不同抗性松树与松材线虫互作中H_2O_2及其氧化酶活性的差异

为探讨不同抗性松树接种松材线虫后过氧化氢(H2O2)、氧化酶活性变化差异与其抗性间的关系,对火炬松、马尾松和黑松接种松材线虫后针叶内H2O2含量、POD和APX酶活性动态变化进行了研究。结果发现,黑松和马尾松在接种早期(接种4 h后)针叶内H2O2含量(分别为(470.01±47.20)μmol/g和(232.33±9.42)μmol/g)远高于火炬松((145.46±11.86)μmol/g),但在接种72 h后,火炬松针叶内H2O2含量上升幅度较大,且在达到峰值后下降幅度比黑松和马尾松的小。3种松树接种松材线虫后的POD和APX酶活性均出现两次高峰值,峰值从大到小均为:黑松、马尾松、火炬松,且在达第1次活性高峰时感病松树上升快,在达第2次活性峰时抗病的火炬松上升快。这表明不同抗性松树接种松材线虫后,其体内H2O2含量、POD和APX酶活性变化差异与其抗性存在密切关系,H2O2含量的积累程度对松树抗病性具有重要的影响。

不同松树感染松材线虫后NO和核酸酶变化与其抗病性的关系

以黑松、马尾松和火炬松为研究对象,对其接种松材线虫后4,12,24,48,72,96和120h的NO和核酸酶的活性进行测定。3种松树接种松材线虫后,针叶内NO平均含量的积累为火炬松<马尾松<黑松,这种差异在12～48h尤为明显;48h后较其割伤处理(CK1)的增加幅度为火炬松>马尾松>黑松。同时3种松树接种后的核酸酶变化趋势存在差异,单链核酸酶活性在4～48h为火炬松>马尾松>黑松,而火炬松双链核酸酶活性在4～96h时却一直低于马尾松和黑松,这表明不同松树体内单链或双链核酸酶的活性变化与其抗病性有关。且3种松树在接种松材线虫后,表现出症状的时间顺序为黑松最早,马尾松次之,火炬松最晚。这表明NO和核酸酶的变化与松树感染松材线虫后的病程发展密切相关。

不同松树与松材线虫互作中超氧自由基差异与病变的关系

为探讨松树感染松材线虫后超氧自由基(O2.-)动态变化与寄主组织病变的关系,对黑松、马尾松和火炬松与松材线虫互作中的O2.-、超氧化物歧化酶(SOD)及组织病理学变化进行了研究。结果表明,3种松树在接种早期(接种后4 h)O2.-含量增幅和SOD活性大小依次为:火炬松、马尾松、黑松,且抗性松树上升幅度大,抗性松树受害较感病松树轻;至接种后期(接种后72 h至120 h)3种松树体内O 2.-含量和SOD活性从高到低依次为:火炬松、马尾松、黑松,火炬松病程发展较黑松和马尾松慢(马尾松慢于黑松),受害轻。这表明不同抗性松树感染松材线虫后其体内O 2.-和SOD酶活变化与寄主组织病变密切相关,超氧自由基可能是松树受松材线虫侵染后介导抗病信号转导的重要信号物质。

建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒联合免疫胶体金试纸条的研制及应用

为了实现兰花种植苗圃和口岸一线直接检测样品中建兰花叶病毒Cymbidium mosaic virus(CymMV)和齿兰环斑病毒Odontoglossum ringspot virus(ORSV)的目的,我们研制了上述两种病毒联合免疫胶体金检测试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记单抗C10并固定于胶金垫上;将抗体5B7和4F3分别固定于硝酸纤维素膜上作为检测线,将羊抗鼠抗体包被固定于硝酸纤维素膜上作为质控线,经优化后组装胶体金试纸条。结果表明研制的联合试纸条特异性强,能够在10min之内同时检出两种病毒,操作简便。对两个种植苗圃的93份兰花样品进行实际检测所得结果与ELISA的检测结果符合性好(Kappa值分别为84.6%和86.7%),能满足兰花样品中建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的初筛要求。

行动导向教学法在中职园林专业教学中的应用

通过中职园林专业教学中应用"行动导向教学"的教学案例——"园林植物病虫害防治"课程中"农药药剂稀释配置及使用"实训项目的开展,阐述行动导向教学法教学设计的要点。在整个教学设计过程中,以模拟情景的方式,让学生身临其境,提升实践能力;以学生为主体,提高学生学习的参与度;就地取材,充分利用现有的实验条件;综合应用多种教学手段,提升学生综合素质。

