早期妊娠丢失患者蜕膜组织中血管重塑相关miRNA及其靶基因表达的研究

目的探讨早期妊娠丢失(EPL)患者蜕膜组织中血管重塑相关miRNA及其靶基因的表达。方法选取2020年10至12月在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院门诊手术室行早孕人工流产手术的患者40例为研究对象,其中因EPL行人工流产手术者20例(EPL组),正常早孕要求终止妊娠行人工流产者20例(对照组),收集其废弃的流产蜕膜组织。采用q RTPCR法检测两组患者蜕膜组织中与血管重塑相关的差异表达miRNA。通过3’非翻译区(3’-UTR)荧光素酶报告基因验证miRNA与其预测靶基因之间的关系。qRT-PCR和Western blot法验证两组患者蜕膜组织中预测靶基因的表达。结果EPL组患者蜕膜组织中miR-29c-3p、miR-193a-5p和miR-125a-5p表达水平均升高,而其对应的靶基因血管内皮生长因子A(VEGFA)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA和蛋白表达水平均下调。3’-UTR荧光素酶报告基因证实差异表达的miRNA与预测靶基因之间存在负调控。结论蜕膜组织中miR-29c-3p、miR-125a-5p、miR-193a-5p可能通过下调靶基因VEGFA和MMP-2参与EPL发生、发展,本研究提供了研究早期自然流产的新方向,但确切机制需进一步深入研究。

儿童食品选择及食品添加剂认知状况调查

目的为了了解西安市家长对儿童食品选择的基本情况，及其对食品中添加剂的认知和重视程度，以提高社会对儿童食品安全的关注度，为家长选购儿童食品提供参考。方法本研究采用随机整群抽样的方法，选取了西安市雁塔区、新城区、临潼区的3所幼儿园和4所小学，对调查当日在校的所有3—7岁学生家长，进行“家长对儿童食品选择的情况及对食品添加剂认知状况”的问卷调查。结果①有93％（1068／1148）的家长经常给孩子选择各类儿童食品。其种类以乳类及制品、糕点及小吃类、饮料类和糖果类为主；②家长在选择儿童食品时，有70％（748／1068）只关注食品的生产日期和保质日期，66％（705／1068）考虑品牌，58％（619／1068）根据孩子的爱好，仅有22％（235／1068）注意包装上的食品添加剂信息；③7％（80／1 148）的家长认为食品添加剂无安全问题，42％（482／1148）的家长认为只要是食品添加剂均有副作用，仅有37％（425／1148）的家长认为在合理含量范围对人无害。仅有1％（12／1148）的家长表示对儿童食品添加剂的使用种类、用量情况比较了解，31％（356／1148）的家长却表示毫不了解，对食品添加剂知识不了解的家长明显多于了解者（Х^2=28．228，P〈0．05）；④所有家长对食品添加剂存在的安全问题都极为关注，82％（941／1148）的家长希望在儿童食品中能列出添加剂的成分和含量。结论西安市儿童家长在选择儿童食品时缺乏对食品添加剂的相关知识，但家长对儿童食品安全存在的问题却极为关注。帮助家长了解食品添加剂相关知识，有助于科学地指导选择儿童食品，使儿童健康成长。

早期妊娠丢失蜕膜组织中与血管重塑相关的miRNAs表达谱分析

目的:通过对子宫内膜蜕膜化中与血管重塑相关的miRNAs表达谱的芯片筛查及相关靶基因预测,为早期妊娠丢失的发病机制研究奠定基础。方法:利用miRNA array芯片检测早期妊娠丢失患者蜕膜组织中的差异表达miRNAs,确定与血管重塑相关的miRNAs表达谱,进而应用miRWalk2.0数据库通过生物信息学方法预测差异表达miRNAs的相关靶基因,最后应用DAVID数据库对相关靶基因进行功能富集分析(GOanalysis)及靶基因信号转导通路富集分析(KEGG Pathway analysis)。结果:早期妊娠丢失患者蜕膜组织中差异表达的miRNAs共70条,上调表达miRNAs 32条,下调表达miRNAs 38条。其中差异倍数最高(≥2.0)的2个上调miRNA为miR-125a-5p和miR-29c-3p,预测相关靶基因为血管内皮生长因子A(VEGFA)。靶基因集合功能富集于正调控RNA代谢过程、血管发育、脉管系统发育、正调控内皮细胞增殖、缺氧反应、血管生成等分子过程;KEGG通路分析涉及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路。结论:miR-125a-5p和miR-29c-3p在早期妊娠丢失患者蜕膜组织中上调表达,可能通过对靶基因VEGFA的调控,影响子宫内膜蜕膜化血管重塑的过程,参与流产发生。

