹膜后清创引流术治疗,均顺利完成手术,死亡1例;2组病死率比较差异无统计学意义(P>0.05)。微创组体温恢复正常时间、淀粉酶恢复正常时间、腹腔积液消失时间、总住院时间均短于开腹组,出血量少于开腹组,差异均有统计学意义(P均<0.05);微创组感染、肠梗阻、肠瘘、胰瘘、新发脏器功能损伤等并发症发生率明显低于开腹组(P<0.05);微创组住院7 d、14 d SOFA评分及住院14 d APACHEⅡ评分均明显低于开腹组(P均<0.05);微创组住院费用明显少于开腹组(P<0.05)。结论阶梯式微创治疗联合大黄牡丹汤保留灌肠可明显促进瘀毒互结型SAP患者病情恢复,同时在降低并发症发生率,缩短住院时间,减少住院费用方面表现出显著优势。展开更多
目的研究miRNA-21-5p对光诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的影响。方法将体外培养的人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞随机分为对照组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液培养)、损伤组(TransIntro EL Transfection Rea...目的研究miRNA-21-5p对光诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的影响。方法将体外培养的人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞随机分为对照组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液培养)、损伤组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+光损伤)、过表达组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics+光损伤)、阴性组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics NC+光损伤)、PI3K/Akt阻断剂组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics+LY294002+光损伤)。使用光照强度为(16500±200)lx的LED冷光灯建立ARPE-19细胞光损伤模型,利用TransIntro EL Transfection Reagent转染液行细胞转染。采用qRT-PCR法检测各组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达水平,采用CCK-8法检测各组ARPE-19细胞活力,流式细胞仪检测各组ARPE-19细胞活性氧(ROS)含量变化,ELISA法检测各组ARPE-19细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组相比,损伤组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显下降,细胞存活率明显下降,ROS含量显著升高,SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(均为P<0.001);与损伤组相比,过表达组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显升高,细胞存活率明显上升,ROS含量明显降低,SOD活性升高,MDA含量减少(均为P<0.001),而阴性组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达、细胞存活率、ROS含量、SOD活性、MDA含量均无明显差异(均为P>0.05);与过表达组相比,PI3K/Akt阻断剂组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显降低,细胞存活率明显下降,ROS含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(均为P<0.01)。结论miRNA-21-5p能显著降低光诱导的ARPE-19细胞氧化应激水平,提高光诱导的ARPE-19细胞抗氧化能力。展开更多
文摘目的探讨LED光源照射对人视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬和凋亡的影响,以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002在光照下对RPE细胞自噬和凋亡的影响。方法体外培养人ARPE-19细胞,随机分为6 h对照组、6 h模型组、6 h LY294002组,12 h对照组、12 h模型组、12 h LY294002组,24 h对照组、24 h模型组、24 h LY294002组,分别给于设定时间的LED冷光照射或加入LY294002后的光照。采用噻唑蓝法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;透射电子显微镜观察各组细胞超微结构;构建稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(LC3)的RPE细胞株,激光共聚焦合倒置荧光显微镜分析细胞自噬流变化;Western blot法检测苄氯素1(Beclin 1)、LC3和p62自噬相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,6、12、24 h模型组细胞存活率均下降(均P<0.05),12、24 h LY294002组细胞存活率均下降(均P<0.01);与模型组比较,12、24 h LY294002组细胞存活率均升高(均P<0.05)。与对照组比较,6、12、24 h模型组和LY294002组细胞凋亡率均升高(均P<0.05);与模型组比较,6、12 h LY294002组细胞凋亡率均下降(均P<0.05)。