美国多花黑麦草种子中致死粒线虫的检疫鉴定

致死粒线虫(Anguina funesta)是具有重要经济意义的粒线虫,被多国列入检疫性有害生物名录。2021年,上海口岸从来自美国的多花黑麦草(Lolium multiflorum)种子中截获一种粒线虫属线虫,但在该样品中仅分离得到幼虫,无法准确鉴定。本研究运用形态学与分子生物学相结合的方法对分离得到的幼虫进行鉴定。采用28S通用引物扩增该线虫序列,测序获得742 bp的序列,与GenBank中登录的致死粒线虫相似性达100%;采用ITS通用引物对ITS区扩增并测序,获得778 bp的序列,与GenBank中登录的致死粒线虫相似性达99.86%~100%。基于28S及ITS区序列构建的系统进化树均显示,该线虫与致死粒线虫位于同一进化枝上。综合形态学特征及分子鉴定结果,将该群体鉴定为致死粒线虫。这是我国口岸首次报道截获该线虫,本研究将为口岸检疫部门鉴定该线虫提供技术参考。

上海市绿篱植物常见病虫害的发生特点及防治方法

绿篱在园林中具有诸多作用,而绿篱种植设计多密植,在生长过程中常受到修剪,因此多受病虫害侵染,影响景观效果的呈现。该文对上海地区常见的绿篱植物病虫害发生状况进行调查,介绍其防治方法,旨在为上海市绿篱植物病虫害防治工作提供参考。

ROS信号分子及其在植物抗病反应中的作用

综述了ROS在植物抗病反应中的机理及作用。

鸢尾种苗中截获的草莓滑刃线虫形态和分子鉴定

草莓滑刃线虫是一种重要的叶和芽寄生线虫,可侵染多种重要花卉、经济作物,被列入我国检疫性有害生物名录。目前,草莓滑刃线虫的鉴定以形态学鉴定为主,但一线口岸常分离不到雌虫,鉴定困难。本研究采用形态特征和分子特征相结合的方法对草莓滑刃线虫进行鉴定:对鸢尾种苗中截获的滑刃属线虫群体雌虫、雄虫进行形态观察和形态测计并与已报道文献进行比较;PCR扩增该群体的rDNA-ITS区并测序,构建基于ITS序列的系统发育进化树;采用草莓滑刃线虫特异引物对该群体DNA样本进行扩增。结果表明:该群体与草莓滑刃线虫俄罗斯种群的测量值相接近;系统进化关系分析显示,该群体与NCBI公布的草莓滑刃线虫均处于同一进化支;采用草莓滑刃线虫特异引物PCR扩增可产生片段大小为169 bp的目的条带。

进境大豆品质检验方法比较分析

为明确进境大豆品质检验中适宜使用的检验方法,本研究运用统计分析方法,比较分析4种常用方法对20批次大豆样品的“杂质”、“损伤粒”、“破碎粒”等感官品质项目的测定结果。结果表明:在杂质检验中CGC标准与我国国家标准、行业标准结果间的差异显著,我国标准比CGC标准高1.16%。行业标准比CGC标准高1.08%,建议在非加拿大产大豆检验中谨慎使用CGC标准。FGIS标准与行业标准无显著差异,建议优先使用FGIS标准以提高检验效率。在损伤粒检验中,CGC标准较我国国家标准高0.74%。CGC标准检验结果较行业标准高0.71%,建议进出口企业在贸易初始通过事先约定检测方法,以降低贸易纠纷风险。在破碎粒检验中FGIS标准与CGC标准间无显著差异,FGIS标准与我国国家标准间无显著差异,建议在进口贸易中逐步使用我国国家标准替代长期使用的FGIS标准。

致死粒线虫重组酶聚合酶扩增检测方法的建立

致死粒线虫是一种传播扩散风险较高的外来有害生物,对畜牧业生产具有严重危害。为实现致死粒线虫的高效准确鉴定,本研究根据致死粒线虫核糖体28S rRNA基因D2/D3片段的保守区域设计特异引物,建立了致死粒线虫的RPA检测方法。结果表明:建立的RPA检测方法对致死粒线虫具有好的特异性,扩增出230 bp的特异性目标片段,检测灵敏度可达1/160条线虫。该方法检测时间短、特异性好、灵敏度高,适用于致死粒线虫的快速检测。