凋亡相关蛋白酶Caspase-10在早期妊娠丢失患者蜕膜组织中的表达研究

目的 分析凋亡相关蛋白酶Caspase-10在早期妊娠丢失(EPL)患者蜕膜组织中的表达情况。方法 通过生物信息学方法预测EPL患者蜕膜组织中差异表达miRNAs的相关靶基因,对其进行基因功能富集(GO)分析及靶基因信号转导通路富集(KEGG)分析。采用Western blot和免疫组化实验检测EPL患者(EPL组,20例)与正常早孕要求终止妊娠行人工流产者(对照组,20例)的蜕膜组织Caspase-10的表达情况。结果 3个下调差异表达miRNAs(miR-378a-3p、miR-422a、miR-378a-5p)同时靶向凋亡相关蛋白酶Caspase-10。EPL组患者蜕膜组织Caspase-10蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。EPL组患者蜕膜组织Caspase-10在蜕膜细胞、腺上皮和腔上皮细胞中强阳性表达,而在对照组中弱阳性表达,并且主要表达在细胞的胞质中。EPL组患者蜕膜组织Caspase-10表达强度较对照组高(P<0.05)。结论 凋亡相关蛋白酶Caspase-10在EPL患者蜕膜组织中的表达上调,Caspase-10或参与EPL发生、发展。

滋养细胞的内质网应激在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用

目的探讨滋养细胞内质网应激在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）孕妇胎盘组织的作用。方法收集2015年1月至12月在浙江大学医学院附属妇产科医院单活胎、初产分娩的孕妇61例，其中ICP孕妇31例（ICP组），健康孕妇30例（对照组）。免疫组化法检测两组孕妇胎盘组织滋养细胞中葡萄糖调节蛋白78（GRP-78）的表达部位和表达水平；透射电镜观察两组孕妇胎盘组织滋养细胞、未处理及100μmol／L甘胆酸处理24h后的滋养细胞系Swan71细胞中内质网超微结构的变化；逆转录（RT）-PCR技术和蛋白印迹法检测不同浓度（分别为0、25、50、100μmol／L）的甘胆酸处理24h后的Swan71细胞中GRP．78mRNA和蛋白的表达水平。结果（1）免疫组化法：两组孕妇胎盘组织的滋养细胞中均可检测到GRP-78蛋白的表达，GRP．78蛋白主要表达于滋养细胞的胞质。与对照组孕妇（7．8±1．3）比较，ICP组孕妇绒毛细胞中GRP．78蛋白的表达水平（13．2±2．4）升高，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）透射电镜：①两组孕妇的绒毛细胞：对照组孕妇的胎盘组织中滋养细胞内可见发育良好的微绒毛与内质网，内质网体积无明显增大，无扩张、肿胀变化；ICP组孕妇的胎盘组织中滋养细胞的微绒毛消失，内质网腔明显扩张，内质网水肿、体积增大、液泡化，且内质网脱颗粒现象明显。②Swan71细胞：未处理的Swan71细胞内可见发育良好的微绒毛与大量的内质网，内质网无扩张、肿胀变化；100μmol／L甘胆酸处理24h后的Swan71细胞内质网病变弥漫，显著扩张，细胞质呈筛状外观。（3）RT—PCR技术与蛋白印迹法：①RT-PCR技术：用0（生理盐水）、25、50、100μmol／L的甘胆酸处理24h后的4组Swan71细胞中GRP-78mRNA的表达水平分别为1．01±0．17、2．17±0．16、5．47±0．36、5．65±0．82，50、100μmol／L甘胆酸处理细胞分别与生理盐水处理细胞比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。②蛋白印迹法：4组细胞中GRP-78蛋白的表达水平分别为1．01±0．04、1．17±0．15、1．33±0．13、1．73±0．13，50、100μmol／L甘胆酸处理细胞分别与生理盐水处理细胞比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论ICP孕妇胎盘组织滋养细胞中内质网较正常孕妇有明显的扩张及肿胀性改变；ICP孕妇的绒毛细胞中GRP．78蛋白的表达水平较对照组孕妇明显升高。甘胆酸可引起滋养细胞内质网肿胀，致GRP-78mRNA和蛋向的表达水平升高。滋养细胞的内质网应激是ICP胎盘的重要病理生理表现。