模型组RPE细胞在光照24 h后,胞内可见较多的自噬泡,LY294002干预后也可见聚集性分布的自噬囊泡。观察自噬流发现,对照组少见红色亮点,模型组红色亮点荧光随光照时间延长数量逐渐增多,Merge图中黄色亮点数量增多明显,LY294002干预后,红色亮点与黄色亮点呈增多趋势。与对照组比较,6、12、24 h模型组和LY294002组细胞中Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平均升高,p62蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,6、12、24 h LY294002组细胞中Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达均升高,12、24 h LY294002组细胞中p62蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论LED光源照射可刺激ARPE-19细胞发生自噬,增加细胞凋亡率;PI3K抑制剂LY294002能上调细胞的自噬活性,减缓凋亡。
文摘目的观察阶梯式微创疗法联合大黄牡丹汤保留灌肠治疗瘀毒互结型急性重症胰腺炎(SAP)的临床效果。方法采用回顾性分析研究方法,选择2018年1月—2020年9月上海中医药大学附属曙光医院收治的96例瘀毒互结型SAP患者为研究对象,根据治疗方案不同分为微创组和开腹组,微创组48例予阶梯式微创治疗联合大黄牡丹汤保留灌肠14 d,开腹组48例予单纯开腹清创引流术治疗。观察2组手术情况、生存结局、术后恢复情况、住院费用、并发症发生情况及入院期间急性生理与慢性健康量表(APACHEⅡ)评分、器官衰竭量表(SOFA)评分变化。结果开腹组所有患者均顺利完成手术,死亡2例;微创组2例患者因出血中转开腹,剩余46例均成功完成CT引导下穿刺置管术,其中43例根据病情施行腹腔镜(肾镜)腹膜后清创引流术治疗,均顺利完成手术,死亡1例;2组病死率比较差异无统计学意义(P>0.05)。微创组体温恢复正常时间、淀粉酶恢复正常时间、腹腔积液消失时间、总住院时间均短于开腹组,出血量少于开腹组,差异均有统计学意义(P均<0.05);微创组感染、肠梗阻、肠瘘、胰瘘、新发脏器功能损伤等并发症发生率明显低于开腹组(P<0.05);微创组住院7 d、14 d SOFA评分及住院14 d APACHEⅡ评分均明显低于开腹组(P均<0.05);微创组住院费用明显少于开腹组(P<0.05)。结论阶梯式微创治疗联合大黄牡丹汤保留灌肠可明显促进瘀毒互结型SAP患者病情恢复,同时在降低并发症发生率,缩短住院时间,减少住院费用方面表现出显著优势。
基金国家自然科学基金青年基金(62006212)中国博士后科学基金(2023M733907)+1 种基金信息物理社会可信服务计算教育部重点实验室开放基金(CPSDSC202103)Project of Strategic Importance Grant of the Hong Kong Polytechnic University(1-ZE2Q)资助。
文摘目的研究miRNA-21-5p对光诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的影响。方法将体外培养的人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞随机分为对照组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液培养)、损伤组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+光损伤)、过表达组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics+光损伤)、阴性组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics NC+光损伤)、PI3K/Akt阻断剂组(TransIntro EL Transfection Reagent转染液+miRNA-21-5p mimics+LY294002+光损伤)。使用光照强度为(16500±200)lx的LED冷光灯建立ARPE-19细胞光损伤模型,利用TransIntro EL Transfection Reagent转染液行细胞转染。采用qRT-PCR法检测各组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达水平,采用CCK-8法检测各组ARPE-19细胞活力,流式细胞仪检测各组ARPE-19细胞活性氧(ROS)含量变化,ELISA法检测各组ARPE-19细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组相比,损伤组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显下降,细胞存活率明显下降,ROS含量显著升高,SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(均为P<0.001);与损伤组相比,过表达组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显升高,细胞存活率明显上升,ROS含量明显降低,SOD活性升高,MDA含量减少(均为P<0.001),而阴性组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达、细胞存活率、ROS含量、SOD活性、MDA含量均无明显差异(均为P>0.05);与过表达组相比,PI3K/Akt阻断剂组ARPE-19细胞miRNA-21-5p表达明显降低,细胞存活率明显下降,ROS含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(均为P<0.01)。结论miRNA-21-5p能显著降低光诱导的ARPE-19细胞氧化应激水平,提高光诱导的ARPE-19细胞抗氧化能力。