黑松与松材线虫互作早期NO应答信号与外在因子的关系

松树与松材线虫互作中,NO作为重要的信号分子参与调控寄主对松材线虫入侵的应答反应,但松材线虫入侵寄主后,是松材线虫还是其代谢产物激发寄主体内NO应答信号尚不明确.本研究用松材线虫活体、线虫分泌物、虫体研磨液等分别接种黑松,研究接种早期黑松体内NO合成酶(NOS)活性和NO含量变化与后期松树症状发展的关系.结果表明:采用虫体研磨液、线虫分泌物处理后黑松体内NOS活性和NO含量均升高;各处理黑松外部均出现感病症状.说明在松树与松材线虫互作中,除线虫活体作用外,线虫体或分泌物中的物质也可激发松树体内NO应答信号的表达,诱导下游应答响应的发生,导致黑松感病.15～25℃条件下,随着温度升高,接种黑松体内NOS活性增强,NO含量升高,感病症状出现较早;随着干旱胁迫程度的增强,接种黑松体内NOS活性、NO含量大致呈逐步升高趋势,感病症状也较早出现.在一定范围内,温度升高和干旱程度加剧可诱发感病黑松体内NO相关信号途径表达增强,并加速病程发展.表明在一定条件下,高温干旱环境有利于松材线虫病的发生可能与寄主体内NO应答信号增强有关.

H_2O_2在黑松-松材线虫早期互作应答中的调控作用

松材线虫病已对中国森林资源以及生态环境造成严重破坏和威胁.近年信号分子H2O2在植物病害中的作用已成为研究热点,然而对松树-松材线虫互作中H2O2方面的功能研究不多见.本实验以三年生黑松(Pinus thunbergii)为材料,通过施用外源H2O2供给剂和抑制剂(AsA)探讨H2O2对松树-松材线虫互作体系中抗氧化保护酶、苯丙烷代谢途径的调控作用;同时对黑松感染松材线虫后体内H2O2产生的酶途径加以研究.结果表明,外源H2O2处理提前诱发了染虫黑松体内H2O2含量大幅度升高;AsA可在接种早期抑制染虫黑松体内H2O2含量,推迟了H2O2大量积累的发生.同步测定染虫黑松体内相关酶活性发现,外源H2O2处理后,染虫黑松体内APX和CAT活性下降幅度更大,MDA含量、PAL酶活性均提前积累;而外源AsA处理则推迟染虫黑松体内APX和CAT活性大幅下降的发生,延迟且削弱了MDA含量大量积累的发生和累积程度,PAL酶活性升高也滞后.同步观察黑松感病症状,发现H2O2处理组染虫黑松发病最快;仅接种松材线虫处理组次之;AsA处理组染虫黑松发病最慢.这表明,受松材线虫侵染后,黑松体内大量累积的信号分子H2O2可影响寄主体内抗氧化保护酶活性、苯丙烷代谢途径的表达,进一步影响了感病症状的表达.对黑松体内H2O2产生酶来源研究发现,黄嘌呤氧化酶(XO)抑制剂别嘌呤醇和NADPH氧化酶抑制剂二亚苯基碘(DPI)处理均能明显抑制黑松体内H2O2含量,说明XO和NADPH氧化酶均是黑松与松材线虫互作体系中内源H2O2合成的重要酶.

一种牧草种子中粒线虫虫瘿的快速分离方法

为实现牧草种子中粒线虫虫瘿的快速分离,本文采用一种快速分离法进行分离。结果表明:该快速分离方法与直接挑取虫瘿法相比,虫瘿检出率无明显差异,工作时间由平均25 min降低至5 min,大大节省了虫瘿分离时间。本方法成本低廉,操作简便,适用于牧草种子中粒线虫虫瘿的日常检测。

无花果树苗中截获的无花果孢囊线虫形态和分子鉴定

上海口岸从旅客携带进境的树苗中分离到1种孢囊线虫属的2龄幼虫,通过形态特征和分子特征分析,鉴定为无花果孢囊线虫(Heterodera fici Kirjanova,1954)。该2龄幼虫的主要形态特征为:体长409.9~454.4μm;唇环3个;口针发达,长22.6~24.0μm,基部球圆形略向前倾斜;侧线4条;尾长圆锥形,末端细圆,尾部透明区长24.7~30.5μm,约占尾长的1/2。序列分析显示其ITS区序列与GenBank中无花果孢囊线虫的序列相似性为99.48%~99.90%,序列差异为1~5 bp。系统发育分析显示该线虫与无花果孢囊线虫处于一个聚类组内。这是我国口岸首次报道截获无花果孢囊线虫。

美国画眉草种子中维氏粒线虫的鉴定

2013年,上海口岸从来自美国的画眉草种子中检测到一种疑似粒属线虫的幼虫,并从草籽中收集大量虫瘿。序列分析显示截获的维氏粒线虫ITS序列与Gen Bank中维氏粒线虫(登录号为AF396317和AM888393)的序列相似性为99.85%,序列差异为1 bp。系统进化树中截获线虫样品与维氏粒线虫处于一个聚类组内。经形态学特征观察,并结合ITS序列分析,将截获的虫瘿及线虫鉴定为维氏粒线虫(Anguina wevelli)。这是我国口岸首次报道截获该种线虫。

剪股颖粒线虫环介导等温扩增检测技术研究

剪股颖粒线虫(Anguina agrostis)是牧草上重要的病原线虫,被我国列入检疫性有害生物名单。本研究根据剪股颖粒线虫的rDNA-ITS区序列设计特异性的引物和探针,建立了环介导等温扩增和核酸试纸条检测技术。结果表明,该LAMP-核酸试纸条检测法的特异性强,供试2个剪股颖粒线虫虫株均为阳性,其他23种线虫均为阴性;灵敏度高,最低检测限为3.15ng,检测灵敏度达1/400条2龄幼虫。该法操作简单,对设备要求低,适合口岸推广应用。

致死粒线虫

致死粒线虫(Anguina funesta)对草业、畜牧业危害极大,被认为是经济意义最大的一种粒线虫。该线虫主要寄主是硬直黑麦草和多花黑麦草,不仅造成寄主植物地上部分产量严重下降,还可传播拉塞氏杆菌(Rathayibacter toxicus),该细菌可侵染多种牧草并产生毒素,牲畜误食受污染的牧草会中毒死亡。致死粒线虫在我国尚未有分布记录,多个国家将其列为检疫性有害生物。本文介绍了致死粒线虫的鉴定方法、生物学特性、经济重要性、国际检疫地位。

进境番茄种子中番茄褐色皱纹果病毒的检测鉴定

番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)是烟草花叶病毒属新成员,番茄和辣椒是其主要寄主,被中国、欧盟、美国、澳大利亚、土耳其、新西兰、智利、阿根廷、俄罗斯、哈萨克斯坦、泰国等国家或地区纳入需检疫的有害生物。我们利用电镜观察、RT-PCR和SYBR Green实时荧光RT-PCR首次从进境的番茄种子检出ToBRFV。电镜观察显示该样品所携带的病毒粒子形态符合烟草花叶病毒属病毒的粒子特征,RT-PCR扩增出特异的条带,实时荧光RT-PCR有明显的扩增曲线,PCR产物测序结果与ToBRFV(GenBank登录号MK133093.1和KT383474.1)同源性高达99.65%。

北美森林新病害——山毛榉叶线虫病

2012年,北美地区发生了一种由山毛榉李氏垫刃线虫麦肯恩亚种(Litylenchus crenatae mccannii)引起的森林新病害——山毛榉叶线虫病,病情蔓延迅速,已扩散至美国和加拿大30个县。病原为害山毛榉属植物,可造成病树成片死亡。由于山毛榉是北美温带阔叶林的主要构成树种和重要用材树种,新病害已引起美国农业部的高度重视并采取积极的应对措施。我国分布5种山毛榉属植物(均为特有种),是我国南方森林的主要组成树种。鉴于我国每年从北美进口大量山毛榉木材,病原线虫存在随进境木材传入国内的巨大风险。因此,检疫部门应开展风险评估,口岸应针对性开展山毛榉叶线虫病的检测。本文主要介绍了山毛榉叶线虫病的发生历史、分布范围、为害症状、病原线虫形态学特征、生活史、传播途径、分子检测方法等方面的信息,以期为口岸检疫工作提供参考。